抗肿瘤活性青蛤多肽的提取工艺研究

[目的]探究具有抗肿瘤活性的青蛤多肽的最佳提取工艺路线.[方法]选择胰蛋白酶酶解青蛤,以酶解液对PC-3细胞增殖抑制率（IR）为指标,研究料液比、温度、pH、加酶量和酶解时间对多肽提取率的影响,探讨最佳工艺,并采用超滤及G25洗脱分离纯化提取液.[结果]当温度为45℃、pH为7.0、料液比为1∶3、酶解时间为6h、加酶量为300 U/g时,分子量为3～5 kD青蛤提取液的抗肿瘤活性最好;分离纯化后在280 nm波长处得到3个峰,其中峰1和峰2成分抗肿瘤活性显著.[结论]以细胞增殖抑制率为指标可以确定青蛤多肽的提取及优化工艺路线.     

香蕉果肉过氧化物酶初步纯化及特性研究

[目的]为控制香蕉POD引起的酶促褐变提供理论依据。[方法]采用饱和度70%硫酸铵盐析和DEAE-Toyopearl 650M离子交换柱层析分离纯化果肉POD,测定香蕉酶液中POD活性和蛋白质含量。[结果]香蕉提取酶液中POD被纯化了约7.3倍,回收率为33.8%。香蕉果肉POD对愈创木酚的Km值为5.98 mmol/L,其最适pH值为6.5,pH值稳定性为pH 6.0~10.0,最适反应温度为35℃。盐酸-L-半胱氨酸、抗坏血酸能显著地抑制香蕉果肉POD的活性,亚硫酸氢钠、植酸、柠檬酸也能有效地抑制该酶活性;而Cu2+对香蕉果肉POD则有明显的激活作用。[结论]香蕉果肉POD的热稳定性低于香蕉PPO热稳定性,其有效的化学抑制剂与香蕉PPO基本一致。     

木薯叶过氧化物酶的分离纯化及其同工酶的研究

[目的]探讨将木薯叶作为过氧化物酶（POD）制备原料的可行性。[方法]木薯叶和甘蔗叶经提取液提取、盐析法沉淀,得POD粗酶液,分别用Sephadex G-75层析法和切向流超滤法纯化POD,用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）法分离了POD同工酶。[结果]木薯叶和甘蔗叶POD的酶活分别为6.617×10~4和5.883×10~3U/g,前者远高于后者。SephadexG-75层析法分离POD粗酶液得到洗脱峰Ⅰ和Ⅱ,木薯叶和甘蔗叶都是峰Ⅰ有酶活,峰Ⅱ酶活很低甚至没有。POD粗酶液经切向流超滤后,木薯叶和甘蔗叶POD的回收率分别为91.825%和90.820%,RZ值分别为2.75和2.85。约在430nm处有最大吸收峰。木薯叶POD有3条与标样辣根POD相同的同工酶带。[结论]木薯叶POD含量高,提取纯化操作简便,有开发利用价值。     

低温β-半乳糖苷酶的分离纯化

[目的]分离纯化低温β-半乳糖苷酶。[方法]采用硫酸铵沉淀、凝胶色谱和离子交换色谱对低温菌株Rahnella aquatilis sp.14-1在摇瓶条件下的所产低温β-半乳糖苷酶进行了纯化,并对提纯的酶进行了酶学性质的研究。[结果]摇瓶发酵液经过超声波破碎细胞得到粗酶液体,用硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-25凝胶层析和DEAE-cellulose离子交换色谱分离纯化得到低温β-半乳糖苷酶,用SDSPAGE检测显示电泳单一区带,纯化的酶分子量为60 kD。[结论]研究可为低温β-半乳糖苷酶的开发应用提供参考依据。     

C型肉毒梭菌肉毒毒素的抗原性分析

[目的]通过对分离纯化的C型肉毒毒素抗原性分析,提供快速鉴定动物因C型肉毒梭菌中毒的理论基础.[方法]对分离纯化的C型肉毒梭菌的肉毒毒素灭活后通过SDS - PAGE测定浓度,确定浓度后与弗氏佐剂乳化后免疫家兔,免疫结束后采家兔血液并分离血清.[结果]将不同稀释倍数的肉毒毒素经SDS -PAGE电泳分离后,转移至HybondNC膜,家兔三免后提取的血清作为一抗,用二抗进行Western blotting检测,大约在98.0和53.0 kDa处出现特异反应带;抗原与抗体在琼脂凝胶上结合时,会形成清晰的沉淀带.[结论]分离纯化的C型肉毒毒素,经免疫后家兔可见:C型肉毒毒素具有免疫原性和反应原性,抗体的效价为1∶8.     

