不同海拔地区牦牛组织线粒体LDH活性测定

[目的]进一步探讨高原动物对高原低氧的适应机制。[方法]测定青海省玛多县(海拔4300 m左右)和刚察县(海拔3 300 m左右)牦牛心肌、骨骼肌线粒体中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。[结果]玛多县和刚察县牦牛心肌、骨骼肌线粒体的乳酸脱氢酶(LDH)活性分别为(2472.40±276.58)、(2448.71±494.69)、(3855.07±316.44)、(3882.62±602.87)U/gPro;玛多牦牛的心肌、骨骼肌线粒体中的LDH活性极显著低于刚察牦牛(P<0.01)。[结论]在高原低氧环境下,牦牛随海拔高度升高对无氧代谢的依赖性降低。     

1/4野血犊牦牛心肌和骨骼肌线粒体抗氧化酶的活性研究

[目的]探讨犊牦牛线粒体氧自由基代谢水平以及能量代谢的生物学机制。[方法]对青海省大通种牛场6月龄1/4野血犊牦牛心肌和骨骼肌线粒体总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量进行了测定。[结果]野血犊牦牛心肌线粒体中T-AOC、GSH-Px、SOD活性和NO含量均高于骨骼肌,但差异均不显著(P0.05)。心肌线粒体中MDA含量显著高于骨骼肌(P0.05)。[结论]该研究从发育学角度为探讨1/4野血牦牛高原低氧适应性提供理论依据。     

不同发育期含野血牦牛血清及组织中丙二醛含量研究

[目的]为从细胞分子水平进一步探讨牦牛高原低氧适应性的生物学机制及其高原疾病的诊断提供理论依据。[方法]对1日龄、1月龄、6月龄、成年等不同发育期的高原地区牦牛（含1/4野血）血清和5种组织中丙二醛（MDA）含量进行了测定。[结果]成年组血清中MDA的含量均显著高于其余3个年龄组（P〈0.05）,1月龄组血清MDA的含量虽然高于1日龄和6月龄组,但差异不显著（P〉0.05）;1月龄牦牛心肌和骨骼肌中MDA含量均增加,差异显著（P〈0.05）;1日龄牦牛肝组织中MDA高于其他2个年龄组（P〈0.05）,     

高原牦牛肠道解剖学指标测定

[目的]为牦牛形态学及高原兽医学研究积累资料。[方法]选取高原牦牛作为研究对象,对其肠管的解剖学指标进行测定,并与平原黄牛进行比较,探讨牦牛肠管适应高原低氧环境的解剖学特点。[结果]牦牛的肠管总长和小肠长度小于黄牛,牦牛大肠长度大于黄牛,均存在显著差异(P0.05)。[结论]牦牛的肠管解剖学特点是其肠道对高原低氧环境以及粗饲放牧方式的一种解剖学适应。     

生长期牦牛血清和组织中LDH活性的测定

对同一海拔地区不同发育期牦牛血清和组织中乳酸脱氢酶(LDH)活性进行了测定,对血清中乳酸脱氢酶同工酶进行了比较.结果表明,1日龄和1月龄组血清中LDH活性均显著高于其余两个年龄组,且1月龄组血清中LDH的活性显著升高,差异均显著(P＜0.05),6月龄组血清LDH的活性已降低到成年组的水平;组织中LDH活性均低于血清(P＜0.05),1日龄和1月龄组肝脏和骨骼肌中LDH活性均高于6月龄组,1月龄组心肌中LDH的活性明显较高,差异显著(P＜0.05),其余组织无统计意义;1月龄组中血清LDH同工酶活性最强,其LDH5+LDH4活性明显高于其余3个年龄组.在高原低氧环境下,牦牛在生长发育的特定阶段需增强无氧代谢机制,以满足机体能量代谢的需要.     

牦牛肺脏的适应性结构

应用光镜和电镜技术，对牦牛肺脏的微细结构进行了系统观测，分析其结构特性与高原低氧环境适应性的关系。结果表明，牦牛肺小叶结构明显，肺泡I型上皮菲薄，构成肺泡壁的绝大部分。与其它动物不同，牦牛I型肺泡上皮见有间断处，为非连续型上皮。气－血屏障的算术平均厚度和调和平均厚度分别为0.53±0.10µm和0.44±0.07µm，明显比体格较小的其它家畜还要薄，这有利于气体交换时增加氧的弥散量。肺脏微动脉中膜的肌层厚度与血管外径的百分比为5.00±0.93%，与高原驼马的比值近似，而比奶牛和公牛的要小，可减少牦牛肺动脉高压的发病几率。肺胸膜、小叶间隔、肺泡隔、各级支气管管壁和血管壁内都有丰富的弹性纤维分布，并相互联系，构成一个完整的弹性系统，维持肺脏良好的扩张和回缩状态。杯状细胞不仅大量分布于各级支气管，细支气管粘膜上皮中也出现杯状细胞，其分泌的粘液有助于牦牛在干旱环境下保护呼吸道的通气量。这些结构特点是牦牛世代生活于高原低氧环境下所获得的适应性变化。     

