海南安诺兰菌根表面消毒方法研究

采用75%乙醇、次氯酸钠溶液浸泡和无菌水洗涤的方法,对海南安诺兰的菌根进行表面消毒,以消毒强度逐步递减的方式,确定最佳分离植物内生真菌的表面消毒强度;同时设置漂洗液无菌检测和组织印迹无菌检测2种对照处理,确保适度的表面消毒强度,然后采用不同浓度的培养基分离培养内生真菌。结果表明,先用75%乙醇浸泡材料30 s,再用3.0%次氯酸钠浓度浸泡5 min处理,是海南安诺兰菌根内生真菌最佳的表面消毒方法,使用20%PDA双抗培养基、于25℃恒温条件下培养,能最大限度地分离所有植物内生真菌,分离效果最佳。     

黄冠梨茎尖离体培养再生体系建立初探

为建立黄冠梨离体培养高效再生体系,以茎尖为外植体,设计不同消毒处理,外植体离体培养30d后,获得初代培养无菌苗,再通过正交试验设计对增殖和生根适宜培养基进行筛选。结果表明,茎尖消毒以75%酒精处理10s、再用0.1%HgCl2浸泡4min的消毒效果最佳,适宜增殖培养基为AS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L,适宜生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L。     

蓬蘽茎段与叶片培养及其植株再生

以蓬蘽带腋芽的茎段为外植体,研究了HgCl2处理时间对消毒效果的影响、不同激素浓度和继代培养次数对增殖效果的影响以及不同浓度NAA对生根的影响,同时研究了基本培养基种类、植物生长调节剂配比以及光照强度对叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。结果表明,以75%酒精浸泡45 s,再用0.1%HgCl2处理8 min为最好的消毒方法,污染率为31.58%,褐化率为21.06%,存活率为52.63%;最佳芽增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L,增殖系数最高可达9.22;继代培养次数越多,增殖效果越好;正交试验筛选出叶片不定芽再生的最佳培养基为MS+TDZ 2 mg/L+NAA0.5 mg/L;适宜生根的培养基为1/2MS+NAA0.01 mg/L,生根率为100%,平均生根数11.13条,平均根长3.95 cm。     

植物生长调节剂对甘蓝型油菜愈伤组织诱导和生长的影响

利用植物组织培养方法,探讨甘蓝型油菜种子的最佳消毒方式以及叶片和茎段在附加不同质量浓度KT,6-BA,NAA,2,4-D的MS培养基中愈伤组织诱导的影响。结果表明,对于不同品种甘蓝型油菜种子采用2种消毒方式进行培养,污染率都较低。B1,B10,A5品种的第Ⅱ种消毒方式(75%酒精2 min+0.1%HgCl220 min)较好;B4品种的2种消毒方式(75%酒精2 min+0.1%HgCl2 20 min和75%酒精3 min+0.1%HgCl230 min)差别不大。B1,B4,B10,A5品种的甘蓝型油菜叶片和茎段愈伤组织诱导的结果表明,不同激素组合对叶片和茎段愈伤组织诱导及生长都有很大的影响,其中,MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基有利于愈伤组织诱导及生长。     

丹参和板蓝根种子试管内萌发的初步研究

采用不同消毒方式和培养基对丹参和板蓝根种子试管内萌发进行探究。试验结果表明：丹参种子最佳消毒方式为75%酒精消毒30s再用0.1%HgCl2消毒5min。丹参种子试管内萌发的适宜培养基为1/4MS。板蓝根种子最佳消毒方式为75%酒精消毒20s再用0.1%HgCl2消毒5～8min。板蓝根种子试管内萌发的适宜培养基为1/2MS半固体培养基。     

羽衣甘蓝花药离体培养研究

以羽衣甘蓝的花药为外植体,通过不同消毒处理时间,采用不同分化阶段的花药、不同激素浓度配比对羽衣甘蓝花药进行离体培养,筛选出最佳消毒处理时间、最佳分化阶段的花药、最佳诱导分化培养基.结果表明,用羽衣甘蓝花蕾大小为4～5 mm时期的花药,经0.1%HgCl2消毒处理8 min,在MS BA 3 mg/L NAA0.3 mg/L诱导分化培养基中诱导愈伤组织及不定芽的总体效果最好.     

白术和黄芪种子试管内萌发试验研究

采用不同消毒方式和培养基对白术和黄芪种子试管内萌发进行探究.实验结果表明:白术种子最佳消毒方式为75%酒精消毒30 s再用0.1%HgCl2消毒5 min;白术种子试管内萌发的适宜堵养基为1/2 MS.黄芪种子最佳消毒方式为75%酒精消毒20 s再用0.1%HgCl2消毒10～15 min;黄芪种子试管内萌发的适宜培养基为半固体培养基.     

