基于实时荧光PCR技术的食品中致敏原的检测

采用实时荧光PCR技术检测食品中致敏原芝麻成分.结果表明:采用芝麻管家基因2Salbumin mRNA基因的特异性检测引物和探针进行检测时,26种样品经实时PCR扩增,只有白芝麻和黑芝麻产生阳性的荧光信号,其余样品均不产生荧光信号.灵敏度试验结果表明,该方法对芝麻致敏原基因的检测灵敏度较高,可达到1mg·kg-1,符合痕量检测要求.     

实时荧光PCR技术检测过敏原小麦的研究

采用实时荧光PCR技术检测过敏原小麦成分.结果表明,采用小麦管家基因GAG56D和Wx012基因的特异性检测引物和探针进行检测时,26种样品经实时PCR扩增,只有小麦产生阳性的荧光信号,其余样品均不产生荧光信号.灵敏度实验结果表明,该方法对小麦过敏原基因的检测灵敏度较高,可达到1.0 ms/kg,符合痕量检测要求.     

实时荧光PCR检测食品中牛及猪源性成分

为快速检测出食用肉类中掺假物质,确保消费者切身利益,维持正常市场秩序,提升贵州省产品质量监督检验的检测能力,采用实时荧光定量PCR对猪源性成分和牛源性成分进行检测。结果表明:荧光PCR可以用来检测猪、牛等动物源性成分,且检测灵敏度为1%;荧光PCR检测动物源性成分提高了检测效率及灵敏度,降低了假阳性机率。     

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为快速检测出食用肉类中掺假物质,确保消费者切身利益,维持正常市场秩序,提升贵州省产品质量监督检验的检测能力,采用实时荧光定量PCR对猪源性成分和牛源性成分进行检测.结果表明:荧光PCR可以用来检测猪、牛等动物源性成分,且检测灵敏度为1％;荧光PCR检测动物源性成分提高了检测效率及灵敏度,降低了假阳性机率.     

梅州地区柑橘黄龙病的常规PCR与实时荧光定量PCR检测技术研究与应用

本文利用TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测技术对梅州地区疑似柑橘黄龙病样品进行检测,并与常规PCR检测进行对比。结果表明,实时荧光定量PCR用于检测柑橘黄龙病菌结果快速、准确、可靠且无污染。采用2种方法对梯度稀释的阳性样本进行检测发现,实时荧光定量PCR的灵敏度较常规PCR更高,能够检出样品中痕量的病原菌。本研究在梅州地区建立了以实时荧光定量PCR方法进行柑橘黄龙病疑似植株的检测,可以为梅州地区提供更准确、更灵敏、快速的黄龙病检测技术。     

实时荧光定量PCR法测定禽蛋中沙门氏菌

为建立禽蛋中沙门氏菌的荧光PCR法检测方法,根据invA基因序列设计实时荧光定量PCR引物和探针,常规方法提取菌体DNA,以55℃为退火温度进行荧光PCR扩增,并进行方法学考察。结果表明:阳性对照品和沙门氏菌为模板的样品有明显扩增曲线,其他菌株为模板的样品无扩增曲线,特异性、灵敏度和重现性考察提示实时荧光定量PCR方法符合检测方法学要求。实时荧光定量PCR法的应用,提高了禽蛋制品中沙门氏菌检测的灵敏度、缩短了检测时间、简化了检测流程。     

水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR检测技术研究

 水稻细菌性条斑病是我国水稻上的检疫性病害之一。设计并筛选出特异性引物对Xoc2071F/Xoc2071R(Xoc2071),其扩增片段大小为329bp,利用SYBR GreenI荧光定量PCR方法进行水稻细菌性条斑菌的实时荧光PCR检测。结果表明,引物对Xoc2071能特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其他菌种不产生荧光信号。检测的灵敏度是2.25fg/μL质粒DNA和1.0×102cfu/mL的菌悬液,相当于1个细菌的基因,比常规PCR电泳检测的灵敏度高约100倍。此实时荧光PCR可以检测到仅需10g的带菌种子上目标菌的存在。     

