槲皮素对肉鸡脂肪细胞环腺苷酸信号通路的作用

【目的】研究槲皮素对肉鸡脂肪细胞甘油三酯沉积过程中环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）信号通路的作用。【方法】将脂肪细胞随机分5组,每组6个重复;空白对照组为基础培养液,溶剂对照组为含2‰二甲基亚砜（DMSO）的培养液,试验组为含10、20和40 mg•L-1槲皮素的培养液,分别于24、48和72 h收集细胞及培养液;ELISA法测定乙酰CoA羧化酶（acetyl CoA carboxylase,ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FAS）、脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase,LPL）、cAMP、腺苷酸环化酶（adenylate cyclase,AC）、磷酸二脂酶（phosphodiesterase,PDE）、蛋白激酶（protein kinase A,PKA）含量;紫外分光光度计测定甘油三酯（triacylglycerides,TG）含量。【结果】与空白对照组相比,①溶剂对照组各指标均无显著差异（P＞0.05）;②20和40 mg•L-1槲皮素组ACC、FAS、LPL、TG和PDE含量显著降低（P＜0.05）,cAMP和PKA含量显著增加（P＜0.05）;③3个槲皮素组AC含量均无显著差异（P＞0.05）。【结论】一定剂量槲皮素可通过调控cAMP信号通路抑制脂肪合成,并减少脂肪沉积。     

兔骨髓间充质干细胞体外分离培养及冻存

对分离获得的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行低温冻存研究。用红细胞裂解法体外分离培养BMSCs,采用SABC法进行鉴定;冻存后复苏,台盼蓝染色检测细胞复苏率,观察冻存时间(15d,30d,90d)对各代(P1,P3,P9代)细胞复苏效果的影响;向脂肪细胞诱导分化验证其干细胞多潜能分化特性。结果表明:BMSCs呈长梭形,聚集成旋涡状均匀生长,SABC法鉴定其为BMSCs;冻存前后P1、P3代细胞活力好,增殖速度快;P9代细胞增殖缓慢;冻存时间对P1、P3代细胞复苏率的影响不显著(P0.05),复苏率较高;但是P9代细胞复苏率极低,并且随着冻存时间的延长,细胞复苏率逐渐降低;冻存复苏的细胞向脂肪细胞诱导分化,油红浸染红色。可见:红细胞裂解液法分离获得的BMSCs生长生物学性状稳定;P3代以前冻存增殖和分化特性不受影响,可作为种子细胞用于后续研究。     

枸杞多糖对泌乳母兔生产性能及血清生化指标的影响

【目的】研究日粮中添加枸杞多糖对泌乳母兔生产性能及血清生化指标的影响,为枸杞多糖在家兔日粮中的应用提供理论依据。【方法】选择同期分娩的48只泌乳獭兔,按照胎次、产仔数、体重相近的原则,随机分成4组,每组12只,每组仔兔总数相等（72只）。Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在饲喂基础日粮的基础上分别添加0.5%、0.75%、1%的枸杞多糖,试验期共30 d。【结果】添加0.5%、0.75%和1%枸杞多糖组的仔兔35日龄断奶窝增重分别比对照组提高了5.95%、4.60%和6.47%,但差异均不显著（P＞0.05）;各试验组仔兔的断奶成活率与对照组相比均差异极显著（P＜0.01）;各试验组母兔的泌乳力与对照组无显著差异（P＞0.05）;各试验组母兔和同窝仔兔的平均日采食量与对照组相比差异均不显著（P＞0.05）;添加0.5%、0.75%和1%枸杞多糖组的母兔泌乳35 d后的体重失重分别比对照组低20.9%、16.2%和15.5%,但差异均不显著（P＞0.05）。添加0.5%、0.75%和1%枸杞多糖组母兔血清LDH含量分别比对照组降低了32.6%（P＜0.01）、19.8%（P＜0.05）和48.3%（P＜0.01）;其余检测指标在各试验组母兔血清中的含量与对照组相比有不同程度的降低或升高,但均差异不显著（P＞0.05）。【结论】在泌乳母兔日粮中添加枸杞多糖可以不同程度地提高仔兔断奶成活率、促进仔兔的生长发育、降低母兔在泌乳期的失重,且对血清生化指标无不良影响。     

