鞘氨醇单胞菌2-F2将人参主皂苷Re转化为人参稀有皂苷Rh1

从人参根系土壤中分离的菌株2-F2将人参主皂苷Re转化为稀有皂苷Rh1,其转化机理为Re→Rg1→Rh1.进行16S rRNA基因序列的系统发育分析,菌株2-F2与Sphingomonas asaccharolytica IFO15499T在同一分支上,同源性为99.5%.该菌株属于鞘氨醇单胞菌属.     

HPLC-MS/MS法检测三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1的含量

利用HPLC-MS/MS法,建立测定三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1含量的分析方法.方法:色谱柱为BDS HYPERSUL C18(150 mm×2.1 mm,5 μm)柱;流动相:乙腈-水(梯度洗脱);柱温:30 ℃;质谱条件:采用负离子多反应监测方法(MRM)测试;用于定量分析的对照品离子对为:人参皂苷Rb1 m/z 1107.9→783.7,内标物紫杉醇m/z 852.5→525.3.结果:人参皂苷Rb1标准曲线的线性范围为0.159～16.0 μg/mL,精密度和准确度等均符合样品分析的要求.结论:该法准确、灵敏、特异性强,适用于三七茎叶总皂苷及其制剂中人参皂苷Rb1浓度的检测.     

微生物转化人参根总皂苷为稀有皂苷C-K和Rh1

从7年生林下参根部分离的菌株对人参根总皂苷进行微生物转化,结果发现一株霉菌GS1-33能有效地将人参根总皂苷转化为人参稀有皂苷C-K及Rh1.对最佳转化条件进行测定,在水为培养基,pH值为3.0时,菌株GS1-33生成C-K的最大产率为14％,生成Rh1的最大产率为25％.确定人参稀有皂苷C-K是对人参皂苷Rb1、Rc...     

西洋参皂苷对高脂肪食小鼠脂肪和胰脂肪酶活性的影响

通过体外、体内试验研究了西洋参总皂苷、单体皂苷对胰脂肪酶活性及小鼠体重和子宫周围脂肪组织重的影响。体外试验结果表明：西洋参茎叶总皂苷为0．5g/L时，对胰脂肪酶活性的抑制率为90％；人参皂苷Rc，Rb1，Rb2对胰脂肪酶活性均显示很强的抑制作用，当质量浓度为0．5g/L时抑制率分别为100％、96％、97％；体内试验结果表明：西洋参茎叶皂苷对体重影响变化不大，但可以明显降低子宫周围脂肪质量。这说明西洋参茎叶总皂苷和人参皂苷Rc，Rb1，Rb2可以抑制胰脂肪酶活性。因此西洋参茎叶总皂苷的抗肥胖作用可能是由于西洋参总皂苷中的人参皂苷Rc，Rb1，Rb2抑制小肠吸收食物脂肪的结果。     

HPLC-ELSD法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

采用高效液相-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)测定免疫佐剂——三七总皂苷中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的含量,色谱柱Discovery C18(250 mm ×4.6 mm,5μm),采用梯度洗脱,流动相为水-乙腈,流速为1.0 mL/min,柱温30℃.结果显示,三七皂苷R1含量5.19％,人参皂苷Rb1含量32.19％,人参皂苷Rg1含量41.28％,3种皂苷含量之和为78.66％.说明该方法简便、快速、重现性好,可用于控制三七总皂苷的质量.     

微生物转化人参皂苷Rc和Rd的研究

人参皂苷尤其是稀有人参皂苷具有重要的药理活性,但在人参中含量极其稀少.通过运用薄层层析和高效液相色谱分析技术,对4种真菌转化人参皂苷Rc和Rd生成稀有皂苷的代谢作用进行分析,结果显示4种真菌均具有较强转化人参皂苷Rc和Rd的能力.其中,转化人参皂苷Rc的主要代谢途径推测为Rc→Mc1→Mc→CK→PPD;而在转化人参皂苷Rd的过程中可能存在2条代谢途径,其中主要途径推测为Rd→F2→CK→PPD,而另一条途径则由人参皂苷Rd直接转化为Rg3.试验结果为进一步通过优化试验条件积累代谢产物Rg3或CK,以及分离纯化相应的人参皂苷糖苷酶提供了良好基础.     