从发芽咖啡豆中分离纯化α-半乳糖苷酶的研究

[目的]研究从发芽咖啡豆中分离纯化α-半乳糖苷酶。[方法]通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱和Sephacry1 S-200-HR凝胶过滤色谱等分离纯化技术,从发芽咖啡豆中分离纯化a-半乳糖苷酶。SDS-PAGE用来分析该酶的纯度和分子量。[结果]经过3步分离纯化之后,发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的比酶活达到191.50 nkat/mg,纯化倍数为23.18倍。与绿咖啡豆α-半乳糖苷酶相比,发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的比酶活较高,但产率和总的提取率都较低。SDS-PAGE分析结果表明,该酶出现单一谱带,分子量为3 8805 D。[结论]发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶产量和总提取率的提高有待进一步的研究。     

部分观赏植物苯丙氨酸解氨酶的初步研究

检测了几种观赏植物的苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia lyase,PAL)活性的分布,并采用硫酸铵沉淀法着重对茉莉[Jasminum sambac(L.) Aiton]叶片中的PAL进行分离提纯及对部分酶学性质进行研究.结果表明,该酶在所检测的植物不同器官中均有分布.其中,茉莉叶片中的PAL活性最高;50%饱和度的硫酸铵一步沉淀能使91%的酶蛋白沉淀下来,20% ～60%饱和度的硫酸铵分级沉淀能使初酶液纯化31.1倍;茉莉PAL催化其底物L-苯丙氨酸(L-Phe)裂解反应的最适pH为8.8、最适温度为35 ℃;PAL酶活性与底物Phe浓度的关系符合米氏动力学.     

香樟(Cinnamomum camphora)果实酪氨酸酶的分离纯化及特性分析

[目的]检测并分离香樟果实中的酪氨酸酶。[方法]从香樟成熟果实中分离和纯化出酪氨酸酶,研究该酶的酶活、蛋白质含量、最适pH值、最适温度、动力学特性和稳定性,并分析了不同金属离子、化合物和中药对其酶活的影响。[结果]经分离和纯化,获得43 kD的酪氨酸酶。该酶的最适pH值和最适温度分别为7.5和50℃。以L-DOPA为底物,测得Km和Vmax分别为12.83 mmol/L和180.65U/mg。该酶在pH值4~7和较高温度时均较为稳定。Al3+和Cu2+对该酶活性具有抑制作用,而Zn2+、Mg2+等则有激活作用。250mmol/LEDTA对该酶有激活作用,抗坏血酸和1 mmol/Lβ-巯基乙醇有完全抑制作用。中药女贞对其有强激活作用,乌梅对其抑制作用最明显。[结论]香樟果实中酪氨酸酶同工酶的存在为该酶的纯化带来一定难度。     

卢氏藻活性化合物的分离及抑菌活性研究

[目的]探索应用高速逆流色谱技术从卢氏藻中分离抑菌活性化合物。[方法]采用正己烷-乙酸甲酯-乙腈-水（体积比为4∶4∶3∶4）的液-液-液3相溶剂体系为高速逆流色谱的最优分离体系,以上相和中相为固定相,依次以下相和中相对样品进行洗脱,并收集分离液经高效液相色谱检测纯度。[结果]洗脱共得到RS1、RS2、RS3 3个组分物质,经HPLC纯度检测,RS1为极性较强的单一化合物;体外抑菌试验结果表明,RS1对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌都有很好的抑菌效果,RS2对细菌有抑菌效果,对真菌无抑菌作用,RS3没有抑菌活性。[结论]液-液-液3相高速逆流色谱法能够一步从卢氏藻混合物中分离获得具有良好抑菌活性的单体化合物。     

野生荞麦籽粒中芦丁降解酶的分离纯化

从野生荞麦种金荞麦籽粒中提取出芦丁降解酶,具有将芦丁降解为槲皮素的作用.该粗酶液用葡聚糖凝胶柱G-100和DEAE阴离子交换柱分离纯化后,最终酶的比活性由59.2 U/mg提高到671.4 U/mg,纯化倍数和回收率分别为11.3倍和3.5％.所得酶液经SDS-PAGE检测酶分子量大小为60 kDa左右.对酶液反应条件...     