腺苷甲硫氨酸对成肌细胞成脂分化及脂肪沉积的影响

【目的】以小鼠成肌细胞（C2C12）为模型探讨蛋氨酸代谢产物腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine,SAM）对肌肉来源的多能干细胞成脂分化及脂肪沉积的影响。【方法】分别用含有0、0.25、1.0和2.0 mmol•L-1 SAM的培养基处理细胞,在处理后的0、24、36和48 h分别对各处理组细胞进行油红O染色观察细胞形态并测定光密度（OD）值;在处理后第2天收集细胞总RNA与总蛋白,分别用RT-PCR和western blotting方法检测细胞成脂相关基因的mRNA与蛋白表达水平。【结果】经SAM处理后,细胞表现出脂肪细胞的形态特征;细胞内脂肪沉积水平上升,并且随SAM处理浓度的升高呈现出剂量依赖效应;细胞的脂肪特异性基因PPARγ、C/EBPα的mRNA及蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;其它特异性基因aP2、FAS及SREBP-1的表达在经SAM处理后呈剂量依赖性升高（P＜0.05）,其中2.0 mmol•L-1 SAM处理组升高最为显著,三者mRNA表达水平分别上升了6.86（P＜0.01）、3.45（P＜0.05）和3.48（P＜0.01）倍。【结论】SAM可以促进C2C12细胞成脂分化及细胞内脂肪的沉积。     

IGF-Ι对绵羊冷冻精液质量的影响

【目的】探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-I(IGF-Ι)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ι添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础。【方法】以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150和250 ng/m L)的IGF-Ι,通过SYBR-14/PI双染法、低渗肿胀试验和吖啶橙(AO)染色法检测解冻精液在孵育0、1和2 h后的顶体完整性、质膜完整性和DNA完整性,并通过体外培养验证其体外受精效果。【结果】Ⅱ组(IGF-Ι添加浓度100 ng/m L)的冷冻精液解冻孵育0、1和2 h后,其精子顶体完整性呈逐渐下降趋势,但整体效果优于其他试验组;在精子质膜完整性和DNA完整性方面,也表现为Ⅱ组高于其他试验组,且孵育时间越短(1 h内),效果差异越明显,均显著高于对照组(P0.05)。体外受精试验结果显示,5个试验组间的卵裂率和囊胚发育率均不存在显著差异(P0.05),但以Ⅱ组的体外受精效果略优于其他试验组。【结论】绵羊冻精稀释液中添加IGF-I可有效增强精子活力,改善冻精存活率,维持顶体、质膜和DNA完整性,但要求绵羊冷冻精液须在解冻后1 h内完成相关操作。     

促性腺激素促进雄性小鼠体内卵巢移植体卵泡卵母细胞生长发育的研究

 【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21 d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21 d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组（90.7%）差异不显著（P＞0.05）。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为（41.4±25.8）枚,2-细胞胚胎发育率为17.5%,未能发育至囊胚;处理组移植体有黄体形成,有的卵泡中有扩展的卵丘卵母细胞复合体,平均回收卵母细胞数为（33.4±20.1）枚,其中MⅡ期卵母细胞为（8.5±7.1）枚,GV期、MⅡ期卵母细胞受精后2-细胞胚胎的发育率分别为33.9％和44.3%,囊胚发育率分别为0.48%和6.3%;试验组间回收卵母细胞数差异不显著（P＞0.05）,2-细胞胚胎发育率、囊胚发育率差异极显著（P＜0.01）。试验组卵母细胞2-细胞胚胎发育率显著低于对照组（P＜0.01）,处理组MⅡ期卵母细胞囊胚发育率与对照组差异不显著（P＞0.05）。【结论】外源促性腺激素对雄性小鼠卵巢移植体具有促进卵泡发育、卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,但不增加卵母细胞产量。     