HPLC-ELSD法测定人参茎、叶、根中7种人参皂苷含量

目的建立适合于人参茎、叶、根皂苷的高效液相色谱-蒸发光散射检测方法（HPLC-ELSD）,同时测定人参茎、叶、根中人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。方法HPLC-ELSD方法,色谱柱：SHIMADZUC185μm（4.6×250mm）,流动相：乙腈-水,梯度洗脱。漂移管温度70℃,载气流速350mi/min。结果人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd分别在0.462～6.48μg、0.678～4.068μg、0.627～6.144μg、0.247～5.48μg、0.378～6.068μg、0.227～6.844μg、0.561～6.88μg呈良好的线性关系。结论该法准确、重现性好,适于人参茎、叶、根皂苷的定量分析。     

不同种类人参茎叶中皂苷成分的比较

[目的]研究人参茎叶、西洋参茎叶和三七参茎叶中人参皂苷的含量及组成。[方法]采用水提法对人参茎叶和西洋参茎叶总皂苷进行提取,再用TLC和HPLC方法对人参总皂苷组成进行分析,对其皂苷成分进行比较。[结果]水提人参茎叶总皂苷的提取率为6.02%,西洋参茎叶总皂苷的提取率为5.01%。3种人参茎叶总皂苷的TLC和HPLC检测结果表明,人参茎叶中主要皂苷为Re、Rg1、Rd、Rc,其中Re、Rg1、Rd皂苷的含量较高,占总皂苷的53.7%;西洋参茎叶中主要皂苷为Rd、Rb3、Re、Rc,其中Rb3、Rd含量较高,占总皂苷的38.3%;三七参茎叶中主要皂苷为Rb3、Rc、Rb1,其中Rb3含量较高,占总皂苷的17.2%。3种人参茎叶PPD/PPT值表明,人参茎叶为33∶37,主要皂苷为原三醇类;西洋参茎叶为50∶12;而三七参茎叶中几乎不含有原三醇类皂苷。[结论]成功的对不同种类人参茎叶总皂苷成分进行了比较,为不同种类人参茎叶的选择和利用提供了依据。     

不同生长模式下人参土壤养分状况与人参皂苷含量的关系

为了评价3种生长模式人参土壤养分供应能力及影响人参皂苷积累的主要养分因子,运用常规农化分析方法和超声提取-高效液相法分别测定土壤养分含量和人参中9种单体皂苷含量.结果表明,人参土壤有机质和速效氮磷钾含量为野山参＞林下参＞园参,土壤有机质含量变异系数为85.6％,属中等变异,土壤全量氮、磷、钾变异系数大于1009,为强变异,结合国家第2次土壤普查养分分级标准可知,人参土壤碱解氮含量为国家5级水平,速效磷为国家2级水平,有效钾含量为641.4 mg/kg,远大于国家1级水平(200mg/kg);野山参和林下参中9种单体皂苷中以单体皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rd和Rg1含量较高,5种单体皂苷显著高于园参(P＜0.05),林下参中单体皂苷含量以15 a生含量最高,其中Rb1、Rc、Rb2、Rd和Rg1分别为20.207、22.865、12.435、17.201和7.770 mg/g,为制定林下参适宜采收参龄提供参考;土壤中有机质、全氮和全磷含量直接影响人参皂苷的积累.不同生长模式下人参土壤养分含量差异较大,以野山参和林下参土壤为参考,科学施加氮、磷肥有助于提高园参品质.     

UPLC法同时测定人参糖中7种人参皂苷

建立同时测定人参糖中7种人参皂苷含量的快速检测方法。采用超高效液相色谱法,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1×50mm,1.7μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速0.5mL/min,柱温35℃,进样量2μL,检测波长203nm。人参皂苷Rg1、Rf、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd均达到基线分离,线性良好,平均回收率分别为98.26%、98.46%、97.00%、103.75%、96.32%、95.71%、95.00%。该方法准确、重现性好,可用于人参糖中人参皂苷含量测定。     

人参细胞悬浮培养中蔗糖和无机盐对皂苷生产的影响

通过研究人参细胞悬浮培养过程中培养基蔗糖浓度、MS浓度、氮浓度及硝态氮与铵态氮比例对细胞生长及皂苷合成的影响,发现在培养基中添加30 g/L蔗糖时,人参细胞合成皂苷能力最强,蔗糖浓度过低（10 g/L）或过高（70 g/L）均不利于细胞干重增加及皂苷积累.MS培养基浓度减半（0.5 MS）或维持原浓度（1.0 MS）,总氮浓度为30 mM时,有利于人参细胞皂苷的合成.MS培养基中硝态氮促进皂苷合成,单独使用硝态氮比与铵态氮混用或铵态氮单独使用更有利于皂苷的合成,皂苷生产量达到最高（158.9 mg/L）.     

