HPLC法·酶法和间苯二酚法检测生物制品中唾液酸含量方法学比较

[目的]比较高效液相色谱法(HPLC)、酶法及间苯二酚法测定唾液酸浓度的准确性、灵敏性和线性范围,探讨3种方法的实际应用特点。[方法]建立HPLC、酶法和间苯二酚法测定唾液酸浓度的方法,并分别使用3种方法同时测定同种生物制品中的唾液酸浓度。[结果]HPLC法线性范围为0.3~2 500.0μg/mL,回收率为98.0%~99.2%,日内、日间RSD分别为0.8%~1.4%和1.6%~1.8%。酶法线性范围为0.6~20.0μg/mL,回收率为102.0%~106.5%,日内、日间RSD分别为3.5%~4.2%和4.0%~4.6%。间苯二酚法线性范围为39~1 250μg/mL,回收率为98.2%~100.2%,日内、日间RSD分别为2.9%~3.3%和3.0%~3.5%。[结论]3种方法回收率和精密度差异无显著性,但高效液相色谱法更加简单、便捷、成本低廉、灵敏度高且线性范围较宽,广泛适合生物制品中唾液酸含量测定。     

HPLC和UV法对比测定蚊不叮霜中VB1的含量

【目的】 对比研究高效液相色谱法(HPLC)和紫外可见分光光度法(UV)测定蚊不叮霜中维生素B₁含量。为高效、快速、准确测定蚊不叮霜中维生素B₁的含量奠定基础。【方法】 UV法的检测波长为246 nm,采用百分吸收系数法计算维生素B₁的含量;HPLC法检测波长为267 nm,色谱柱选用C18柱。【结果】 UV法在7.47～14.94 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 3),精密度实验RSD=0.30%,重复性实验RSD=1.04%,平均回收率105.13%,RSD=1.72%,样品在处理后30 min内稳定(RSD=0.91%);HPLC法在4.85～11.31 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999),精密度实验RSD=0.28%,重复性实验RSD=0.90%,平均回收率101.77%,RSD=1.93%,样品在处理后12 h内稳定(RSD=0.39%)。【结论】 HPLC法测得三批样品的平均含量分别为8.39、8.39、8.45 mg/g;UV法测得三批样品的平均含量分别为8.73、8.70、8.77 mg/g。UV法及HPLC法的精密度、重复性均较好,但UV法测得含量及回收率均偏高,测定准确度不如HPLC法,且UV法稳定性较差,故最终确定采用HPLC法测定蚊不叮霜中维生素B₁的含量。     

超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量

利用超高效液相色谱法同时测定柑橘(Citrus reticulate Bance)果肉中的玉米素、赤霉素、吲哚乙酸和脱落酸的含量。以C8色谱柱,甲醇-0.1%冰乙酸为流动相梯度洗脱,检测波长为262nm,流速0.22mL/min。结果表明,玉米素含量在0.14～0.38μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 5,平均回收率为98.7%,RSD为0.99%;赤霉素含量在0.67～1.79μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 3,平均回收率为98.6%,RSD为0.70%;吲哚乙酸含量在0.25～0.67μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 6,平均回收率为99.0%,RSD为0.68%;脱落酸含量在0.036～0.096μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 9,平均回收率为99.1%,RSD为0.61%。该方法简便、快速、精密度高、准确性好,可用于植物样品中激素含量的测定。     

RP-HPLC法测定安石榴苷在大鼠血浆中的浓度及其药动学研究

建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定安石榴苷的血药物浓度,并用于大鼠灌胃后的药动学研究。采用COSMOSIL-Cholester C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),以甲醇-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,检测波长370 nm,柱温40℃,流速1.0 mL/min。SD大鼠单次口服安石榴苷(300mg/kg)后,眼眶静脉丛采血,检测24h内11个时间点血浆中的药物浓度。安石榴苷在2.18～58.00μg/mL范围线性关系良好,定量下限(LLOQ)2.18μg/mL,日内、日间精密度RSD <15%提取回收率为89.67%～115.5 6%。PK Slutions 2.0^TM药动学软件拟合主要药动学参数C_max、T_max、AUC₍(0-t))分别为(26.33±5.65)μg/mL、(1.67±0.52)h和(243.40±111.62)(μg·h)/mL。所建立RP-HPLC法测定安石榴苷的血药浓度简便、准确、专属性强,给大鼠灌服安石榴苷后,其吸收、分布迅速,体内药动学...     