七日龄小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存*

 在DMEM培养液中添加10%小牛血清（NBS）及10%二甲基亚砜（DMSO）作为冻存液，慢速降温冷冻，液氮保存7日龄小鼠生精小管及完整睾丸，37 ℃水浴复苏，0.25%胰蛋白酶消化成单细胞，台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果：生精小管及完整睾丸冷冻复苏后细胞复苏率分别为87.3%及85.0%，两复苏率之间无显著差异，与生精小管单细胞对照组相比也无显著差异。冷冻损失率分别为10.1%及12.4%。结果表明，对于7日龄小鼠生精小管及完整睾丸，以10% DMSO为抗冻剂，慢速降温冷冻，液氮保存，37 ℃水浴复苏是一种适宜的冷冻保存方法。     

不同硒源对鹅早期生产性能、屠宰性能、肉品质、肌肉常规养分、免疫与抗氧化功能的影响

 【目的】研究不同硒源对鹅生产性能、屠宰性能、肉品质、肌肉常规养分、免疫和抗氧化功能的影响。【方法】试验选用1日龄健康、体重相近的肉鹅96只（P＞0.05）,按单因素完全随机设计分为对照组、亚硒酸钠组、酵母硒组和纳米硒组4组,每组3个重复,每个重复8只;对照组饲喂基础日粮,其它3组分别在基础日粮中添加0.3 mg&;#8226;kg-1水平的亚硒酸钠、酵母硒和纳米硒。【结果】除9周龄酵母硒组胸肌率、腿肌率显著高于对照组外（P＜0.05）,4、9周龄其余各试验组鹅的体增重、料重比、屠宰性能指标均与对照组差异不显著（P＞0.05）,且不同硒源间对鹅的生产性能也无显著性影响（P＞0.05）。9周龄肌肉失水率、硬度、水分、粗脂肪、灰分含量各试验组显著低于对照组（P＜0.05）,不同硒源间差异不显著（P＞0.05）;各试验组滴水损失显著低于对照组（P＜0.05）,且酵母硒组显著低于亚硒酸钠组（P＜0.05）;肌红蛋白含量各试验组显著高于对照组（P＜0.05）,酵母硒组显著高于亚硒酸钠组（P＜0.05）;各试验组粗蛋白含量显著高于对照组（P＜0.05）,且酵母硒和纳米硒组显著高于对照组（P＜0.05）,但不同硒源间差异不显著（P＞0.05）。除9周龄亚硒酸钠组、纳米硒组脾脏指数与对照组差异不显著外（P＞0.05）,第4、9周龄其余各试验组胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数均显著高于对照组（P＜0.05）,但不同硒源间差异不显著（P＞0.05）;第4、9周龄T淋巴细胞转化率与对照组相比,亚硒酸钠组、纳米硒组均显著提高（P＜0.05）,酵母硒组极显著提高（P＜0.01）,且酵母硒组显著高于亚硒酸钠组（P＜0.05）。各试验组4、9周龄血清与肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）,总超氧化物歧化酶（T-SOD）和总抗氧化能力（T-AOC）活力均显著高于对照组（P＜0.05）;各试验组4、9周龄血清与肝脏中丙二醛（MDA）和过氧化氢（H2O2）均显著低于对照组（P＜0.05）;不同硒源的4周龄试验肉鹅血清中GSH-PX活力差异不显著（P＞0.05）,4周龄肝脏、9周龄血清和肝脏酵母硒组均显著高于亚硒酸钠组（P＜0.05）;4、9周龄试验肉鹅血清与肝脏中的T-SOD活力差异不显著（P＜0.05）;4、9周龄血清,4周龄肝脏酵母硒组T-AOC均显著高于亚硒酸钠组（P＜0.05）,9周龄肝脏纳米硒组显著高于亚硒酸钠组（P＜0.05）;MDA含量,4、9周龄血清与肝脏酵母硒组均显著低于亚硒酸钠组（P＜0.05）;4、9周龄血清与肝脏H2O2含量差异不显著（P＜0.05）。亚硒酸钠和纳米硒组cGPx基因在肝脏中的表达量显著高于对照组（P＜0.05）;酵母硒组极显著高于对照组（P＜0.01）,酵母硒组显著高于亚硒酸钠和纳米硒组（P＜0.05）。【结论】日粮中添加不同硒源对鹅的生产性能和屠宰性能无显著性影响（P＞0.05）,但是能够改善鹅的肉品质和鹅肌肉的营养成分含量,增加机体免疫功能和抗氧化能力;酵母硒比亚硒酸钠和纳米硒的作用更为显著。     

