高效液相色谱法同时测定防己药材中粉防己碱和 防己诺林碱含量

【目的】建立同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的高效液相色谱方法(HPLC),为防己药材质量检测提供有效方法。【方法】用2%盐酸甲醇常温超声30 min提取粉防己碱和防己诺林碱,采用HPLC对江西、安徽、浙江、湖南、福建和广东等不同产地防己药材进行测定。色谱条件:色谱柱Agilent ZORBAX Extend-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.08%三乙胺(75∶25),等度洗脱,进样量8μL,流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长282 nm,运行时间20 min。【结果】粉防己碱和防己诺林碱的线性范围分别为0～6000μg/mL(R2=1.0000)和0～3000μg/mL(R2=0.9999),平均回收率分别为104.99%和90.13%,相对标准偏差(RSD)分别为1.75%和2.70%;粉防己碱和防己诺林碱的稳定性RSD分别为1.06%和0.62%、精密度RSD分别为1.57%和0.06%、重复性RSD分别为1.04%和1.45%。不同产地防己药材中粉防己碱的含量变化范围为0.836%～5.999%,最高的是江西金桥乡株系3,最低的是浙江苏庄株系4;防己诺林碱的含量变化范围为0.507%～2.993%,最高的是广东天子地株系4,最低的是湖南贯塘株系1,RSD均小于5%。【结论】建立的HPLC测定方法简单、稳定性好、精密度高且运行时间短,可同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量,可考虑作为防己药材质量检测的方法。     

茉莉酸甲酯和生长素对苦玄参苷积累的影响

【目的】研究植物生长调节物质对人工种植苦玄参中苦玄参苷积累的影响,为苦玄参人工种植化学调控措施的制定提供参考。【方法】采用不同浓度的茉莉酸甲酯(MeJA)和生长素(IAA)对苦玄参植株进行叶面喷施和浸根处理,测定其苦玄参苷IA、IB及苦玄参总苷积累量。【结果】MeJA叶面喷施和浸根处理均以20 mg/L对苦玄参苷IA的调控效果最佳,此时苦玄参苷IA积累量最高,分别达0.63%和0.62%,均显著高于清水对照(CK)(P<0.05,下同)。2 mg/L MeJA叶面喷施对苦玄参苷IB的促进作用最强,随MeJA浓度增加其促进作用减弱;浸根处理时,随MeJA浓度增加其促进作用逐渐加强,至20 mg/L时苦玄参苷IB积累量达峰值0.34%。两种处理方式下,苦玄参总苷积累量均在MeJA浓度为20 mg/L时最高,叶面喷施整体优于浸根处理。 IAA叶面喷施时,随其浓度增加,苦玄参苷IA积累量先降低后升高,浓度为100 mg/L时苦玄参苷IA积累量最高,达0.68%,显著高于CK和其他浓度处理;浸根处理时,苦玄参苷IA积累量的变化趋势与叶面喷施相反,浓度为10 mg/L时促进作用最强,随IAA浓度增加苦玄参苷IA积累量逐渐降低。两种处理方式均以IAA 50 mg/L对苦玄参苷IB的促进作用最强。 IAA对苦玄参总苷积累量的影响与其对苦玄参苷IA的影响趋势相似,叶面喷施时100 mg/L的促进作用最强,浸根处理则以50 mg/L时苦玄参总苷积累量最高。两种处理方式相比,IAA浸根处理优于叶面喷施。【结论】MeJA和IAA均可通过叶面喷施和浸根处理促进苦玄参苷的积累,其中,MeJA宜选择20 mg/L进行叶面喷施, IAA宜选择50 mg/L进行浸根处理。     

苦玄参育种材料遗传多样性SSR分析

[目的]探索苦玄参育种材料的遗传多样性及亲缘关系,为苦玄参育种资源的选择及遗传改良提供参考依据.[方法]利用SSR分子标记,分析12份苦玄参育种材料的基因多样性指数(Nei)、Shannon多态性信息指数(Ⅰ)、多态性百分率(P)及各材料间的遗传距离,并基于遗传距离对其进行聚类分析,以明确该育种材料的遗传多样性和亲缘关系.[结果]17对SSR引物共扩增出73个等位基因,平均每对引物4.3个.各引物间P变化范围为8.33%~100.00%,平均60.78%;多态信息量(pIC)变化范围为0.0767~0.7598,平均0.5184.供试材料遗传多样性的平均Nei=0.3002、I=0.4162、P=59.81%,其中xyj01、xyj06和ytL09种质Nei、I和P最高,分别为0.3529、0.4893和70.59%;Lxj 12种质Nei、I和P最低,分别为0.2059、0.2854及41.18%.ytl09和zgb03 2份种质间遗传距离最近,仅0.0929.基于遗传距离的聚类分析结果表明,在遗传距离0.4084处可将12份种质分成4个群体,其中wzhjx07、lxj09和xyj01自成一群,其余归为一群.Lxjl2与zgb04、ytll 1与wzhjx09、ytl09与zgb03、wzhjxl2与xyj06和wzhzp22间分别拥有较近的亲缘关系.[结论]供试12份苦玄参种质材料间存在一定的遗传差异,作为育种亲本具有一定的选择价值.     

苦玄参药材中苦玄参苷IA和IB差异积累的影响因素分析

以不同来源苦玄参药材为研究对象,以苦玄参苷I_A和I_B的含量为评价指标,研究不同种质及不同生长条件对苦玄参苷积累的影响。结果表明,不同地理来源材料苦玄参苷I_A和I_B含量存在显著差异,且两种苷的含量变化趋势基本一致;广西凭祥更适合苦玄参苷I_A的积累,云南大部分地区更适合苦玄参苷I_B的积累。紫色花植株苦玄参苷的含量显著高于白色花植株。不同部位,苦玄参苷花苞含量最高,其次为叶,根中含量极少。与梧州相比,龙州生产的材料苦玄参苷含量更高。不同生育条件下,以2月播种、生育期5个月、7月收获的材料苦玄参苷含量最高。