C型肉毒梭菌肉毒毒素的抗原性分析

[目的]通过对分离纯化的C型肉毒毒素抗原性分析,提供快速鉴定动物因C型肉毒梭菌中毒的理论基础.[方法]对分离纯化的C型肉毒梭菌的肉毒毒素灭活后通过SDS - PAGE测定浓度,确定浓度后与弗氏佐剂乳化后免疫家兔,免疫结束后采家兔血液并分离血清.[结果]将不同稀释倍数的肉毒毒素经SDS -PAGE电泳分离后,转移至HybondNC膜,家兔三免后提取的血清作为一抗,用二抗进行Western blotting检测,大约在98.0和53.0 kDa处出现特异反应带;抗原与抗体在琼脂凝胶上结合时,会形成清晰的沉淀带.[结论]分离纯化的C型肉毒毒素,经免疫后家兔可见:C型肉毒毒素具有免疫原性和反应原性,抗体的效价为1∶8.     

新疆多浪羊白细胞介素8 cDNA的克隆测序及其变异SNP的分析

采集多浪羊的血液,分离白细胞,提取总RNA,用白细胞介素8（IL-8）的引物进行两步法的RT-PCR扩增、克隆与酶切鉴定,测序后进行序列比对,与NM_001009401.1同源性高达99%,初步判定为多浪羊的IL-8编码全长cDNA。通过序列比对,发现多浪羊IL-8的基因起始密码子上游第七个碱基发生突变,在NM_001009401.1中是T,而在测序的多浪羊的IL-8中是C。对该测序序列进行数据库搜索和序列比对,发现该碱基变异很独特,并对该变异可能对mRNA蛋白翻译的影响进行了初步的分析。     

新疆多浪羊淋巴细胞分离和培养

采集多浪羊的外周静脉血液,用人淋巴细胞分离液进行分离,收集分离得到淋巴细胞,同时经过纯化后通过镜检观察细胞形态。将纯化后的淋巴细胞在RPM I1640中置37℃,5%CO2培养箱4,6,8和12 h进行培养并观察淋巴细胞,其存活率分别为93.1%、92.4%、91.5%和90.6%。本试验成功地建立了多浪羊外周血淋巴细胞的分离技术和体外短期培养体系。     

叶尔羌高原鳅外周血淋巴细胞的分离

以体质健康的叶尔羌高原鳅为研究对象,分离其外周血淋巴细胞。结果表明,采用浓度为1.085g/mL的淋巴细胞分离液在2000r/min离心35min的情况下,可将叶尔羌高原鳅外周血淋巴细胞有效地分离出来。该研究不仅为叶尔羌高原鳅淋巴细胞功能研究提供了依据,还可为叶尔羌高原鳅的疾病防治、人工养殖提供重要参考。     

新疆地区绵羊品种TMEM154基因第2外显子G103A位点的多态性分析

绵羊跨膜蛋白154基因(Transmembrane protein 154,TMEM154)多态性与进行性肺炎的易感或抗性有关。本研究以绵羊TEME154基因第2外显子G103A(E35/K35)位点SNP为候选分子标记,利用PCR直接测序法检测TEME154基因型,对该基因在新疆地区8个绵羊品种(阿勒泰羊、哈萨克羊、巴音布鲁克羊、多浪羊、策勒黑羊、巴什拜羊、德国美利奴羊和中国美利奴羊)的遗传多态性进行分析。结果表明:绵羊TMEM154基因在第2外显子103bp处发生了G-A突变,PCR测序共检测到3种基因型;即AA、AG和GG,G103A位点的GG(E35)基因型与绵羊进行性肺炎的高敏感性相关,在阿勒泰羊、哈萨克羊、巴音布鲁克羊、多浪羊、策勒黑羊和巴什拜羊群体中属于优势基因型,而在中国美利奴羊和德国美利奴羊群体中比例较低。方差分析表明,该位点的基因型频率在阿勒泰羊、哈萨克羊、巴音布鲁克羊、多浪羊、策勒黑羊和巴什拜羊等进行性肺炎高敏感群体和中国美利奴羊和德国美利奴羊等低敏感群体间存在显著差异(P0.05)。本研究结果提示,绵羊TMEM154基因第2外显子G103A位点多态性在进行性肺炎高敏感与低敏感的绵羊群体中分布存在较大差异,该SNP可作为一个理想的分子标记应用于绵羊的抗病育种。     