大额牛冻精在瘤牛超数排卵中的应用效果及F1代的亲子鉴定

【目的】本研究旨在探讨大额牛（Bos frontalis）冻精在瘤牛（Bos indicus）体内胚胎生产及杂交改良中的应用前景。【方法】对9头瘤牛（婆罗门牛）供体进行超排,发情后将供体分为试验组（n=5）和对照组（n=4）,分别用大额牛和瘤牛（婆罗门牛）冻精人工授精（AI）,以第1次AI之日为0天,在第7天回收胚胎;对试验组287号供体左侧子宫角回收胚胎,右侧子宫角使胚胎继续着床妊娠;对287号母牛所产F1代犊牛（大额牛×瘤牛）进行亲子鉴定;测定F1代牛的初生、6月龄和12龄的体重、体尺指标。【结果】试验组和对照组供体的受精率分别是90.5 %和80.8%,头均获胚数分别是4.2±1.3枚和6.5±4.7枚,可用胚数分别是3.0±1.2枚和4.3±5.3枚,可用胚率分别是71.4%和65.4%,两者差异不显著（P＞0.05）;287号母牛左侧子宫角回收到2枚可用胚,右侧子宫角内胚胎继续发育,并成功产下1头母犊,妊娠期为288 d;对F1代犊牛亲子鉴定显示,9个微卫星座位上犊牛与公牛、犊牛与母牛都具有共享的等位基因,父子关系相对机会（RCP）为99.9949%,证明此例亲子鉴定的确是一个三联体家庭,从而证实了种间杂交的真实;F1代牛的初生、6月龄和12月龄重分别为31.5 kg、180.0 kg和280.0 kg;初生～12月龄平均日增重达680.8 g。【结论】大额牛冻精在瘤牛超排中应用效果好;并获得国内首例大额牛（独龙牛）与瘤牛杂种牛犊;F1代牛生长较快,杂种优势明显。     

抑制钙信号转导对柔嫩艾美耳球虫入侵细胞的影响

 【目的】探讨柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）入侵细胞与钙信号转导之间的关系,揭示鸡柔嫩艾美耳球虫病的发生机制。【方法】采用体外狗肾细胞（madin-darby canine kidney cell,MDCK细胞）培养技术,检测了细胞外缺钙、Ca2+内流阻断剂（硝苯地平）和钙调蛋白抑制剂（三氟拉嗪）对E. tenella子孢子入侵率的影响,并测定了培养细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）和细胞活性。【结果】E. tenella子孢子入侵细胞的抑制率随着细胞外Ca2+浓度的降低而升高。钙离子浓度降低到600 μmol•L-1时,入侵率（23.33%）均极显著低于对照组（P＜0.01）;细胞外无钙时,入侵抑制率高达53.18%;硝苯地平和三氟拉嗪均能极显著抑制子孢子的入侵（P＜0.01）,其中10 μmol•L-1的硝苯地平和50 μmol•L-1三氟拉嗪分别对子孢子的入侵抑制率达71.41%和97.13%,二者合用入侵抑制率可达98.59%。在E. tenella子孢子入侵细胞的过程中,MDCK细胞的活性均在90%以上,与对照组差异不显著（P＞0.05）,接种E. tenella子孢子的MDCK细胞培养液中LDH的活性与未接种的活性差异不显著（P＞0.05）。【结论】细胞外钙缺乏、钙通道阻断剂硝苯地平和钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对E.tenella子孢子入侵MDCK细胞均有抑制作用,但子孢子入侵对MDCK细胞的活性无明显影响。     

