不同保存条件下云杉八齿小蠹总DNA提取方法的比较分析

[目的]探讨云杉八齿小蠹总DNA的提取方法。[方法]将野外采集的云杉八齿小蠹分别保存在95％的酒精浸泡、自然风干和-40℃条件下,采用改良CTAB法、KAc法、盐析法和SDS法对不同保存条件下样品材料总DNA进行提取。[结果]结果表明,4种方法均可从95％酒精浸泡标本和-40℃冻存样品中提取出高质量的总DNA,相比之下改良CTAB法最为简单、高效、经济。以COI的通用引物对所提取的总DNA进行扩增检测,结果表明,采用改良的CTAB法可以从95％的酒精浸泡样品和-40℃冰存样品DNA中扩增出清晰的单一条带,片段大小700bp,经与已知昆虫的COI片段分子量对比,可以初步断定其为COI片段。[结论]该研究结果为今后小蠹类的分子系统学研究奠定基础。     

优化醋酸钾(KAC)法提取蚜虫基因组DNA

[目的]探索一种简便、有效的单头蚜虫基因组DNA提取方法。[方法]以从不同地区采集的桃蚜为试材,采用改进的KAC法和优化的KAC法提取单头桃蚜的基因组DNA,用紫外分光光度计测定所提DNA的浓度（以OD260/280表示）,用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测所提DNA的纯度,比较2种方法的提取效果;对优化KAC法所提DNA进行PCR扩增和电泳检测。[结果]优化KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的OD260/280为1.6-1.9,浓度为20-50 ng/g;改进KAC法提取的单头蚜虫基因组DNA的OD260/280为1.4-1.7,浓度为8-25 ng/g;来自同一地方桃蚜的基因组DNA PCR扩增产物的电泳条带基本相同。[结论]优化改进的KAC法提取的桃蚜基因组DNA浓度和纯度均较高。     

不同白蚁基因组DNA提取方法的比较

[目的]筛选一种高效、简单、快速、价格合理的白蚁基因组DNA提取方法。[方法]比较了CTAB法、离心柱试剂盒和磁珠法试剂盒提取白蚁基因组DNA的效果。[结果]对于新鲜和保存得当的标本,3种方法提取的DNA质量均较好;但对于保存时间较长,出现降解的标本,磁珠法试剂盒的效果明显优于其他方法。[结论]获得分子检测所需要的最佳DNA提取方法。     

基于改良SDS法的杏基因组DNA提取

为探讨改良SDS法是否适用于杏基因组DNA提取及提取液适宜浓度,以6个品种杏叶片为试材提取DNA,提取液设0.5%、1%、2%三个浓度梯度。检测结果表明,改良SDS法完全适用于杏叶片基因组DNA的提取,3种浓度的提取液均可得到质量较高的DNA,且0.5%为改良SDS法提取杏叶片基因组DNA的适宜提取液浓度。     

单头肿腿蜂DNA提取方法及多个基因片段PCR反应体系建立

[目的]采用分子生物学技术研究肿腿蜂类天敌昆虫近缘种关系。[方法]利用SDS法和试剂盒法2种方法对8种肿腿蜂的单头个体进行基因组DNA提取。[结果]琼脂糖凝胶电泳结果表明,试剂盒法提取的单头肿腿蜂基因组DNA虽成本较高,但提取总量大、提取成功率高、单位浓度高。且利用试剂盒法提取的基因组DNA进行多个基因片段PCR扩增,均得到正确的扩增产物。[结论]该研究为进一步分析肿腿蜂种类及遗传进化关系奠定基础。     

改良SDS法提取石韦基因组DNA的研究

以7种石韦为试材,采用不同SDS提取液浓度(0.5 %、1.5 %、2.5 %)、不同温浴时间(0.5、1、1.5、2 h)对石韦基因组DNA进行提取,并测定基因组DNA的纯度和浓度.结果表明,改良SDS法完全适用于石韦基因组DNA的提取,而且1.5 %为改良SDS法提取石韦基因组DNA的适宜提取液浓度,1～1.5 h为提取的最佳时间.     