胡萝卜软腐欧文氏菌分子检测技术的研究

胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种Erwinia carotovora subsp.carotovora(Ecc)是引起魔芋和马蹄莲软腐病的主要病原细菌.本研究根据细菌L-氨基酸渗透酶同源基因设计URP核苷酸序列特异性引物进行普通PCR、巢式PCR,同时采用细菌16S-23S rI)NA间的ITS序列设计引物及TaqMan探针进行实时荧光PCR,对样品中存在的胡萝卜软腐欧文氏菌进行检测,并比较了3种检测方法的特异性和灵敏度.结果表明,应用实时荧光PCR方法检测样品,其中存在的胡萝卜软腐欧文氏菌的最低菌悬液浓度可达10 cfu/mL;巢式PCR灵敏度也可检测到10 cfu/mL;而用普通PCR最低可检测到103 cfu/mL.用实时荧光PCR和巢式PCR方法榆测病菌,其灵敏度都比常规PCR提高了100倍,且实时荧光PCR方法更快速、简便、安全、准确,不需PCR的后续处理.实时荧光PCR方法适用于种苗、种球等检测领域.     

水稻稻瘟病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

依据GenBank中登录的稻瘟病菌28S rDNA保守区域设计合成了对稻瘟病菌特异的TaqMan探针,并对实时荧光PCR各反应条件进行摸索优化,得出水稻稻瘟病菌实时荧光PCR的最佳反应体系.利用该体系对其他侵染水稻常见的病原菌进行特异性检测,结果表明只有稻瘟病菌能检测到荧光信号的增加,检测的灵敏度为0.328pg/μL DNA样品.说明该方法是一种较常规PCR快速、特异性强的方法,并且可有效的用于稻瘟病菌的检测.     

食品和饲料中猫源性成分实时荧光PCR检测方法

采用实时荧光PCR方法对食品和饲料中猫源性成分进行TaqMan探针检测.结果表明:该检测方法具有特异性强、灵敏度高的特点,在动物和植物材料基质中,均能检出0.01％的猫源性成分,适用于市售食品和饲料中猫源性成分的检测.     

酶联免疫法测定合肥市售鱼虾链霉素残留量的探讨

[目的]测定合肥市售鲫鱼和河虾的链霉素残留量,并与国家标准对比,评价其残留情况。[方法]于2018年10—12月在合肥市蜀山区、庐阳区、瑶海区、包河区共16个水产品市场、农贸市场和大型超市随机购买不同品种的鱼虾,采用酶联免疫吸附方法检测其中链霉素的残留量。[结果]合肥市售鱼虾中链霉素的检出率为100%,残留范围为1.50~11.88μg/kg,平均含量为4.40μg/kg。[结论]根据国家标准《动物源性食品中链霉素残留量测定方法酶联免疫法》(GB/T21330-2007)的规定,水产品中链霉素的检测下限为50.0μg/kg,此次试验检测鱼虾中链霉素的残留量均符合国家标准。     

干法灰化法测定食品中的铝含量

对铬天青S分光光度法测定食品中铝含量时样品的前处理方法进行了探讨,并优化了测定条件。采用干法灰化处理样品作为测定食品中铝含量的前处理方法,通过优化试验条件,选择合适的波长、pH值、反应时间等试验条件。干法灰化样品测定的结果RSD值为6．42％～25．35％,回收率为96．7％～100．8％,该方法的检出限（3S／N）为0．5μg／mL。采用该方法测定了5类常见面制品中铝含量值．范围在1．40～21．01mg／kg。表明食品样品用干法灰化法处理后,用铬天青S分光光度法测定食品中铝含量,结果稳定可靠,操作简便可行。     

基于阻抗特性的淡水鱼新鲜度快速检测系统

根据阻抗特性与新鲜度之间的关系,建立了淡水鱼新鲜度评价指标,并以此为基础设计了以STC89C52为核心的淡水鱼新鲜度检测仪.对系统的硬件和软件设计进行了详细的介绍.试验表明,该检测仪的检测准确率达90％,能够对淡水鱼新鲜度进行快速且无损的检测.     

