超高效液相色谱法测定牛肉中头孢噻呋残留量的研究

采用了牛肉中头孢噻呋残留检测的超高效液相色谱方法(UPLC).样品中残留的头孢噻呋,用二硫赤藓醇溶液提取,使头孢噻呋及去呋喃甲酰头孢噻呋(DFC)有关代谢物从蛋白或含硫化合物中分离,产生DFC.DFC与碘乙酰胺反应,生成稳定的DFC乙酰胺衍生物(DCA).用C18固相萃取柱对衍生物进行提取.强阴离子交换(SAX)柱纯化,再用强阳离子交换(SCX)柱净化后,进行UPLC分析.头孢噻呋在0.06～10.0μg/mL的质量浓度范围内,呈良好的线性关系;在牛肉组织中添加量分别为500、1 000、2 000μg/kg,添加回收率在80.0%～102%,批内、批间RSD均﹤10%.本方法定量准确,结果重复性好,适用于牛肉中头孢噻呋残留定量分析.     

牛奶和鸡蛋中抗生素残留规律研究

[目的]了解新疆地区奶牛和蛋鸡生产中常用抗生素类药物在牛奶和鸡蛋中的残留情况.[方法]按照新疆地区奶牛和蛋鸡生产中抗生素类药物的使用方法及剂量进行投放,采集牛奶及鸡蛋样品进行检测.[结果]青霉素钾在牛奶中的残留规律为停药1 d>5 d>3 d;头孢噻呋钠在牛奶中的残留规律为停药3 d>1 d>5 d;链霉素在牛奶中的残留规律为停药1 d>3 d>5 d;长效土霉素在牛奶中的残留量在停药1～11 d一直维持在175 μg/kg左右;停药1和3 d,酒石酸泰乐菌素在鸡蛋中的残留量为2 μg/kg左右;头孢噻呋钠在鸡蛋中的残留规律为停药7 d>5 d>3 d>1 d;环丙沙星在鸡蛋中的残留规律为停药11 d>7 d>5 d>1 d>3 d.[结论]除了长效土霉素外,其他药物在休药期内的残留量均低于中国和欧共体(EEC)规定的标准残留限量.     

致病性大肠埃希菌对头孢噻呋的耐药性研究

[目的]以头孢噻呋为底物将大肠埃希菌标准菌株诱导为耐药菌株,研究诱导的耐药菌株对头孢噻呋产生耐药性的机制。[方法]用亚抑菌浓度法对标准菌株C83907和C83845进行诱导,诱导10代后用双纸片法和PCR扩增法,进行超广谱β-内酰胺酶（Extendspectrumβ-lactamses,ESBLs）检测;用试管2倍稀释法测定头孢噻呋对产ESBLs菌株的最小抑菌浓度值;对产生ESBLs的耐药菌株,用试管2倍稀释法测定了头孢噻呋与他唑巴坦钠以不同配比对产生ESBLs大肠埃希菌的最小抑菌浓度。[结果]诱导15代后,头孢噻呋对诱导菌的MIC值8～10μg/ml,且均检测出ESBLs;头孢噻呋与他唑巴坦钠质量比（1∶1～8∶1）联合使用对产生ESBLs的大肠埃希菌的最小抑菌浓度较头孢噻呋单独使用降低20～22倍。[结论]致病性大肠埃希菌对头孢噻呋产生耐药性的主要机制是产生了ESBLs。     

RP-HPLC法测定头孢噻呋混悬注射液含量

建立测定头孢噻呋混悬注射液含量的RP-HPLC法。采用反相高效液相色谱,色谱柱为DiamonsilC18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸水(φ磷酸=0.1%,V乙腈∶V磷酸水=28∶72),流速1.0mL/min,检测波长292 nm。结果显示,测得3批头孢噻呋混悬注射液中头孢噻呋的含量分别为标示量的97.47%、98.02%和97.25%;头孢噻呋在0.0364~1.456μg内与峰面积线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率分别为98.08%、98.95%、98.70%,RSD分别为1.10%、1.12%、0.94%。该方法专属性强,精密度好,准确可靠,可用于测定头孢噻呋混悬注射液中头孢噻呋的含量。     