甘蓝型油菜无菌苗培养方法的优化

以甘蓝型油菜种子为试验材料,研究了用于无菌苗培养的种子的不同消毒方法,及种子贮存时间和贮存温度对种子消毒效果的影响,最终确定适于组织培养和转基因用苗的油菜种子的最佳消毒方法和培养方法。结果表明:组织培养和转基因油莱无菌苗培养的最佳条件为:选用新收的油菜种子,4℃冰箱中保存,70%酒精表面消毒0.5~1 min后,用0.1%HgCl2消毒10 min,无菌水冲洗5~6次,无菌水浸泡种子4~5 h,接种至pH值为5.8的MS培养基,25℃暗培养1~2 d,转至16 h/d光照下生长4~5 d即可作为组织培养和转基因用无菌苗。     

金线莲组培快繁技术体系的研究

通过设置不同的试验来优化金线莲的组培条件,结果表明:金线莲外植体消毒处理以75%乙醇(浸泡30 s)+0.1%HgCl(浸泡8 min)的效果较好,诱导芽培养基以MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L的处理效果最优,芽丛生增殖培养基以MS+BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L的效果最优,在增殖培养基中添加20%香蕉泥对芽苗的增殖及壮苗培养均有极大的促进作用。在芽体分化培养过程中,在MS+BA 0.05 mg/L+NAA 0.5 mg/L的培养基中,接种密度为每瓶10颗和800lx的光照处理效果较为理想。     

金钗石斛菌根、茎和叶内生真菌的分离与鉴定

[目的]分离鉴定铁皮石斛不同组织内生真菌,以期为提高其组培苗的大田定植成活率提供试验依据。[方法]以改良PDA-抗生素酸性培养基为基础分离培养基,分别从金钗石斛菌根、茎和叶中分离内生真菌,利用切片法对分离得到的菌株进行纯化,并观察其菌落形态。[结果]通过菌落形态观察,初步鉴定所纯化的6个内生菌株分别为:NJJG-1,NJJG-2,NJJR-1,NJJR-2,NJJR-3和NJYJ-1。试验结果表明材料表面消毒条件和方法以及分离培养基的选用,均直接影响真菌的分离纯化效果和分离得到的内生菌的多样性,其中以75%酒精处理30 s,再用0.1%升汞处理7 min的表面消毒效果稳定,再配合改良的PDA-抗生素酸性培养基分离内生菌,可以分离出较多的内生菌种类。[结论]该研究结果为铁皮石斛不同组织内生真菌的分离鉴定提供了指导方法,同时为提高其组培苗的大田定植成活率提供了试验依据。     

当年生喜树种子的无菌发芽及幼苗生长

以当年生新鲜喜树种子为材料,采用植物组织培养技术,研究其萌发及幼苗生长的适宜条件。结果表明,采用0.1%HgCl2和10%NaClO分别对外植体进行消毒后,以0.1%HgCl2进行果实消毒的种子萌发率最高,为41.11%;在此基础上用10%NaClO将预培养种子浸泡3 min后,其萌发率和成苗率显著提高,分别达85.56%和55.56%,而且幼苗生长状态好,平均生成侧根6~7条,主根长约10 cm;对未经处理的种子苗做切根处理,并转移到新鲜的MS培养基,幼苗生长效果与经10%NaClO处理过的种子苗的生长效果相同,但将其转移到含1 mg/L6–BA的MS培养基后,种子苗的子叶变黄,无新根生成或只有1个短根生成。     

丹参和板蓝根种子试管内萌发的初步研究

采用不同消毒方式和培养基对丹参和板蓝根种子试管内萌发进行探究.试验结果表明:丹参种子最佳消毒方式为75%酒精消毒30 s再用0.1%Hgcl2消毒5 min.丹参种子试管内萌发的适宜培养基为1/4 Ms.板蓝根种子最佳消毒方式为75%酒精消毒20 s再用0.1%HgCl2消毒5-8 min.板蓝根种子试管内萌发的适宜培养基为1/2 MS半同体培养基.     

蝴蝶兰花梗初代培养研究

为建立蝴蝶兰"空港甜心"品种花梗芽的高效诱导体系,对影响其营养芽诱导的主要因子,包括消毒时间、花梗不同位置芽、培养基、外源激素及培养温度进行研究。结果显示:以幼嫩花梗中半木质化的花梗II为诱导材料,用0.1%HgCl2溶液消毒处理10min,接种于添加5mg.L-1的6-BA的Hyponex培养基中,并于25/18℃中培养,营养芽诱导及生长最佳。     

