两种新型制剂对人工诱发鸡白痢的疗效观察

为了评价头孢噻呋不同剂型、不同用法对革兰氏阴性菌所致鸡病的临床疗效。采用3日龄雏鸡人工诱发鸡白痢,接种后5小时分别对6组试验鸡给以不同剂量头孢噻呋混悬液(注射)和头孢噻呋钠冻干粉(灌服),每天一次,连用三天,同时对另3组试验鸡用硫酸粘杆菌素、氟苯尼考、氨苄西林混悬注射液作药物治疗对照。用药后15天试验结果表明:头孢噻呋治疗组的平均死亡率为8 3%,对照药物治疗组的死亡率分别为26 6%(氨苄西林混悬注射液)、10 0%(硫酸粘杆菌素)、23 3%(氟苯尼考)。头孢噻呋组的平均治愈率为87 75%,对照药物治疗组的治愈率分别为70%(氨苄西林混悬注射液)、76 6%(硫酸粘杆菌素)、63 3%(氟苯尼考)。头孢噻呋的治疗效果在死亡率、有效率和治愈率的指标比较上,均显著高于对照药物;头孢噻呋混悬液和冻干粉在同剂量水平比较上,疗效无统计学差异;两剂型高、中剂量组的疗效均高于低剂量组。     

超高效液相色谱法测定牛肉中头孢噻呋残留量的研究

采用了牛肉中头孢噻呋残留检测的超高效液相色谱方法(UPLC).样品中残留的头孢噻呋,用二硫赤藓醇溶液提取,使头孢噻呋及去呋喃甲酰头孢噻呋(DFC)有关代谢物从蛋白或含硫化合物中分离,产生DFC.DFC与碘乙酰胺反应,生成稳定的DFC乙酰胺衍生物(DCA).用C18固相萃取柱对衍生物进行提取.强阴离子交换(SAX)柱纯化,再用强阳离子交换(SCX)柱净化后,进行UPLC分析.头孢噻呋在0.06～10.0μg/mL的质量浓度范围内,呈良好的线性关系;在牛肉组织中添加量分别为500、1 000、2 000μg/kg,添加回收率在80.0%～102%,批内、批间RSD均﹤10%.本方法定量准确,结果重复性好,适用于牛肉中头孢噻呋残留定量分析.     

RP-HPLC法测定头孢噻呋混悬注射液含量

建立测定头孢噻呋混悬注射液含量的RP-HPLC法。采用反相高效液相色谱,色谱柱为DiamonsilC18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸水(φ磷酸=0.1%,V乙腈∶V磷酸水=28∶72),流速1.0mL/min,检测波长292 nm。结果显示,测得3批头孢噻呋混悬注射液中头孢噻呋的含量分别为标示量的97.47%、98.02%和97.25%;头孢噻呋在0.0364~1.456μg内与峰面积线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率分别为98.08%、98.95%、98.70%,RSD分别为1.10%、1.12%、0.94%。该方法专属性强,精密度好,准确可靠,可用于测定头孢噻呋混悬注射液中头孢噻呋的含量。     

甘草查尔酮A增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌作用的研究

研究甘草查尔酮A能否增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌的抗菌活性。采用微量肉汤稀释法筛选出对头孢噻呋钠耐药的菌株,用棋盘法、药敏纸片扩散法和生长曲线来测定甘草查尔酮A对头孢噻呋钠抗菌活性的影响。筛选出7株对头孢噻呋钠耐药的菌株,分别对7株耐药菌的分级抑菌浓度(FIC)进行测定,结果均为协同或相加作用。药敏纸片扩散法结果显示,与单独头孢噻呋钠相比,头孢噻呋钠联合16、32、64、128μg/mL甘草查尔酮A时,抑菌圈直径增加。生长曲线测定结果显示,64μg/mL甘草查尔酮A与128μg/mL头孢噻呋钠联合使用时,在15 h的试验时间内,未见明显生长。甘草查尔酮A可增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌的抗菌活性。     