藏雪莲水提取物对小白鼠组织中一氧化氮含量的影响

[目的]研究藏雪莲水提取物对小白鼠组织中一氧化氮含量的影响,为藏雪莲抗缺氧机制的研究提供参考。[方法]将100只小白鼠随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组,连续24 d分别灌服不同剂量的藏雪莲水提取物和生理盐水,然后处死小白鼠快速采取肝、肺、心肌和骨骼肌,测定各组织内一氧化氮的含量。[结果]结果表明,高剂量组的肝、肺和骨骼肌和中剂量组的肝中一氧化氮含量中显著高于对照组和低剂量组,差异极显著(P<0.01);中剂量组的肺和骨骼肌中一氧化氮含量高于对照和低剂量组,差异显著(P<0.05);对照组的心肌中一氧化氮含量高于各药物组,差异极显著(P<0.01)。[结论]藏雪莲能够提高小白鼠肝、肺和骨骼肌中一氧化氮的含量,降低心肌中的含量。     

藏雪莲水提取物对小白鼠组织内MDA含量的影响

[目的]为藏雪莲抗缺氧机制的研究提供参考。[方法]将100只小白鼠随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组,连续24 d分别灌服不同剂量的藏雪莲水提取物和生理盐水,然后处死小白鼠快速采取肝、肺、心肌和骨骼肌,测定各组织内MDA含量。[结果]中、低剂量组的肝、各剂量组的心肌和骨骼肌中MDA含量显著低于对照组,差异极显著(P<0.01);高剂量组的肝中MDA含量低于对照组,差异显著(P<0.05);对照组肺中MDA含量显著低于高剂量组,差异极显著(P<0.01)。[结论]藏雪莲能够降低小白鼠肝、心肌和骨骼肌中MDA含量。     

猪血清酶和氟烷敏感性与肌肉品质关系的研究

 本文用54头ES系和30头斯格猪对血清肌酸激酶[CK，EC#-（2，7，3，2）]、乳酸脱氢酶[LDH，EC#-（1，1，1，2）]和氟烷敏感性与肌肉品质的关系进行了研究。结果表明：常规和药物应激后采血时血清CK活性与宰后45分钟肉质指标存在显著性相关（P＜0.01），血清LDH#-5同工酶和肉质指标高度相关（P＜0.001）。并且血清1ogCK值和LDH#-5同工酶在轻度PSE和正常肌肉猪之间存在极显著差异（P＜0.01）；氟烷阳性猪宰后表现典型PSE肌肉（斯格猪n=3），氟烷阴性宰后虽然未发生典型PSE肌肉，但存在轻度PSE肌肉胴体。     

不同海拔地区牦牛肌组织线粒体T-AOC的测定

[目的]为从细胞分子水平进一步探讨牦牛高原低氧适应性的生物学机制及其高原疾病的诊断提供理论依据。[方法]对青海省玛多县和刚察县成年牦牛的心肌、骨骼肌线粒体总抗氧化能力(T-AOC)进行测定。[结果]玛多县牦牛心肌、骨骼肌线粒体的T-AOC分别为(28.94±5.11)和(17.86±5.98)U/mg蛋白,均显著高于刚察县牦牛。在高原低氧环境下,随着海拔高度的增加,牦牛心肌、骨骼肌线粒体T-AOC显著增加。玛多牦牛心肌线粒体的T-AOC显著高于骨骼肌,且差异显著(P<0.05),而刚察牦牛的心肌、骨骼肌线粒体的T-AOC差异不显著(P>0.05)。[结论]牦牛具有对高原低氧环境的显著适应性。     

Transport of energy in muscle: the phosphorylcreatine shuttle

In order to explain the insulin-like effect of exercise, it was proposed in 1951 that contracting muscle fibers liberate creatine, which acts to produce an acceptor effect--later called respiratory control--on the muscle mitochondria. The development of this notion paralleled the controversy between biochemists and physiologists over the delivery of energy for muscle contraction. With the demonstration of functional compartmentation of creatine kinase on the mitochondrion, it became clear that the actual form of energy transport in the muscle fiber is phosphorylcreatine. The finding of an isoenzyme of creatine phosphokinase attached to the M-line region of the myofibril revealed the peripheral receptor for the mitochondrially generated phosphorylcreatine. This established a molecular basis for a phosphorylcreatine-creatine shuttle for energy transport in heart and skeletal muscle and provided an explanation for the inability to demonstrate experimentally a direct relation between muscle activity and the concentrations of adenosine triphosphate and adenosine diphosphate.     