乳果糖替代饲用抗生素对AA肉仔鸡生产性能和屠宰性能的影响

[目的]研究乳果糖替代饲用抗生素后对AA肉仔鸡生产性能和胴体品质的影响.[方法]选用180只1日龄AA肉仔鸡,随机分成5组,每组3个重复,每个重复12只.阴性对照组饲喂基础日粮;抗生素组添加0.3 g/kg那西肽和0.25 g/kg硫酸粘杆菌素预混剂;试验组分别添加0.5;、1.0;和1.5;乳果糖.测定生产性能及胴体指标.[结果]各组肉仔鸡活体重分别为2 164.22、2 057.58、2 101.43、2 208.86、2 172.00 g,差异不显著(P＞0.05).料重比分别为2.15、1.90、1.95、1.96、2.02,抗生素组显著低于阴性对照组13.16;(P＜0.05),但其它各组均差异不显著(P＞0.05).乳果糖组肉仔鸡平均日增重、平均日采食量较抗生素组均有所提高,但差异不显著(P＞0.05).添加抗生素、1.0;、1.5;乳果糖肉仔鸡的存活率显著提高.乳果糖在很大程度上改善了肉仔鸡的胴体品质,其中0.5;、1.0;乳果糖组比抗生素组腹脂率分别降低3.48;(P＞0.05)、17.24; (P ＞0.05).[结论]添加不同水平乳果糖替代饲用抗生素后均具有提高肉仔鸡生产性能、改善胴体品质的趋势,综合生产性能和胴体品质来看,1.0;乳果糖的替代效果较佳.     

谷氨酰胺替代饲用抗生素对AA肉仔鸡生产性能和胴体品质的影响

[目的]研究谷氨酰胺替代饲用抗生素后对AA肉仔鸡生产性能和胴体品质的影响.[方法]选用180只1日龄AA肉仔鸡,随机分成5组,每组3个重复,每个重复12只.阴性对照组饲喂基础日粮,抗生素组添加0.3 g／kg那西肽和0.25g/kg硫酸粘杆菌素预混剂,试验组分别添加0.1;、0.2;和0.3;谷氨酰胺.测定生产性能及胴体品质.[结果]与阴性对照组相比,抗生素组肉仔鸡死亡率和料重比显著降低(P＜0.05),其它指标均无显著性差异(P＞0.05).与抗生素组相比,谷氨酰胺组活体重、平均日增重、平均日采食量均有不同程度的增加.各组料重比差异不显著(P＞0.05),不同水平谷氨酰胺比阴性对照组分别降低了11.40; (P＞0.05)、8.59; (P ＞0.05)、9.69; (P ＞0.05).肉仔鸡宰胴体品质有所改善,添加0.2;、0.3;谷氨酰胺腹脂率分别下降6.25;(P＞0.05)、6.73; (P ＞0.05).[结论]添加不同水平的谷氨酰胺替代饲用抗生素后均具有提高肉仔鸡生产性能和改善胴体品质的趋势,综合生产性能和胴体品质来看,0.3;谷氨酰胺的替代效果较佳.     

ChREBP基因siRNA表达质粒构建及对原代 培养猪脂肪细胞生脂的影响

【目的】构建ChREBP基因siRNA表达质粒,干扰ChREBP在原代培养猪脂肪细胞的表达,研究其在葡萄糖诱导脂肪细胞生脂中的作用。【方法】合成4对靶向ChREBP基因的siRNA寡核苷酸,分别连接于pcDNA™6.2-GW/EmGFP载体构建siRNA表达质粒,测序验证后,采用脂质体介导法转染从3日龄仔猪皮下脂肪组织分离培养的脂肪细胞,荧光定量RT-PCR检测ChREBP基因沉默效率;以葡萄糖浓度为0—20 mmol·L-1的培养液培养转染细胞48 h,测定生脂及生脂基因表达变化。【结果】筛选出了1个转染效果好、ChREBP基因沉默效率达85%的siRNA表达质粒,转染原代培养猪脂肪细胞后,细胞生脂水平及生脂基因ACC1和FAS mRNA表达比阴性对照表达质粒转染细胞和未转染细胞显著降低（P＜0.05）,且生脂水平不受葡萄糖水平的影响（P＞0.05）。【结论】构建的siRNA表达质粒能有效干扰猪脂肪细胞ChREBP表达,葡萄糖通过转录因子ChREBP调控猪脂肪细胞生脂及生脂基因表达。     