HPLC法对壮瑶药狗仔花中绿原酸和咖啡酸含量的测定

建立一种同时测定壮瑶药狗仔花中咖啡酸和绿原酸含量的HPLC方法。色谱柱为Welch Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;流量为1.0 mL/min;检测波长为327 nm;柱温为25℃。结果表明,绿原酸和咖啡酸分别在47.84～239.2μg/mL(R=0.999 8)、10.05～50.25μg/mL(R=0.999 9)呈现良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.69%、102.10%,RSD分别为0.74%、2.00%。试验建立了HPLC法测定狗仔花中绿原酸、咖啡酸含量的方法,该方法准确、灵敏、可靠,重现性较好,可用于壮瑶药狗仔花的质量控制。     

干热河谷特色植物余甘子中没食子酸含量的测定

建立高效液相色谱法测定干热河谷特色植物余甘子中没食子酸含量的方法,比较余甘子在含量上的差异。色谱条件为Agilent ZORBAX Eclipse XRD-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速0.800 mL/min;进样量5μL,检测波长273 nm;柱温30℃,标准曲线外标法。结果表明:没食子酸在0.015～3.50 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好,R~2=0.9999(n=7),检出限为0.01468μg/mL;精密度良好(RSD=0.23%);稳定性良好(RSD=1.03%);重复性良好(RSD=0.81%);平均加标回收率为100.21%,RSD为1.45%(n=6);对干热河谷5批余甘子中的没食子酸进行含量评价,结果表明:BCYY(宾川盈玉)、BCJY(宾川卷叶)、BCYS(宾川野生)、YMYS(元谋野生)、YJYS(元江野生)余甘子中没食子酸含量分别为3.1972±0.190、0.6687±0.220、0.2166±0.104、0.4251±0.099、0.7098±0.175 mg/g。利用该方法测定余甘子中没食子酸的含量,方法准确可靠,重复性好、精密度高、检出限低、灵敏度高,同时可解决鞣质和粘酸易吸附色谱柱的问题。     

高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱和 防己诺林碱含量

【目的】建立同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的高效液相色谱方法(HPLC),为防己药材质量检测提供有效方法。【方法】用2%盐酸甲醇常温超声30 min提取粉防己碱和防己诺林碱,采用HPLC对江西、安徽、浙江、湖南、福建和广东等不同产地防己药材进行测定。色谱条件:色谱柱Agilent ZORBAX Extend-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.08%三乙胺(75∶25),等度洗脱,进样量8μL,流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长282 nm,运行时间20 min。【结果】粉防己碱和防己诺林碱的线性范围分别为0～6000μg/mL(R2=1.0000)和0～3000μg/mL(R2=0.9999),平均回收率分别为104.99%和90.13%,相对标准偏差(RSD)分别为1.75%和2.70%;粉防己碱和防己诺林碱的稳定性RSD分别为1.06%和0.62%、精密度RSD分别为1.57%和0.06%、重复性RSD分别为1.04%和1.45%。不同产地防己药材中粉防己碱的含量变化范围为0.836%～5.999%,最高的是江西金桥乡株系3,最低的是浙江苏庄株系4;防己诺林碱的含量变化范围为0.507%～2.993%,最高的是广东天子地株系4,最低的是湖南贯塘株系1,RSD均小于5%。【结论】建立的HPLC测定方法简单、稳定性好、精密度高且运行时间短,可同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量,可考虑作为防己药材质量检测的方法。     

HPLC法同时测定养心草中五种成分的含量

建立HPLC法同时测定养心草中5种成分的含量并采用单因素和正交试验筛选最优提取工艺。结果表明,采用建立的HPLC含量测定方法可以同时准确测定5种成分的含量,杨梅苷、芦丁、槲皮苷、槲皮素、山柰酚分别在22～88μg/mL、5～20μg/mL、18～64μg/mL、0.32～1.28μg/mL、0.56～2.24μg/mL,与峰面积线性关系良好,加样回收率在95.61%～107.38%,回收率的RSD为1.37%～4.60%,均符合要求,最优提取工艺为50%甲醇90℃加热回流提取30 min。     