益生菌制剂对肉杂兔应用效果的影响研究

[目的]研究益生菌制剂对断奶仔兔生产性能和免疫功能的影响。[方法]选用体重相近的1月龄伊拉和比利时杂交断奶仔兔60只,随机分为4组。试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别口服2、4和6ml的益生菌制剂,对照组正常饮水,试验期30d。[结果]试验组的平均日增重高于对照组,其中试验Ⅱ组提高了24.87%;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的发病率分别比对照组降低12.5%、18.7%和18.7%,死亡率分别降低25.0%、12.5%和12.5%;试验Ⅱ组的脾脏指数、淋巴细胞阳性率与对照组、试验Ⅰ组有显著差异;试验Ⅰ组的胸腺指数与对照组的差异无显著性,Ⅱ、Ⅲ组与对照组差异显著。[结论]断奶仔兔的生产性能和免疫指标均随着饲料中添加益生菌制剂比例的增加而提高,其中以口服4ml益生菌制剂对断奶仔兔作用效果最好。     

影响獭兔离体肠道平滑肌收缩的因素

[目的]探讨影响獭兔离体肠道平滑肌收缩的因素。[方法]以獭兔十二指肠平滑肌为试验材料,以平滑肌收缩波的振幅和周期为评价指标,考察影响试验的各主要因素。[结果]在(36.5±0.5)℃台氏液中,獭兔离体肠管的存活时间和保质期最长,振幅最稳定,肾上腺素使离体肠管平滑肌收缩幅度减弱,乙酰胆碱、氢氧化钠及氯化钙均导致平滑肌收缩频率及幅度升高,收缩力增强。[结论]獭兔离体肠道平滑肌易受到温度、pH、其他化学因素及药物的影响。     

六堡茶快速陈化新工艺对茶叶品质的影响

[目的]为提高六堡茶的陈化品质提供理论依据。[方法]对六堡茶半成品散茶进行充氧辐照快速陈化处理,并测定处理样及对照样（不充氧气而充空气）茶叶中水浸出物、水分、粗纤维和茶多酚的含量。[结果]充氧量为100%、辐照剂量为12kGy时茶叶的水浸出物含量最高（比对照样高7.25%）,粗纤维含量最低（比对照样低37.06%）,水分含量（6.52%）和茶多酚含量（9.25%）较理想;适当充氧辐照可提高六堡茶的水浸出物含量,降低其水分、茶多酚和粗纤维含量,有效改善其品质,使茶叶达到成品《DB45/T581-2009六堡茶》广西地方标准。[结论]充氧量为100%、辐照剂量为12kGy的处理可显著改善六堡茶的陈化品质。     

大鼠骨骼肌卫星细胞培养的研究

[目的]探讨在体外条件下骨骼肌卫星细胞纯化、培养、鉴定的方法及确定其生物学特性。[方法]取新生大鼠的小腿肌肉,采用肌组织块和肌细胞培养两种方法。分别用胰蛋白酶对培养中的肌组织块和肌细胞进行消化,采用离心及差速贴壁法纯化,得到更高纯度的大鼠骨骼肌肌卫星细胞,进行体外原代骨骼肌和传代骨骼肌的细胞培养。传至第2代后,用分化培养基诱导分化,观察骨骼肌细胞各个阶段的形态特征并拍照。[结果]此方法分离的细胞成活率较高,体外生长、增殖良好。在分化培养基条件下,细胞分化良好,可融合成肌管。[结论]该实验成功探讨了新生大鼠骨骼肌卫星细胞的分化能力并建立了卫星细胞纯化方法,适用于开展细胞移植和肌组织工程方面的研究。     

核桃叶水提取物对黑大豆种子萌发的化感作用研究

[目的]研究核桃叶水提取物对黑大豆种子萌发的化感作用。[方法]采用蒸馏的方法提取核桃叶中的化感物质,选用黑大豆种子作为受体,进行化感作用测定与种子萌发率的观察。[结果]核桃叶水提取物对黑大豆发芽率有明显的抑制作用,而且随着浓度的上升其化感抑制作用越来越强,发芽率也越来越低。同时,通过不同处理方法取得的水提取物其化感作用也是明显的,即在同一浓度时,超声波提取物比对照对黑大豆种子发芽率的抑制作用强,而微波、振荡提取物其化感抑制作用比对照弱。[结论]超声处理可增强核桃叶水提物化感抑制物质的生物活性,而微波、振荡处理则相反。