春兰根内生细菌分离培养方法的初步研究

探讨了春兰根表面灭菌的最佳条件,以及改良察氏琼脂、淀粉铵营养琼脂、YG、R2A、LB、金氏、TSA和根系分泌物8种培养基对春兰根内生细菌的分离效果。结果表明:春兰根的最佳表面灭菌条件为:75%乙醇浸泡3 min,3%次氯酸钠溶液处理2 min,75%乙醇浸泡30 s,最后用无菌水冲洗。不同培养基对内生细菌的分离存在一定差异,R2A培养基和根系分泌物培养基分离出的内生细菌数量较多,而YG培养基和R2A培养基分离出的内生细菌种类总数最多。此8种培养基对春兰根内生细菌的优势菌群的分离效果是相同的。研究结果可为选择合适的表面灭菌条件及培养基分离兰花内生细菌提供参考。     

五莲山野生迎红杜鹃组织快繁技术

以野生迎红杜鹃幼嫩枝芽为试验材料,进行组织培养技术研究。结果表明:当年生野生迎红杜鹃嫩枝的最佳消毒方法为,先用0.25 g/L多菌灵浸泡45 min,然后用75%乙醇溶液消毒30 s,再用0.1%HgCl2消毒6 min;最佳启动培养基配方为Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂粉,pH值5.5,该条件下诱芽率达到89.73%;最佳继代增殖培养基配方为1/2 Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA;最适生根培养基配方为Read+0.5 mg/L NAA+20 g/L蔗糖。     

柴松胚培养诱导芽形成的初步研究

为了对柴松组织培养进行系统研究,分析了柴松外植体处理方法和不同6-BA浓度对胚培养诱导等形成的影响,结果表明:适宜于柴松芽诱导的培养基为 1/2 MS 6-BA 2.0 mg·L-1;经低温沙藏的柴松成熟种胚生长良好,外植体用0.1%HgCl2最佳消毒时间为5.0～5.5 min;外植体的最佳放置方式为水平放置.     

红树莓海尔特兹初代培养中防止外植体褐化的研究

以红树莓海尔特兹(Heritage)的健壮新梢为材料,研究了不同外植体类型、0.1%HgCl2溶液消毒时间、6-BA浓度、防褐化剂、暗培养时间对组织培养中外植体褐化的影响,探讨防止初代培养中外植体褐化的最佳方法。结果表明:以带芽茎段为外植体,用0.1%HgCl2灭菌处理300 s,在MS+6-BA 0.50～0.75 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.2 mg/L培养基中,添加1.5 g/L VC,暗处理5 d,对防止外植体褐化效果最佳。     

加拿大红枫组织培养条件的优化

以加拿大红枫(Acer rubrum L.)的顶芽和侧芽为外植体,考察不同消毒剂处理时间对消毒效果的影响,以及植物生长调节剂及其浓度配比对愈伤组织诱导及不定芽增殖的影响.结果表明,外植体的最佳采集时期为4月中旬;先用体积分数70％的乙醇处理15s,再用1 mg/mL HgC12处理7 min,最后用20mg/mL NaClO浸泡25 min,加拿大红枫外植体的消毒效果好,且存活率最高,为90％.诱导加拿大红枫愈伤组织的适宜培养基为1/2 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3.较适合加拿大红枫不定芽增殖的培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3.     

不同消毒剂对苎麻各器官内生菌分离效果的影响

以1 g/L升汞、2%次氯酸钠、10 g/L苯酚、50/L甲醛、20 g/L高锰酸钾和1 g/L硝酸银等6种消毒剂对苎麻的叶、茎、根进行表面消毒处理,通过平板计数法分别对培养12、24 h后苎麻样品分离出的内生菌数进行统计,结果表明:对于苎麻叶、茎和根不同部位的样品,分别以70%乙醇2 min+1 g/L硝酸银1 min、70%乙醇2 min+20 g/L高锰酸钾2 min和70%乙醇2 min+2%次氯酸钠2 min的消毒处理,内生菌分离效果相对更好;其中,茎部的内生菌生长主要集中在消毒后12~24 h;苎麻成熟期各器官内生菌数目由高到低排列依次为叶茎根。     

博爱八月黄柿组织培养影响因素研究

以博爱八月黄柿休眠芽、萌动芽和梢尖为外植体,研究了取材时期、消毒时间、消毒剂和植物生长调节剂对其组织培养的影响.结果表明,休眠芽、萌动芽和梢尖的萌芽率最高分别为70%、50%、30%,休眠芽(休眠期外植体)的萌芽率最高,且增殖能力强,12月6日前后为最佳取材时期,以休眠芽、萌动芽为外植体可建立初代培养,而梢尖不易建立初代培养.0.1%HgCl2对生长前期外植体消毒5min的效果最好,其污染率、褐化率较低,成活率最高;0.1%HgCl2对萌动期外植体消毒10min的效果较好,其污染率虽高,但褐变率最低,成活率也最高;比较消毒剂NaClO和HgCl2,0.1%HgCl2处理休眠期外植体15min的效果最好,成活率高达70.2%.博爱八月黄柿组织培养的适宜培养基为1/2MS+1mg/LZT+0.1mg/LIAA+4.0mg/L6-BA.