牦牛胎盘抗氧化作用的研究

[目的]研究牦牛胎盘抗氧化的作用,为牦牛胎盘的开发利用提供理论依据。[方法]采集不同海拔高度牦牛的胎盘,将100只小鼠随机分为高海拔组、中海拔组、低海拔组和对照组,连续28d分别灌服不同海拔牦牛的胎盘粉溶液和生理盐水,然后快速处死小鼠,采集肝、肺、心肌、骨骼肌、脾脏和肾脏,分别测定各组织内T-SOD的活性和MDA的含量。[结果]高、中海拔的肝脏、各海拔的心肌和肾脏中T-SOD的活性与对照组相比差异显著（P〈0.05）,高海拔的肺脏和高、中海拔的骨骼肌中T-SOD的活性与对照组相比差异极显著（P〈0.01）;高、中海拔的骨骼肌和各海拔的肾脏中MDA的含量与对照组相比差异显著（P〈0.05）,高、中海拔的肝和各海拔的肺脏中MDA的含量与对照组相比差异极显著（P〈0.01）。[结论]牦牛胎盘可以显著提高组织中T-SOD的活性,降低MDA的含量,具有抗氧化的作用。     

有氧运动对小鼠心肌、骨骼肌线粒体SOD、MDA、LDH的影响

探讨了有氧运动对小鼠心肌、骨骼肌线粒体SOD、MDA、LDH的影响.结果表明,在3 h游泳运动后,试验组与对照组小鼠心肌中SOD的活性无显著差异(P>0.05),而骨骼肌中SOD活性显著降低(P<0.05);试验组小鼠心肌、骨骼肌线粒体中MDA的含量均有所升高,差异显著(P<0.05):LDH活性有所降低,但差异不显著(P>0.05).说明有氧运动对小鼠骨骼肌中SOD活性和小鼠心肌、骨骼肌线粒体中MDA含量的影响显著,但对LDH活性无显著影响.     

大通牦牛肺血管低氧适应的组织结构特点

为进一步研究大通牦牛肺组织对高原低氧适应的组织学特点,选取海拔高度3 700、3 200 m地区的成年大通牦牛作为研究对象,并分别选取海拔高度3 700 m的泽库地区成年牦牛、海拔高度3 200 m的海晏地区成年牦牛作为对照,利用组织学和电镜技术对肺组织的显微、超微结构进行观测与分析。结果显示:管径大于100μm的牦牛肺血管平滑肌含量随海拔的升高逐渐增加,差异显著(P0.05);管径小于50μm的牦牛肺血管平滑肌含量随海拔的升高逐渐减少,差异显著(P0.05);牦牛肺气血屏障随海拔的升高逐渐变薄,部分差异显著(P0.05)。大通牦牛肺脏的结构特点是其能够适应高原低氧环境的组织学基础,也表现出其育种的遗传学特征。     

藏雪莲水提取物对小白鼠组织中一氧化氮含量的影响

[目的]研究藏雪莲水提取物对小白鼠组织中一氧化氮含量的影响,为藏雪莲抗缺氧机制的研究提供参考。[方法]将100只小白鼠随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组,连续24 d分别灌服不同剂量的藏雪莲水提取物和生理盐水,然后处死小白鼠快速采取肝、肺、心肌和骨骼肌,测定各组织内一氧化氮的含量。[结果]结果表明,高剂量组的肝、肺和骨骼肌和中剂量组的肝中一氧化氮含量中显著高于对照组和低剂量组,差异极显著(P<0.01);中剂量组的肺和骨骼肌中一氧化氮含量高于对照和低剂量组,差异显著(P<0.05);对照组的心肌中一氧化氮含量高于各药物组,差异极显著(P<0.01)。[结论]藏雪莲能够提高小白鼠肝、肺和骨骼肌中一氧化氮的含量,降低心肌中的含量。     

高原型牦牛血清常量元素浓度研究

[目的]为兽医临床上疾病诊断提供科学依据。[方法]采用火焰原子吸收法测定高原型牦牛血清钾、钠、钙、镁浓度,并采用钼锑抗比色法测定血清无机磷浓度,采用硝酸汞滴定法测定血清氯浓度。[结果]不同年龄高原型牦牛血清常量元素含量无显著差异(P0.05)。除成年公牦牛的血清钙和磷含量高于母牦牛外,不同性别高原型牦牛其他指标无显著性差异(P0.05)。[结论]该研究可为高原型牦牛的补饲提供依据。     