头孢噻呋在猪肌肉组织中残留HPLC检测方法的优化

头孢噻呋(Cettiofur)是第一个专门用于动物的头孢类抗生素,其抗菌活性强,药代动力学特征优良,毒副作用小,残留低。建立了盐酸头孢噻呋在猪肌肉组织中的高效液相色谱(HPLC)检测方法。结果表明建立的标准曲线相关性良好,肌肉中的平均回收率均在80%以上,日内变异系数均小于5.34%,日间变异系数均小于9.89%,方法具有较好的精密度。     

甘草查尔酮A增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌作用的研究

研究甘草查尔酮A能否增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌的抗菌活性。采用微量肉汤稀释法筛选出对头孢噻呋钠耐药的菌株,用棋盘法、药敏纸片扩散法和生长曲线来测定甘草查尔酮A对头孢噻呋钠抗菌活性的影响。筛选出7株对头孢噻呋钠耐药的菌株,分别对7株耐药菌的分级抑菌浓度(FIC)进行测定,结果均为协同或相加作用。药敏纸片扩散法结果显示,与单独头孢噻呋钠相比,头孢噻呋钠联合16、32、64、128μg/mL甘草查尔酮A时,抑菌圈直径增加。生长曲线测定结果显示,64μg/mL甘草查尔酮A与128μg/mL头孢噻呋钠联合使用时,在15 h的试验时间内,未见明显生长。甘草查尔酮A可增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌的抗菌活性。     

头孢噻呋钠在毛皮动物疾病防治上的应用

头孢噻呋钠（头孢畜健）是全球第一个畜禽专用的第3代头孢菌素，头孢噻呋钠以其优良的抗菌活性、体内动力学过程、极低的药物残留以及动物专用的属性，成为新一代兽药的代表，在兽医临床中具有广阔的应用前景。日照市药械站在门诊中应用齐鲁动物保健品有限公司生产的头孢畜健收到了非常好的效果，现把临床部分病例介绍如下。     

两种新型制剂对人工诱发鸡白痢的疗效观察

为了评价头孢噻呋不同剂型、不同用法对革兰氏阴性菌所致鸡病的临床疗效。采用3日龄雏鸡人工诱发鸡白痢,接种后5小时分别对6组试验鸡给以不同剂量头孢噻呋混悬液(注射)和头孢噻呋钠冻干粉(灌服),每天一次,连用三天,同时对另3组试验鸡用硫酸粘杆菌素、氟苯尼考、氨苄西林混悬注射液作药物治疗对照。用药后15天试验结果表明:头孢噻呋治疗组的平均死亡率为8 3%,对照药物治疗组的死亡率分别为26 6%(氨苄西林混悬注射液)、10 0%(硫酸粘杆菌素)、23 3%(氟苯尼考)。头孢噻呋组的平均治愈率为87 75%,对照药物治疗组的治愈率分别为70%(氨苄西林混悬注射液)、76 6%(硫酸粘杆菌素)、63 3%(氟苯尼考)。头孢噻呋的治疗效果在死亡率、有效率和治愈率的指标比较上,均显著高于对照药物;头孢噻呋混悬液和冻干粉在同剂量水平比较上,疗效无统计学差异;两剂型高、中剂量组的疗效均高于低剂量组。     