MiR-433-3p靶向调节绵羊BCKDHB表达

【目的】通过理论预测与试验验证,旨在揭示miR-433-3p对BCKDHB的调节机制。【方法】利用Target Scan、miRanda和DIANA-micro T 3个在线软件,以BCKDHB的序列预测与BCKDHB有靶标关系的相关miRNAs。为了验证理论上的预测结果,用设计好的BCKDHB 3′-UTR的特异性引物进行PCR扩增,得到目的片段并进行割胶回收和纯化,并将Pmir-GLO与目的片段同时使用Xho Ⅰ和Xba Ⅰ两个限制性内切酶进行双酶切,再用T4连接酶连接双酶切之后的目的片段和Pmir-GLO,成功构建BCKDHB 3′-UTR的双荧光素酶报告载体。从公司购买miR-433-3p的过表达载体mimics和阴性对照载体NC,设置miR-433-3p过表达、阴性对照、空白对照3个组,分别将2组载体和双荧光素酶报告载体利用lipofectamineTM3000转染试剂共转染至miR-433-3p过表达、阴性对照组的HEK-293T细胞中,空白对照组中的HEK-293T细胞正常培养,之后分别检测3组细胞中的荧光活性,得到萤火虫荧光素酶活性和海肾荧光素酶活性,以海肾荧光素酶活性为内参计算萤火虫荧光素酶的相对活性。便于了解miR-433-3p和BCKDHB在绵羊前体脂肪细胞中的调控机制,对采取的绵羊尾部前体脂肪细胞进行离体培养。用过表达miR-433-3p的方法探索miR-433-3p在绵羊前体脂肪细胞中对BCKDHB的调控,提取过表达miR-433-3p前后细胞的总RNA和总蛋白,利用RT-qPCR检测过表达miR-433-3p前后的miR-433-3p和BCKDHB m RNA的表达量、以及利用Western blotting技术检测BCKDHB在过表达前后的蛋白水平。为了解绵羊前体脂肪细胞分化过程中BCKDHB和miR-433-3p表达量的变化,用RT-qPCR检测前体脂肪细胞分化过程中BCKDHB和miR-433-3p的时序表达。为增加结果的可信度,还对分化过程中不同时段的细胞进行了照片采集和油红O染色。【结果】miR-433-3p在BCKDHB3′-UTR的第8—28个碱基处存在理论上的结合位点。通过比较过表达组,阴性对照组,对照组的相对荧光活性发现过表达miR-433-3p后,BCKDHB 3′-UTR重组双荧光载体的相对荧光活性降低(P0.01),说明miR-433-3p可以与BCKDHB 3′-UTR特异性结合,验证了预测结果的准确性。在绵羊前体脂肪细胞中过表达miR-433-3p后,通过比较过表达组和阴性对照组BCKDHB的m RNA和蛋白的相对表达量,发现过表达组BCKDHB m RNA和蛋白的相对表达量低于阴性对照组(P0.05),说明miR-433-3p在绵羊前体脂肪细胞中对BCKDHB有负调控作用。在诱导绵羊前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的过程中,从采集到的图片和油红O染色的结果发现此过程中脂滴聚积得越来越多,油红O染色验证了脂滴的聚集。另外,在分化过程中检测到miR-433-3p和BCKDHB m RNA的表达量呈现负相关关系。【结论】这些结果充分说明miR-433-3p通过与BCKDHB 3′-UTR的结合负调节该基因及其编码蛋白的表达,为进一步研究BCKDHB调节绵羊脂肪代谢的分子机理提供了科学依据。     