人参皂甙Rbl对大鼠神经细胞表达蛋白质组的影响

[目的]研究人参皂甙Rbl对大鼠神经细胞表达蛋白质组的影响。[方法]常规培养大鼠神经细胞,将其随机分为2组,试验组加入5μg/ml Rbl,对照组加入等量的培养基,药物作用20 min,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离提取物,用ImageMaster2D Platinum v5.0软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白质。[结果]通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,试验组的2-DE图谱共检出蛋白斑点418个,其中226个为差异表达的蛋白斑点;经质谱鉴定,与Rbl作用相关的2个差异表达的蛋白斑点包括:细胞色素P-450、光导素样蛋白,它们均属于磷酸化蛋白质。[结论]该研究表明Rbl对大鼠神经细胞的作用极有可能是通过相应的细胞信号转导网络系统来实现的。     

生长素和细胞分裂素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷合成的影响

为探明人参细胞悬浮过程中植物生长调节剂对细胞生长和皂苷合成的影响,调查IBA、NAA、2,4-D单独使用及IBA与BA和IBA与KT混合使用的效果,结果表明,在2,4-D处理中细胞生物量虽然高于IBA和NAA,但总皂苷含量低于IBA和NAA处理;在生长素单独使用处理中,IBA 7 mg/L处理的皂苷生产量最高（72.9 mg/L）.当IBA 7 mg/L与BA或KT混合使用时,促进细胞生长和皂苷合成,其中IBA 7 mg/L＋BA0.5 mg/L和IBA 7 mg/L＋KT 0.5 mg/L处理中,皂苷生产量明显提高,分别达到115.92和120.98 mg/L.因此,在进行人参细胞悬浮培养时,IBA 7 mg/L与BA 0.5 mg/L或KT混用可高效生产人参皂苷,为食品及药品生产提供安全的原料.     

Microbacteriu estmeraromaticum GS514菌株中一种人参皂苷β-葡萄糖苷酶的分离及其性质研究

人参土壤微生物Microbacterium esteraromaticum GS514显示出良好的人参皂苷转化能力.采用DEAE-cellulose DE-52阴离子交换树脂,从人参土壤微生物Microbacterium esteraromaticum GS514中分离一种使人参皂苷Rb1水解为人参皂苷Rd的β-葡萄糖苷酶,并进行酶性质研究.结果表明,该酶分子量约为58.7kDa,在pH值6.5和40℃时显示出最强酶活性.     

三褶虾脊兰无菌播种陕繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplieata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0．5mg／L6-BA、0．1mg／LNAA和1．0g／LAC）、附加物[椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥]及基本培养基（花宝1号、1／2花宝1号、MS和1／2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1／2花宝1号＋0．5mg／L 6-BA＋0．1mg／L NAA＋200ml/L CM＋1．0g／L AC＋20．0g／L蔗糖培养基中培养150d左右可形成原球茎,萌发率超过80％以上;诱导原球茎在1／2MS＋100mL／LCM＋2．0mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4．5;原球茎接种于花宝1号＋0．1mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上分化培养40d后,再转入花宝1号＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋2．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上培养40d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100．0％,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的王褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。     

人参不定根生物反应器培养及其动态学研究

利用5 L气球型气升式生物反应器研究蔗糖和氧化锗浓度对不定根生长和人参皂苷合成的影响,结果表明,当MS+IBA 5 mg/L培养基中加入蔗糖50 g/L时,每个反应器可收获不定根34.5 g(干重),皂苷生产量达到61.1 mg/L,显著好于蔗糖30和70 g/L处理;培养基中加入氧化锗30或60μmol时,促进不定根...     

粪肠球菌F71的增殖培养基优化研究

为达到增殖菌体的目的,对粪肠球菌F71进行了培养基优化正交试验。结果表明,最佳培养基的组成为:胰蛋白胨10 g/L,酵母粉10 g/L,葡萄糖10 g/L,无水氯化钙0.04 g/L,七水合硫酸镁0.019 2 g/L,磷酸氢二钾0.04 g/L,磷酸二氢钾0.04 g/L,磷酸氢钠0.4 g/L,氯化钠0.08 g/L,土豆汁50 g/L,碳酸钙1 g/L,乙酸钠10 g/L,碳酸铵2 g/L,乙酸铵1 g/L,半胱氨酸盐酸盐0.5 g/L,pH值为9,最适培养温度为35℃。用此培养基进行增殖,F71的最高活菌数达到2.78×108 cfu/mL,比基础培养基提高了54.6%。     

人参、西洋参部分种质资源的单体人参皂苷测定分析

应用高效液相色谱法测定了样品的7种人参根部单体皂苷。结果表明,红果人参和黄果人参所含的7种人参单体皂苷总量比橙色系列果实的人参高,其中红果人参7个单体皂苷的总和为20.03g/kg,黄果人参为17.18g/kg,它们的Rg1含量也呈相同趋势。在以根部形态特征为分类依据的人参品种、类型中,大马牙类型的Rg1含量最高,而西洋参Rg1则远低于人参各品种、类型。人参×西洋参杂交1代的Rg1含量与人参各类型相近,Rb1的含量也更接近人参。