2种培养基对乳粉中沙门氏菌的定量检测比较

为了掌握食品中沙门氏菌的定量检测方法,对比不同种类培养基对食品中沙门氏菌定量检验结果的差异,参考国家权威部门提供的乳粉中沙门氏菌标准物质定值实施方案及GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》的要求对3份沙门氏菌标准物质样品进行沙门氏菌的定量检测。结果显示,使用XLD培养基和沙门显色培养基,在没有其他干扰菌的情况下,均可对沙门氏菌进行有效的计数。     

常见病原菌基因组DNA快速提取试剂盒研制

以单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等6种常见食源性致病菌为研究对象,优化试剂盒工艺参数,采用琼脂糖凝胶电泳及OD260/OD280分析基因组DNA提取效果。结果表明,试验试剂盒可在30 min内完成基因组DNA提取,对常见10类食品样品抗基质干扰能力强。与实时荧光PCR技术联用,检测染菌量1~10 cfu·25 g-1食品样品时,仅一次增菌可得阳性结果;市售食品样品检测与国标方法结果无显著差异。所研制病原菌基因组DNA提取试剂盒适用于食品病原菌快速检测。     

4种食源性致病菌多重PCR检测技术的研究及应用

为建立一种利用多重PCR技术检测和鉴定沙门氏菌(Salmonellla spp)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的方法,根据沙门氏菌侵袭力蛋白A基因(invA gene)、单核细胞增生李斯特菌蛋白转录调控基因(prfA gene)、金黄色葡萄球菌自溶素基因(alt gene)、蜡样芽孢杆菌的促旋酶B亚单位基因(gyrB gene)设计引物,进行多重PCR扩增,并对多重PCR反应体系进行优化。在此基础上建立了4种致病菌的多重PCR检测体系,同时以国标法进行对比验证。结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法简单、快速、灵敏度高,具有很好的应用前景。     

餐饮废渣固态发酵生产蛋白饲料过程中菌种和辅料筛选研究

[目的]研究利用餐饮废渣固态发酵生产蛋白饲料过程中的菌种和辅料筛选。[方法]分析餐饮废渣的主要成分,选取8株菌种和6种辅料进行固态发酵试验,以确定最优的菌种和辅料。[结果]白地霉可有效提高产品的蛋白含量,解脂亚罗酵母可分解废渣中的油脂,黄孢原毛平革菌可降解废渣中的纤维素和木质素。复合菌种的接种量为15．0％,白地霉、解脂亚罗酵母、黄孢原毛平革菌3种菌种的最佳配比为3：3：2,餐饮废料与辅料的添加量最佳比例为餐饮废渣：豆饼：麦麸=8：2：1,此条件下,复合菌种以及辅料通过固态发酵生产的高蛋白饲料能够达到饲料的生产要求。[结论]得到餐饮废渣发酵高蛋白饲料的最适菌种和辅料及其配比,为生产出达到国家标准的饲料奠定基础,并为餐饮废渣的处理提供了一条出路。     

ASE-SPE-HPLC/MS/MS检测鱼体内的雪卡毒素

雪卡毒素中毒是一种全球暴发的海洋食源性疾病,食用含有0.1 μg雪卡毒素的珊瑚鱼即可引起中毒。研究建立了一套快速、高效、高灵敏度的ASE-SPE-HPLC/MS/MS检测方法来保证人类健康,该方法在1.0～50.0 μg·kg-1范围内线性良好,相关系数在0.99以上,检出限为0.03 μg·kg-1,定量下限为0.1 μg·kg-1,基质加标的回收率在95%以上。较之传统方法,该方法有较好的回收率和提取效率。     

镉对几种淡水鱼类外周血红细胞微核率的影响

Ｃｄ＾２＋对黄鳝、泥鳅、银鲫、白鲢的微试验结果表明：Ｃｄ＾２＋能诱发这４种鱼类血红细胞产生微核,但不同种类对其诱变作用的敏感性不同;在试验剂量范围内,这４种鱼类外周血红细胞微核有随Ｃｄ＾２＋质量浓度增大而升高的趋势。由此提示,利用鱼类外周血红细胞微核试验检测水体诱变物是可行的。     

高效液相色谱法测定鱼粉中组胺含量

建立了鱼粉中组胺的柱前衍生、液相色谱检测方法。样品经高氯酸溶液提取、丹磺酰氯衍生化反应后经高效液相色谱—紫外检测器检测,外标法定量。方法的检出限为50 mg/kg,浓度在2.0～80.0μg/mL范围内,线性良好（R2=0.999 3）,添加浓度在50、300、1 000 mg/kg时,回收率均大于70%,相对标准偏差（RSD）小于7%,结果表明该方法可适用于鱼粉中组胺的测定。