供核细胞对绵羊体细胞克隆效率的影响

【目的】在制作克隆胚胎时,供核细胞直接制约着重构胚的融合数量和发育潜力。研究供核细胞对绵羊体细胞对克隆效率的影响。【方法】从供核细胞的静置时间,研究传代次数与周期处理,供核细胞不同克隆株,不同羊源细胞等,以重构胚融合率和囊胚发育率为检测指标,判定单因素供核细胞对克隆胚胎的影响。【结果】在供核细胞静置时间方面,供核细胞静置15~30 min内完成重构胚制作的融合率极显著高于静置2 h左右的供核细胞组(90.10% vs 78.84%)(P< 0. 01),但囊胚率差异不显著(15.58%vs 14.65%)(P＞0.05);在供核细胞传代次数(d1~d3)和汇合期生长时间方面(24 and 48 h ),各组的融合率差异不显著(70.37%、76.03%、71.92% vs 72.97%)(P＞0.05),但囊胚率有增高的趋势(5.96%、9.06%、15.85% vs 20.16%);在同一供核细胞不同克隆株方面,供核细胞对融合率和囊胚率存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的影响;在不同个体方面,供核细胞株对融合率和囊胚率存在极显著的影响(P<0.01)。【结论】15~30 min内的静置供核细胞、传代3次并延长汇合期细胞生长时间(48 h),多选细胞株更有利于克隆胚的制作。     

绵羊MSTN基因慢病毒表达载体的构建及其对成肌细胞的分化作用

【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】 克隆的新疆细毛羊MSTN基因编码区全长序列（1 128 bp）与NCBI上公布的序列99.9%同源,仅在外显子2上存在单碱基突变;Western blotting检测结果显示,MSTN过表达成肌细胞过表达MSTN蛋白;免疫荧光检测表明,MSTN过表达成肌细胞的肌管融合率与肌管直径分别为5.69%和12.35 μm,显著低于非转化成肌细胞（10.21%和18.5 μm）（P<0.05）;Realtime RT-PCR结果显示,MSTN过表达成肌细胞中的Myogenin、p21、MyoD-基因表达显著下调,Smad3基因表达极显著上调（P<0.01）。【结论】 成功构建了细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,MSTN基因对细毛羊成肌细胞的分化具有显著的抑制作用,确定了MSTN基因与Myogenin、p21、MyoD及Smad3基因在成肌细胞分化过程中的调控关系。     