复配头孢噻呋对大肠杆菌的药敏试验

试验用3株大肠杆菌标准株和2株地方分离株,选择氯霉素、乳酸环丙沙星、利福平、磺胺-6-甲氧嘧啶钠、氟苯尼考、头孢噻呋和抗菌增效剂舒巴坦钠、TMP进行药敏试验,比较几种药物单一或与增效剂合用对大肠杆菌的体外抑菌效果。试验结果表明:(1)大肠杆菌对头孢噻呋均无耐药性,其它的药物不同程度耐药;(2)头孢噻呋与舒巴坦或TMP复配体外抑菌效果明显,3﹕1配比抑菌效果最好,表明头孢噻呋与舒巴坦或TMP复配具有增效作用,舒巴坦的增效作用优于TMP。     

兔源大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测研究

对河南省部分地区的兔源大肠杆菌做了分离鉴定,并进行兽医临床常用抗菌药物的敏感性检测。从郑州、济源、登封、武陟4个地区的兔场分离鉴定出27株大肠杆菌,进行了11种药物的敏感性检测,结果表明:27株大肠杆菌对多粘菌素的敏感率(96.3%)最高,对头孢噻呋/舒巴坦、头孢噻呋、阿米卡星的敏感率依次为:59.3%、59.3%、55.6%,对兽用常见抗生素头孢噻呋、阿米卡星、氟苯尼考等均有不同程度的耐药现象。     

头孢噻呋钠对鸡常见细菌病的临床疗效评价

为了评价头孢噻呋钠对鸡大肠杆菌病、鸡葡萄球菌病的临床效果。对22日龄尼克红雏鸡人工诱发鸡大肠杆菌病、鸡葡萄球菌病, 攻毒后分别于8h、24h出现临床症状。用头孢噻呋钠粉针以高、中、低剂量分别注射治疗, 1次/d, 连用3天, 同时选用氨苄青霉素粉针、硫酸庆大霉素注射液作药物治疗对照。试验结果: 对鸡大肠杆菌病, 头孢噻呋钠粉针治疗组的死亡率为5% ~7 5%, 治愈率为90%; 硫酸庆大霉素治疗组的死亡率为60%, 治愈率为20%。对鸡葡萄球菌病, 头孢噻呋钠粉针治疗组的死亡率为7 5% ~10%, 治愈率为85%; 氨苄青霉素治疗组的死亡率为17 5%, 治愈率为75%。结果表明: 头孢噻呋钠粉针对鸡大肠杆菌病、鸡葡萄球菌病有确切疗效,在增重、死亡率、治愈率及显效率各项治疗指标方面优于硫酸庆大霉素和氨苄青霉素。     

国家新兽药头孢噻呋钠和注射用头孢噻呋钠的研制与开发获山西省科学技术奖

由我校动物科技学院教授赵恒寿主持研制的国家级新兽药头孢噻呋钠（原料药）和注射用头孢噻呋钠,获得山西省科技进步三等奖。     

他唑巴坦钠与头孢噻呋联用对ESBLs阳性菌的体外抑菌试验

[目的]为克服产生ESBLs细菌的耐药性,指导临床合理用药,控制兽医临床的感染性疾病。[方法]用试管二倍稀释法测定了他唑巴坦钠以1∶8、1∶7、1∶6、1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1与头孢噻呋联合对产生ESBLs细菌的最小抑菌浓度值。[结果]他唑巴坦钠以1∶8与头孢噻呋联合对产生ESBLs细菌的最小抑菌浓度值较头孢噻呋单药降低了16倍。[结论]应该进行兽用他唑巴坦复方制剂的研究。     

头孢噻呋混悬剂体外抗菌活性及抗生素后效应研究

【目的】评价头孢噻呋混悬剂对兽医临床常见的3种标准菌株的体外抗菌活性及抗生素后效应。【方法】以试管二倍稀释法对3种标准菌株进行最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定;采用菌落计数法绘制3种标准菌株的时间-杀菌曲线(KCs);采用平板计数法测定了头孢噻呋混悬剂对3种标准菌株的抗生素后效应(post-antibiotic effect,PAE)。【结果】头孢噻呋混悬剂对大肠杆菌、放线杆菌及猪兽疫链球菌的MIC值分别为:0.076、0.304、0.00475μg·mL-1;MBC值分别为:0.61、0.304、0.00475μg·mL-1;头孢噻呋混悬剂对放线杆菌的杀菌速率最快,对链球菌次之;头孢噻呋混悬剂对大肠杆菌PAE较短,呈现非浓度依赖性,对放线杆菌的PAE较长,呈明显的浓度依赖性,而对猪兽疫链球菌呈现部分浓度依赖性。【结论】头孢噻呋混悬剂具有强效、速效、持效的杀菌作用,可广泛应用于兽医临床。     