青海家牦牛HIF-1α基因组织特异性表达

[目的]探究青海家牦牛HIF-1α基因组织的特异性表达。[方法]应用半定量反转录PCR和实时定量反转录PCR(SYBRGreen)技术对青海家牦牛HIF-1α基因的组织特异性表达进行检测。通过提取不同组织总RNA,经DNase I消化后,用随机引物进行反转录合成cDNA,采用特异性引物分别对HIF-1α和β-actin基因进行RT-PCR和Real Time RT-PCR扩增。[结果]结果表明,HIF-1α基因在心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸组织中均有表达,其中以睾丸和脾中HIF-1α基因表达量最高,肌肉的表达量最低。[结论]该研究为进一步揭示HIF-1α在高原土著动物低氧适应过程中的分子机制有着重要的意义。     

大通牦牛皮肤发育规律的研究

[目的]探讨大通牦牛的皮肤发育规律。[方法]采用组织学方法对4个年龄段（1日龄、30日龄、180日龄和成年牦牛）大通牦牛的皮肤组织结构进行研究。[结果]4个年龄段大通牦牛的皮肤均表现为表皮薄、真皮特厚的特点,且真皮层内毛细血管较少,表皮层内含大量色素细胞;4个年龄段大通牦牛的全皮厚均表现为出生后至30日龄逐渐变厚、至180日龄时又变薄、至成年时又变厚的一种变化趋势。[结论]为深入了解大通牦牛皮肤适应高原恶劣环境的组织结构特点提供了理论依据。     

牦牛解偶联蛋白 3基因的克隆测序和肌肉表达谱

为了比较高原牦牛和低海拔地区黄牛解偶联蛋白-3(UCP3)基因序列及其在骨骼肌中的表达水平,采用RT-PCR方法从牦牛背最长肌中克隆UCP3基因,所获得的cDNA序列编码区及推导的氨基酸序列与GenBank中黄牛相应序列相比相似度均为99.04%,编码区有9个碱基差异,并导致3个氨基酸的改变。实时定量RT-PCR分析显示,牦牛背最长肌中UCP2 mRNA水平显著高于黄牛,而背最长肌中UCP3 mRNA及股二头肌中UCP2、UCP3 mRNA水平均显著低于黄牛。另外,牦牛背最长肌中Mn-SOD活力显著高于黄牛。这些特征可能与牦牛肌肉在低氧环境中的能量代谢有关。     

高原牦牛胎盘粉对衰老模型小鼠抗氧化作用的研究I

[目的]研究高原牦牛胎盘粉的抗氧化作用。[方法]将健康小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、低海拔胎盘组、中海拔胎盘组和高海拔胎盘组,将后5组用D-半乳糖造亚急性衰老小鼠模型;低海拔胎盘组、中海拔胎盘组和高海拔胎盘组的小鼠在建模11d后每天灌胃牦牛胎盘粉40mg／只、阳性对照组每天灌服维生素E100mg／kg,45d后观察心、肝、脾、肺、肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力和丙二醛（MDA）含量。[结果]高原牦牛胎盘粉可提高小鼠心、肝、脾、肺、肾组织中SOD（P〈0.01）和GSH-Px（P〈0.01）活力,明显抑制小鼠心、肝、脾、肺、肾组织中MDA（P〈0.01）的形成。[结论]高原牦牛胎盘粉有很好的抗衰老作用。     

牦牛乳酸脱氢酶A的分离纯化、酶学性质及其基因的克隆

 【目的】分离纯化牦牛骨骼肌中的乳酸脱氢酶-A（LDH-A）,并克隆其cDNA。通过比较牦牛与普通牛的LDH-A的酶学性质和cDNA序列,为研究牦牛适应高海拔、低氧环境,在分子水平上找到一些线索。【方法】采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析等方法,分别从牦牛和普通牛骨骼肌中纯化LDH-A,并对其酶学性质进行比较;通过RT-PCR方法克隆牦牛LDH-A的cDNA序列,并与GenBank登录的普通牛LDH-A的cDNA序列进行比对。【结果】纯化的牦牛LDH-A比活力为103.9 U•mg-1蛋白,纯化倍数为18.2。SDS-PAGE和PAGE分析均显示一条带。酶动力学参数测定显示,牦牛LDH-A的Km NADH为0.097,Km 丙酮酸钠为1.897,均不同程度高于普通牛,其中对丙酮酸钠的Km大约是普通牛的2倍。根据牦牛LDH-A的cDNA序列预测的氨基酸序列与普通牛LDH-A的氨基酸序列比较,只有2个氨基酸残基的改变（257Val-Ala和315Tyr-Cys）。【结论】牦牛LDH-A对丙酮酸的高Km可避免骨骼肌中产生过多的乳酸,是适应进化的结果;这种升高可能与其氨基酸序列变化导致的空间结构微小改变有关。