黄花蒿醇提物对奶牛乳腺细胞中共轭亚油酸 合成相关酶基因表达的作用

目的 通过奶牛乳腺上皮细胞体外培养试验,研究黄花蒿乙醇提取物对乳腺上皮细胞中与共轭亚油酸（CLA）合成相关酶的基因SCD表达的影响,探讨其对乳脂肪合成相关酶ACACA和FASN基因以及与脂肪转运相关酶LPL基因表达的影响,旨在从乳腺层次探明黄花蒿乙醇提取物对乳中CLA合成的部分作用机制。方法 将采自于健康泌乳中期荷斯坦奶牛的乳腺组织用保温盒带回实验室,在无菌条件选取腺泡较多的深层组织,采用胶原酶消化法获得乳腺上皮细胞,放于37℃,CO₂浓度为5%的培养箱中进行原代培养。试验所用的细胞是经过复苏的第二代细胞,待细胞复苏后,以3×10 ⁴个/mL的密度接种细胞到24孔板中,分别置于37 ℃的5% CO₂培养箱中培养,采用台盼蓝计数法每天进行一次计数,设3个重复,连续7 d,未计数组每2天换液一次,绘制细胞生长曲线。另外,待细胞生长至对数增殖期,更换新鲜培养液,随机分为4组,即培养液中黄花蒿提取物的浓度为0、3.0、6.0、12.0 mg·L ^-1 ,提取物作用时间均为48 h,检测不同浓度黄花蒿提取物对与脂肪酸合成相关酶SCD、ACC、FAS、LPL 基因表达量的影响。每个处理3个重复。结果 使用倒置显微镜观察,乳腺上皮细胞形态呈铺路石样;在3×10 ⁴个/mL的接种密度下,细胞生长曲线呈S型,在1—2d乳腺上皮细胞为潜伏期,3—6d为指数增长期,之后进入平台期,符合一般细胞生长曲线规律,说明培养的乳腺上皮细胞具有正常的增殖能力,可以用于后续的研究;与对照组相比,添加黄花蒿乙醇提取物有增加SCD酶基因表达量的趋势,其中3mg·L ^-1组显著增加了SCD酶的基因表达量(P<0.05),而6 mg·L ^-1组和12mg·L ^-1组虽然增加了SCD酶的基因表达量,但与对照组相比差异不显著(P>0.05);添加黄花蒿乙醇提取物有增加乳腺上皮细胞中ACACA基因表达量的趋势,但与对照组相比差异不显著(P>0.05),且随着添加剂量的增加,有下降趋势;添加黄花蒿乙醇提取物可以增加乳腺上皮细胞中FASN基因表达量,呈剂量依赖型增加,且12mg·L ^-1组可以显著增加乳腺上皮细胞中FASN基因表达量(P<0.05);添加黄花蒿乙醇提取物有降低乳腺上皮细胞中LPL基因表达量的趋势,呈剂量依赖型降低,且6 mg·L ^-1组和12mg·L ^-1组显著降低了乳腺上皮细胞中LPL基因表达量(P<0.05)。结论 黄花蒿乙醇提取物可以增加奶牛乳腺上皮细胞中SCD、ACACA和FASN酶基因的表达,有利于调控CLA和乳脂肪的生成。     

日粮中添加复合益生菌对奶牛生产性能的影响

[目的]为探讨相同日粮条件下添加复合益生菌对奶牛生产性能的影响.[方法]选用胎次、体重、产奶量基本相似的荷斯坦奶牛120头,随机分为2组,试验组日粮中添加复合益生菌9 ×1012个/d·头,试验期100 d,预饲期10 d,试验期90d.[结果]试验组与对照组相比产奶量分别在60和90d提高了5.4;和5.24;,差异显著(P＜0.05).试验组乳脂率在60和90d分别提高了3.21;和3.83;,并在90d差异显著(P＜0.05);试验期内,试验组乳蛋白率略有提高但无显著差异(P＞0.05);试验期30 d时试验组的乳糖率和非脂固形物比对照组分别提高了1.41;和1.35;,差异显著(P＜0.05),60和90d无显著变化.与对照组相比,试验期30、60和90d试验组的奶牛体细胞数分别下降了8.98;、10.15;和21.14;.[结论]日粮中添加复合益生菌可以显著提高奶牛产奶性能和增强奶牛抗病能力.     

乳果糖替代饲用抗生素对黄羽肉鸡生产性能和屠宰性能的影响

[目的]研究基础日粮中添加乳果糖替代饲用抗生素对黄羽肉鸡生产性能和屠宰性能的影响.[方法]将180只1日龄的黄羽肉鸡随机分为5个处理组(每个处理组3个重复,每个重复12只).阳性对照组在基础日粮中添加饲用抗生素(0.3 g/kg的那西肽+0.25 g/kg的硫酸粘杆菌素预混剂);阴性对照组饲喂基础日粮;试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组在基础日粮中分别添加5、10、15 g/kg的乳果糖.[结果]81 d时各组平均体重分别为2.72、2.66、2.75、2.41、2.76 kg,差异不显著(P＞0.05).8～81 d料重比分别为2.67、2.66、2.59、2.76、2.65,差异不显著(P＞0.05),日粮中分别添加5、10、15 g/kg的乳果糖替代饲用抗生素,黄羽肉鸡81 d体重、饲料转化率、胴体品质等指标上各组间无显著差异(P＞0.05).[结论]从黄羽肉鸡81 d体重、料重比、死亡率等指标综合来看,用添加5 g/kg乳果糖替代黄羽肉鸡饲用抗生素是可行的.