鸡蛋中硫酸头孢喹肟残留的高效液相色谱检测方法的建立

[目的]为了解硫酸头孢喹肟在鸡蛋中的残留,以确定蛋鸡用药的合理休药期,建立了硫酸头孢喹肟在鸡蛋内的高效液相色谱(HPLC)残留检测方法。[方法]取空白鸡蛋样品,按质量体积比1∶19的比例添加相应浓度的硫酸头孢喹肟对照品溶液制备生物样品,用酸性乙腈提取药物,正己烷分离脂肪,C18固相萃取小柱净化洗脱后,洗脱液经40℃水浴N2吹干浓缩后复溶,在紫外吸收波长270 nm下进行HPLC检测。[结果]硫酸头孢喹肟在0.02~2.00μg·m L~(-1)浓度范围内线性关系良好,回归方程为:y=164.95x+0.693(R2=0.999 8);方法的最低检测限0.01μg·m L~(-1),定量限0.02μg·m L~(-1);药物在生物样品中的低、中、高浓度分别为0.01、0.10和1.00μg·m L~(-1)时,鸡蛋中硫酸头孢喹肟的回收率为85.6%~90.4%,变异系数为6.59%~10.47%,均在规定的药物残留检测添加回收率和变异系数范围内。此外,该检测方法的特异性好、准确度高,24 h内生物样品在室温、4℃(冷藏)和-20℃(冷冻)条件下稳定性均良好,且临床常用抗菌药物不存在干扰。[结论]经方法学验证,本方法适用于鸡蛋中硫酸头孢喹肟含量的检测,可应用于临床的生物样品检测。     

泵抑制剂对诱导产ESBLs鸡大肠杆菌抗菌药物敏感性的影响

目的:探讨头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋诱导鸡源大肠杆菌耐药产ESBLs与主动外排机制的关系。方法:用头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋诱导3株临床分离菌和标准菌O78至产ESBLs;采用琼脂二倍稀释法观察外排泵抑制剂利血平和CCCP对诱导菌抗菌药物敏感性的影响。结果:加入利血平后,头孢曲松诱导后的菌株,阿米卡星、氟苯尼考、磷霉素组的MIC值变化有统计学差异,耐药率下降范围为25%～75%;头孢噻肟诱导后的菌株,头孢曲松、头孢噻呋、多西环素、氟苯尼考、磷霉素组MIC值变化有统计学差异,耐药率下降为25%～100%;头孢噻呋诱导后的菌株,其中头孢曲松、头孢噻呋、阿米卡星、氟苯尼考、磷霉素有统计学差异,耐药率下降为25%～100%。加入CCCP以后,仅头孢噻肟诱导后的菌株,头孢曲松MIC值变化差异显著;头孢噻呋诱导的菌株,头孢曲松、氟苯尼考差异显著;且耐药率下降范围均为25%～75%;利血平与抗菌药物合用后对诱导菌抗菌药物敏感性的影响高于CCCP。结论:3种头孢类药物诱导后的菌株对10种抗菌药物的外排表型存在差异;鸡大肠杆菌特异性耐药机制ESBLs可激活非特异性耐药机制外排表型的过度表达。     