3种试剂盒提取烤后烟叶DNA的效果比较

【目的】筛选出简单、快速及高效的烤后烟叶DNA提取试剂盒。【方法】选用3种不同的DNA提取试剂盒提取烤后烟叶DNA,通过比较DNA的纯度和浓度、实时荧光定量PCR扩增Ct值以及凝胶电泳图谱分析的方法,综合评价DNA提取效果。【结果】AxyPrep基因组DNA小量试剂盒所提取的DNA,其纯度和浓度较高,用时短,DNA质量好,适用于小量DNA的提取;磁珠法植物基因组DNA试剂盒提取DNA,其浓度和纯度虽然略高于前者,但用时很长,比较适用于批量DNA的提取;Gene Pure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA,其纯度高、但浓度低。【结论】烤后烟叶DNA的提取推荐使用AxyPrep基因组DNA小量试剂盒。     

药用野生稻基因组DNA提取方法比较

以药用野生稻为试验材料，分别选用传统的CTAB提取法、CTAB改良方法、碱裂解法、磁珠法、吸附柱法、尿素提取法及酶消化法7种方法提取水稻叶片组织DNA,7种方法分别标记为A～G。通过比较这些方法提取出DNA的浓度和纯度，分析这些方法的优劣势。7种方法均能获得较好的基因组，按获得DNA浓度表现为A>B>F>C>G>E>D,纯度表现为D>E>C>G>B>F>A。综合考量DNA的纯度、浓度、提取时间、成本、安全无毒等方面因素，若对基因组的质量要求不高，只是做简单的检测且考虑成本问题，可以选择CTAB提取法、CTAB改良方法和尿素提取法；若需要高纯度基因组，可以选择磁珠法、吸附柱法、碱裂解法；若考虑安全无毒、快速提取及成本可控，可以选择磁珠法、吸附柱法；若样品稀有，可以选用CTAB提取法和CTAB改良法。     

不同保藏处理的蜘蛛标本基因组DNA提取

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构的完整性是进行基因工程各项研究所必须的条件。采用SDS法,对75%乙醇浸泡标本、无水乙醇浸泡标本、-70°C冷冻标本及活体蜘蛛进行了基因组DNA提取。经比较,活体蜘蛛、-70°C冷冻标本和无水乙醇浸泡标本提取效果较好,75%乙醇浸泡标本提取效果最差。     

锥栗毁灭性蛀干害虫小蠹虫的防治

随着大面积连片锥栗基地的建设,小蠹类已成为锥栗重要的蛀干害虫。通过调查,查清了危害浙江庆元锥栗的小蠹虫种类与危害情况,观察和研究了削尾材小蠹和小粒材小蠹成虫的形态特征及生物学特性,提出了用农药＋防水涂料涂刷主干受害部位等防治小蠹虫的方法。     

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法I、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法I提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。     

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较(英文)

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适的DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取的DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法Ⅰ提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。     

5种方法对蝴蝶干标本DNA的提取效果研究

[目的]研究蝴蝶干标本DNA的提取方法。[方法]采用5种不同的方法（SDS法、SDS-巯基乙醇-酚法、CTAB法、饱和NaCl法、SDS-巯基乙醇-氯仿法）对蝴蝶干标本DNA进行提取。[结果]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法适合蝴蝶干标本基因组DNA的提取,并且能成功地应用于蝴蝶线粒体基因COI、CytB和核基因EF-1α的PCR扩增。[结论]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法可以用于研究蝴蝶干标本DNA的抽提,为蝴蝶的分子系统进化研究奠定了基础。     