兔源大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测研究

对河南省部分地区的兔源大肠杆菌做了分离鉴定,并进行兽医临床常用抗菌药物的敏感性检测。从郑州、济源、登封、武陟4个地区的兔场分离鉴定出27株大肠杆菌,进行了11种药物的敏感性检测,结果表明:27株大肠杆菌对多粘菌素的敏感率(96.3%)最高,对头孢噻呋/舒巴坦、头孢噻呋、阿米卡星的敏感率依次为:59.3%、59.3%、55.6%,对兽用常见抗生素头孢噻呋、阿米卡星、氟苯尼考等均有不同程度的耐药现象。     

鸡蛋中头孢噻呋的残留检测技术研究

本试验建立了用高效液相色谱法测定鸡蛋中头孢噻呋残留的方法。鸡蛋样品经二硫赤藓醇提取,碘乙酰胺衍生,C18固相柱萃取净化,甲醇溶液洗脱,洗脱液氮气吹干,用流动相溶解,微孔过滤,HPLC分析。结果表明,用该方法测得鸡蛋中头孢噻呋的最低检测限为10μg/kg,回收率87%以上,日内、日间相对标准偏差小,能够满足鸡蛋中头孢噻呋残留检测技术要求。     

复配头孢噻呋对大肠杆菌的药敏试验

试验用3株大肠杆菌标准株和2株地方分离株,选择氯霉素、乳酸环丙沙星、利福平、磺胺-6-甲氧嘧啶钠、氟苯尼考、头孢噻呋和抗菌增效剂舒巴坦钠、TMP进行药敏试验,比较几种药物单一或与增效剂合用对大肠杆菌的体外抑菌效果。试验结果表明:(1)大肠杆菌对头孢噻呋均无耐药性,其它的药物不同程度耐药;(2)头孢噻呋与舒巴坦或TMP复配体外抑菌效果明显,3﹕1配比抑菌效果最好,表明头孢噻呋与舒巴坦或TMP复配具有增效作用,舒巴坦的增效作用优于TMP。     

头孢噻呋混悬剂体外抗菌活性及抗生素后效应研究

【目的】评价头孢噻呋混悬剂对兽医临床常见的3种标准菌株的体外抗菌活性及抗生素后效应。【方法】以试管二倍稀释法对3种标准菌株进行最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定;采用菌落计数法绘制3种标准菌株的时间-杀菌曲线(KCs);采用平板计数法测定了头孢噻呋混悬剂对3种标准菌株的抗生素后效应(post-antibiotic effect,PAE)。【结果】头孢噻呋混悬剂对大肠杆菌、放线杆菌及猪兽疫链球菌的MIC值分别为:0.076、0.304、0.00475μg·mL-1;MBC值分别为:0.61、0.304、0.00475μg·mL-1;头孢噻呋混悬剂对放线杆菌的杀菌速率最快,对链球菌次之;头孢噻呋混悬剂对大肠杆菌PAE较短,呈现非浓度依赖性,对放线杆菌的PAE较长,呈明显的浓度依赖性,而对猪兽疫链球菌呈现部分浓度依赖性。【结论】头孢噻呋混悬剂具有强效、速效、持效的杀菌作用,可广泛应用于兽医临床。     

致病性大肠埃希菌对头孢噻呋的耐药性研究

[目的]以头孢噻呋为底物将大肠埃希菌标准菌株诱导为耐药菌株,研究诱导的耐药菌株对头孢噻呋产生耐药性的机制。[方法]用亚抑菌浓度法对标准菌株C83907和C83845进行诱导,诱导10代后用双纸片法和PCR扩增法,进行超广谱β-内酰胺酶（Extendspectrumβ-lactamses,ESBLs）检测;用试管2倍稀释法测定头孢噻呋对产ESBLs菌株的最小抑菌浓度值;对产生ESBLs的耐药菌株,用试管2倍稀释法测定了头孢噻呋与他唑巴坦钠以不同配比对产生ESBLs大肠埃希菌的最小抑菌浓度。[结果]诱导15代后,头孢噻呋对诱导菌的MIC值8～10μg/ml,且均检测出ESBLs;头孢噻呋与他唑巴坦钠质量比（1∶1～8∶1）联合使用对产生ESBLs的大肠埃希菌的最小抑菌浓度较头孢噻呋单独使用降低20～22倍。[结论]致病性大肠埃希菌对头孢噻呋产生耐药性的主要机制是产生了ESBLs。     