干热河谷特色植物余甘子中没食子酸含量的测定

建立高效液相色谱法测定干热河谷特色植物余甘子中没食子酸含量的方法,比较余甘子在含量上的差异。色谱条件为Agilent ZORBAX Eclipse XRD-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速0.800 mL/min;进样量5μL,检测波长273 nm;柱温30℃,标准曲线外标法。结果表明:没食子酸在0.015～3.50 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好,R²=0.9999(n=7),检出限为0.01468μg/mL;精密度良好(RSD=0.23%);稳定性良好(RSD=1.03%);重复性良好(RSD=0.81%);平均加标回收率为100.21%,RSD为1.45%(n=6);对干热河谷5批余甘子中的没食子酸进行含量评价,结果表明:BCYY(宾川盈玉)、BCJY(宾川卷叶)、BCYS(宾川野生)、YMYS(元谋野生)、YJYS(元江野生)余甘子中没食子酸含量分别为3.1972±0.190、0.6687±0.220、0.2166±0.104、0.4251±0.099、0.7098±0.175 mg/g。利用该方法测定余甘子中没食子酸的含量,方法准确可靠,重复性好、精密度高、检出限低、灵敏度高,同时可解决鞣质和粘酸易吸附色谱柱的问题。     

大青叶中靛玉红HPLC测定方法的建立

为建立大青叶中靛玉红含量测定方法。用Waters Alliance 2695高效液相色谱仪测定,色谱柱:C18(4.6 m×150 mm)柱,流速:1 mL/min,柱温:25℃,进样量:10μL。结果表明,在1.5～24.0μg/mL内靛玉红含量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9);靛玉红溶剂选用氯仿,流动相选用甲醇∶水为75∶25,吸收波长选用289 mm,萃取溶液pH值调至1.0,萃取溶剂选用氯仿,此条件下HPLC法测定大青叶中靛玉红,精密度高(RSD=0.64%,)加样回收率为97.33%,重现性好(RSD=0.54%)。     

复方阿莫西林纳米乳制剂的安全性评价

通过急性毒性试验、皮肤刺激性试验和细胞毒性试验,对复方阿莫西林纳米乳(AMX-LH-NE)进行体内外安全性评价.结果表明,AMX-LH-NE毒性低,无法测出其半数致死量,小鼠的最大耐受量倍数为426倍;无论是单次给药,还是多次给药,AMX-LH-NE对完整皮肤和破损皮肤均无明显刺激性;AMX-LH-NE为10～150 mg.L-1时,对乳腺上皮细胞的生长和形态无明显影响,其毒性分级属于0或1级,即对乳腺上皮细胞无毒性作用.     

HPLC在黄芡降糖片质量控制中的应用

目的建立黄芡降糖片的准确定量质控方法.方法采用高效液相色谱法（HPLC）,以YMC-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）为色谱柱,以乙腈-水（48∶52）（含0.34%磷酸二氢钾和0.17%十二烷基硫酸钠）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为265 nm,柱温为25℃,测定黄芡降糖片中主要成分盐酸小檗碱的含量.结果盐酸小檗碱在0.64～6.40μg内线性关系良好,r=0.999 5,加样回收率为99.86%,RSD=1.01%.结论该方法操作简单、方便,重现性好,用于控制黄芡降糖片的含量,可信度高.     

高效液相色谱法测定中药复方透皮软膏中绿原酸和咖啡酸的含量

建立了同时测定中药复方透皮软膏中绿原酸和咖啡酸含量的高效液相色谱方法.采用Shim-pack VP-ODS( 150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈和0.1％磷酸溶液(体积比为9∶91)为流动相,等度洗脱,327 nm处检测,绿原酸和咖啡酸分别在0.078～0.786 μg/mL(R2=0.9997)和0.042～0.420 μg/mL (R2=0.999 5)范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.95％和100.06％,RSD分别为0.42％和1.35％.结果表明,此方法灵敏度高、操作简便、结果准确、重复性好,可用于中药复方透皮软膏中绿原酸及咖啡酸含量测定.     