中国美利奴羊OAR1脱毛症的基因组选择分析

绵羊脱毛症受环境和基因的因素共同决定,在分子育种日益盛行的时代,筛选脱毛症相关分子标记,可为绵羊的健康养殖提供参考数据。采取100只健康中国美利奴羊为对照组和50只脱毛症中国美利奴羊为病例组,提取其DNA,制备基因组芯片,采用PLINK软件质量控制以提取OAR1(Ovis aries 1绵羊1号染色体),通过Vcftools对所获得的数据进行遗传分化系数（Fst）计算,从大到小选择总数值的前1%。结果表明：经过质量控制后,获得相关SNPs为4958个;Fst计算后获得分子标记35个,经过基因注释获得53个,其中影响皮肤发育的基因有GADD45A、MCCC1、MLPH、SSBP3等,已经有文献报道SSBP3与脱毛症相关。对获得的分子标记可以为绵羊分子选育提供参考,缩短世代间隔,提高育种年限,节约成本,最终获得免疫力强的健康绵羊,防止绵羊脱毛症的出现,从而减少农牧民的经济损失。     

绵羊EDAR基因的克隆、序列分析及其在毛囊发育过程中的表达

旨在获得中国美利奴羊EDAR(ectodysplasin A receptor)基因的CDS区全序列并进行生物信息学分析,同时分析EDAR在绵羊毛囊发育过程中的表达特性,为深入研究该基因在绵羊毛囊生长发育过程中的作用及其表达调控提供基础资料。采用PCR扩增获得绵羊EDAR基因全长编码区,并克隆到PCRTM-BluntⅡ-TOPO@vector进行测序;利用生物信息学方法预测蛋白结构;应用qRT-PCR技术检测EDAR基因在绵羊毛囊发育过程中的表达特征。结果表明,绵羊EDAR基因的CDS序列长度为1 350bp(GenBank登录号:KX900497),编码449个氨基酸,该氨基酸序列与其他物种相比一致性较高;进化树分析表明,绵羊EDAR氨基酸序列与牛的进化关系较近,与斑马鱼较远;预测结果显示绵羊EDAR蛋白存在一个信号肽和一个跨膜结构域;qRT-PCR分析表明,EDAR基因在绵羊胎儿毛囊发育过程中均有表达,在毛囊发育第55天和第135天表达较高,第75天表达最低。获得绵羊EDAR基因完整的编码区序列和毛囊发育过程中的表达特性,生物信息学分析发现EDAR基因的编码区序列具有物种间的保守性,同时该基因在绵羊毛囊不同发育阶段的皮肤组织中表达,由此表明EDAR基因可能在绵羊毛囊的生长发育过程中发挥重要作用。     

棉酚对多浪羊淋巴细胞凋亡的影响

通过棉酚对多浪羊淋巴细胞的研究,探索棉酚体积分数对淋巴细胞的影响.主要用细胞培养、瑞氏-吉姆萨染色、DNA电泳等方法观察棉酚对多浪羊淋巴细胞的凋亡效应.结果表明:当细胞培养液中棉酚体积分数为0.071mol/L,培养淋巴细胞8h后,可抑制多浪羊淋巴细胞的增殖,并且促进其凋亡.     

和田黑鸡与普通商品鸡淋巴细胞转化形态差异分析

根据普通商品鸡与未注射疫苗的和田黑鸡淋巴细胞转化率的对比,分析和田黑鸡机体与普通商品鸡免疫力的强弱。用密度梯度离心法分离出鸡外周血淋巴细胞,于37℃、5%的CO2培养箱中体外培养,如果其受到某种诱导剂,如有丝分裂原植物凝集素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)的诱导后,就会表现为细胞体积增大、代谢旺盛、蛋白质和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化和增殖,淋巴细胞转化率的高低则可以反映机体的免疫水平。试验发现,随着时间的递增,当用植物凝集素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)诱导和田黑鸡和普通商品鸡时转化率也呈现上升趋势,普通商品鸡淋巴细胞的转化率要大于和田黑鸡,且在72h后普通商品鸡与和田黑鸡的淋巴细胞LPS诱导后转化率都呈现递减趋势。该试验为动物疫苗免疫效果检测和细胞因子制剂的研究奠定了基础。