天牛干标本DNA的提取及RAPD-PCR扩增反应

对标本馆保存多年的天牛标本进行基因组DNA的提取,并成功用于PAPD-PCR的扩增。结果显示基因组DNA的提取与标本的保存时间无直接的联系,而与标本保存的质量关系密切。用同一引物扩增,不同种天牛的扩增片段呈现多态性。     

5种方法对蝴蝶干标本DNA的提取效果研究(英文)

[目的]研究蝴蝶干标本DNA的提取方法。[方法]采用5种不同的方法(SDS法、SDS-巯基乙醇-酚法、CTAB法、饱和NaCl法、SDS-巯基乙醇-氯仿法)对蝴蝶干标本DNA进行提取。[结果]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法适合蝴蝶干标本基因组DNA的提取,并且能成功地应用于蝴蝶线粒体COI、EF-1α和CytB基因的PCR扩增。[结论]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法可以用于研究蝴蝶干标本DNA的抽提,为蝴蝶的分子系统进化研究奠定了基础。     

贺兰山紫蘑菇基因组DNA提取方法研究

[目的]研究适合于贺兰山紫蘑菇（Corinarius rufo-olivaceus）基因组DNA的提取方法。[方法]通过采用改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、SDS法、Doyle-Doyle法和KI法5种基因组DNA提取方法,分别提取贺兰山紫蘑菇的基因组DNA,用DU800核酸蛋白检测仪测定其DNA含量、浓度和纯度,并通过琼脂糖凝胶电泳进行提取结果比较。[结果]5种不同的提取方法均能提取该紫蘑菇的基因组DNA,其中KI法提取的DNA纯度、浓度和得率为最好。[结论]KI法是贺兰山紫蘑菇（C.rufo-olivaceus）DNA提取的适宜方法,该法具有简单、便捷、省时、适合基因组DNA大量提取的特点。     

酚／氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA

[目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚／氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。用NanoDropND-1000微型分光光度计检测DNA浓度和纯度。用0．8％琼脂糖凝胶电泳检验基因组DNA的完整性。以绵羊微卫星位点BM203为扩增位点,分别以F：5’-GG（汀G11：AcAmGTTCCC-3’,R：5’-CTGCTCCCCACTACTCCTTC-3’为上下游引物,进行PCR扩增试验。PCR产物用1．5％琼脂糖凝胶电泳检测．[结果]提取的DNA浓度为（159．90±0．70）ng／μl,A260／A280比值为1．80±0．01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增产物条带整齐、明亮、特导性强,扩增效果好。[结论]该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。     

富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法

半日花(Helianthemum soongoricum)属强旱生植物,其组织富含多糖和多酚等次生代谢物质,采用常规CTAB和SDS等方法提取的半日花基因组DNA由于含有多糖等杂质,无法进行PCR扩增和限制性酶切等试验,为此,在CTAB法的基础上进行了改进。第1步通过向植物组织CTAB提取液中添加高盐和乙醇来沉淀部分多糖,第2步将获得的DNA粗提液,经过CTAB分离溶液沉淀、NaCl溶解、乙醇沉淀等方法,可有效去除半日花组织中的残余多糖等杂质,提取DNA的质量和纯度经凝胶电泳条带清晰、无降解、无多糖等杂质。PCR扩增和限制性内切酶的结果表明,通过改进的方法所获得的DNA,可以进行PCR扩增试验,扩增条带清晰,基因组DNA能被限制性内切酶完全酶切,该方法为后续半日花分子生物学研究奠定了重要基础。     

一种广泛适用于植物基因组DNA提取的方法

[目的]研究植物基因组DNA提取方法,为从植物组织中快速提取基因组DNA提供指导。[方法]在已发表的植物基因组DNA提取方法基础上,对SDS提取法的操作步骤、试剂用量及作用时间进行了优化。[结果]初步建立了一种广泛适用于各类植物及植物多种组织器官的基因组DNA提取方法。所提取的基因组DNA质量较好,满足下一步操作的要求。[结论]该研究结果为植物基因组DNA的快速提取提供了指导方法。