致病性大肠埃希氏菌ESBLs基因型的检测及其抑制剂的抑酶保护作用

【目的】检测致病性大肠埃希氏菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型,初步研究β-内酰胺酶抑制剂(BLI)-他唑巴坦的抑酶保护作用。【方法】对产生ESBLs的5株致病性大肠埃希氏菌,设计并合成TEM-1和是SHV-12对引物,用PCR方法进行了ESBLs的DNA扩增、测序和基因型分析;用试管二倍稀释法测定头孢噻呋与BLI-他唑巴坦钠以不同配比对产生ESBLs大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度。【结果】从产生ESBLs细菌中均扩增出了TEM型ESBLs产物,但未扩增出SHV型ESBLs产物;头孢噻呋与BLI-他唑巴坦钠(质量比1∶1～8∶1)联合使用,对产生ESBLs的大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度较头孢噻呋单独使用基本降低,最高可降低16倍。【结论】国内畜禽产生ESBLs的大肠埃希氏菌未通过质粒进行细菌间耐药基因的交换,ESBLs的产生与生物种属没有关系,BLI-他唑巴坦有较强的抑制ESBLs作用。     

高效液相色谱法检测鸡蛋中盐酸环丙沙星残留量

[目的]建立检测鸡蛋中盐酸环丙沙星残留的高效液相色谱法。[方法]鸡蛋样品中残留药物用提取液提取、离心、蒸发,水溶解,然后用预活化的C18固相萃取小柱净化,流动相洗脱,洗脱液用HPLC检测。[结果]结果表明,该法对鸡蛋中盐酸环丙沙星的检测限和定量限分别是50、100μg/L。在100、150、200μg/L浓度添加范围内,回收率在70%~83%,变异系数CV<10%。标准溶液在2.5~160.0μg/L的浓度范围内线性关系良好。[结论]该方法简单准确,适应于鸡蛋中盐酸环丙沙星的检测,便于推广。     

蛋、奶中甲硝唑残留检测的高效液相色谱法研究

建立鸡蛋、牛奶中甲硝唑残留检测的高效液相色谱法(HPLC)。样品中甲硝唑用乙酸乙酯提取、浓缩后用正己烷-乙酸乙酯(2∶1)溶解,Silica(SiO2)固相萃取柱净化,氮气吹干,流动相溶解,HPLC测定。固定相为C18色谱柱,流动相为pH 4.3醋酸缓冲液∶乙腈(88∶12,V/V),紫外检测波长325 nm。该方法可检出鸡蛋、牛奶中甲硝唑的最低定量限为1μg/kg,在空白样品添加浓度为1μg/kg时,鸡蛋、牛奶中甲硝唑的平均回收率分别为69%和75%,日间变异系数均小于15%。产蛋鸡连续饲喂含甲硝唑(250 mg/kg)饲料1周,用所建方法可检测到停药后14 d内鸡蛋中原药及代谢物残留。结果表明,该方法的样品处理方法简单,最低定量限、回收率和变异系数符合兽药残留检测方法要求。     

生物膜干涉技术快速定性检测牛乳中喹诺酮类药物残留

[目的]基于生物膜干涉技术建立一种快速检测牛乳中喹诺酮类抗生素残留的方法。[方法]通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定环丙沙星-BSA偶联物,结合纳米金-喹诺酮类抗生素单克隆抗体偶联物,建立了检测牛乳中喹诺酮类抗生素的方法。[结果]所建立的检测方法具有良好的灵敏度,比免疫层析法至少高出1倍。该检测方法还具有良好的特异性．与浓度1000ng／ml的黄曲霉毒素M1、青霉素G、头孢噻呋、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应。该方法还具有良好的重复性,不同基质牛乳检测对检测结果无显著影响。分别采用免疫层析试纸条和建立的金标记BLI检测方法检测43份牛乳（原奶）样品中的喹诺酮类抗生素残留,二者检测结果一致。[结论]生物膜干涉技术检测牛乳中的喹诺酮类抗生素为一种简便、快捷的检测方法,可以用于牛乳中喹诺酮类抗生素残留的快速定性检测。