HPLC测定方便榨菜中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸

建立高效液相色谱法同时测定方便榨菜中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸5种食品添加剂的检测方法。采用高效液相色谱法,Waters Symmetry Shield C18（150mm×4．6mm,5μm）色谱柱进行分离,流动相为0．02mol／L乙酸铵缓;中溶液：甲醇（95：5,V/V）,流速1．0mL／min,检测波长220nm,一次直接进样,同时测定5种食品添加剂。各物质在0．50～100．0mg＆g范围内呈良好的线性关系,相关系数为0．9990～0．9999,精密度良好,加标回收率92．5％～98．8％,RSD〈3％。该方法准确度较高,重现性好,操作简便,能在20min内将5种添加剂完全分离,适用于大批量方便榨菜中常用食品添加剂的日常检测。     

川黄柏中盐酸小檗碱HPLC测定优化及其抑菌活性评价

为建立高效液相色谱（HPLC）测定川黄柏结晶物中盐酸小檗碱含量的优化方法，并评价川黄柏对耐药性细菌的抑制活性，对川黄柏提取物进行结晶处理后，通过对流动相及检测条件的优化确定最优检测方法；用结晶物对耐药性菌株进行体外抑菌试验评价抑制活性。结果表明，检测最佳条件：流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（0.1 g十二烷基硫酸钠每100 mL磷酸溶液），检测波长为265 nm，流速1 mL·min-1，柱温30 ℃；当盐酸小檗碱浓度在103~515 mg·L-1之间时，与各自对应峰面积积分值呈较好的线性关系（R2=0.999 7）；对该条件下测定过程进行精密度、稳定性、重复性试验检测，RSD分别为0.49%、1.23%、0.29%，表明试验方法准确；平均加样回收率为97.84%~98.06%，RSD为0.44%~1.00%，说明检测方法准确有效。抑菌活性试验发现川黄柏结晶物对耐药性金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)均有很好的抑制效果。优化方法安全、快速、精确、有效，可用于黄柏药材中盐酸小檗碱的分析测定；川黄柏中盐酸小檗碱具有很好地抑菌作用。研究拓宽了对抗耐药性细菌的天然产物种类，为其临床应用和科学研究奠定基础。     

连翘花总黄酮含量的分光光度法测定及其对NO2-清除作用

利用不同溶剂提取连翘花中总黄酮,分光光度法测定了其中总黄酮含量,并研究了其对亚硝酸盐的清除能力.结果表明:连翘花总黄酮最佳提取试剂为50%乙醇溶液,含量测定最佳显色体系为NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色体系,最佳测定时间为显色反应后20~40 min范围内,测定方法精密度RSD=0.67%(n=5),加标回收率为102.67%(RSD=1.16%),利用该法测得连翘花总黄酮含量为12.74%(RSD=2.71%,n=5);在模拟胃液条件下,连翘花总黄酮浓度从8.00 μg/mL增加至96.00 μg/mL时,清除率从(27.69±2.10)%逐渐增加至(96.08±0.90)%,IC50值为18.05 μg/mL,该测定方法简便可靠,连翘花总黄酮对亚硝酸盐具有很强的清除作用.     

精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的测定

建立了精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的HPLC检测方法.采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水-冰乙酸(体积比为20∶80∶0.5)为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为249 nm,进样量10 μL,外标法定量,结果显示,该法专属性好、简便、快速、准确、重现性好,适合于精制银翘解毒片的质量分析.对乙酰氨基酚在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系,R2=0.999 9(n=5),平均回收率为96.2％,RSD为8.0％(n=9).     

紫外分光光度法测定瑞香狼毒中总香豆素类成分的含量

采用紫外分光光度法测定瑞香狼毒中总香豆素的含量,以补骨脂素为标准品,测定波长为294 nm。结果表明,补骨脂素在4～20μg/mL范围内浓度与吸光度线性关系良好(r=0.9997),精密度RSD为0.06%,稳定性RSD为0.57%,重复性RSD为2.07%,回收率为98.42%～101.34%。该方法准确、快速、重复性好,可用于瑞香狼毒中总香豆素含量的测定。     

紫外高效液相色谱法检测牛奶中盐酸环丙沙星残留

建立了检测牛奶中盐酸环丙沙星残留的高效液相色谱法,其检测限和定量限分别为50μg／L和100μg/L;在100、150、200μg/L浓度添加范围内,回收率为75％-81％,变异系数〈10％;标准溶液在2．50—160．0μg/L的浓度范围内线性关系良好。表明本方法简单准确,适应于牛奶中盐酸环丙沙星的检测,便于推广。