头孢噻呋混悬注射液的研制及疗效试验

研究了复方头孢噻呋混悬注射液处方、物理稳定性和对临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)鸡志贺氏菌感染的疗效.利用试管二倍法筛选出头孢噻呋和他唑巴坦联用(质量比为2:1)对产ESBLs的鸡志贺氏菌较为敏感,最小抑菌质量浓度(MIC值)为16 mg·L-1,质量分数是头孢噻呋MIC值(128 mg·L-1)质量比的1/8;复方头孢噻呋混悬液由主药、辅料0.2%羧甲基纤维素钠和1.2%司本-80制备而成,沉降比为0.997,再分散性良好.经过在温度为60℃、湿度为75%环境下加速试验6个月后观察,颜色无变化,无粘壁现象,无颗粒凝结,表明物理稳定性良好;该制剂按20 mg·kg-1肌内注射1次,对产ESBLs鸡志贺氏菌感染的治愈率为77%,有效率为85%.     

鸡肉中三聚氰胺残留量检测方法研究

[目的]为检测动物性食品中的三聚氰胺提供参考方法。[方法]以鸡肉匀浆为材料,用高效液相色谱法和气相质谱法检测其中的三聚氰胺含量,并对检测方法的回收率和精密度进行测定。[结果]高效液相色谱法确定的鸡肉中三聚氰胺的最低检测限为1μg／g,最低定量限为2μg/g,在0．05-50μg范围内线性关系良好;方法的回收率大于80％,测定结果的日内变异系数小于7％,日间变异系数小于10％。气相质谱法确定的三聚氰胺的最低检测限为30ng／g,最低定量限为5030ng/g,在5—500ng／g范围内线性关系良好;方法的回收率在80％以上,测定结果的日内变异系数小于8％,日间变异系数小于10％。[结论]该研究为鸡肉中三聚氰胺的检测提供了新方法。     

农药杀虫剂中12种有机磷检测方法研究

[目的]建立12种有机磷类农药同时测定的气相色谱分析方法.[方法]采用HP-5MS毛细管柱和FID检测器,建立了农药杀虫剂中隐性成分敌敌畏、久效磷、乐果、二嗪磷、甲基对硫磷、马拉硫磷、毒死蜱、杀扑磷、硫丹、丙溴磷、三唑磷、炔螨特12种有机磷同时测定的气相色谱分析方法.[结果]12种有机磷的标准偏差均小于0.03 mg/ml;变异系数小于4.0％;线性相关系数均大于0.999;12种有机磷成分5个水平的添加回收率为90.3％ ～ 114.3％.[结论]该方法分离效果好、准确度高、重现性好且操作简单快速.     

10％烯啶虫胺可溶性液剂的分析方法

采用甲醇 水 冰乙酸为流动相,用反相高效液相色谱法和紫外检测器C18柱分离测定烯啶虫胺可溶性粉剂.结果表明,回收率为98.5%～101.33%,变异系数小于2%,线性相关系数为0.9998.此方法简便、快速、准确.     

土壤和大米中得克隆检测方法的研究

为探究对高氯代阻燃剂得克隆选择性好和灵敏度高的检测方法，采用振荡提取和加速溶剂萃取（ASE）两种方法对土壤和大米中得克隆的两种异构体残留进行提取，利用TSQ 8000三重四极杆GC-MS/MS（气相色谱质谱/质谱联用）的二级质谱检测分析，建立了土壤和大米中得克隆的残留测定方法。结果表明，得克隆的两种同分异构体syn-DP和anti-DP在试验测定条件下保留时间比较合适，线性范围分别为5.00×10^-13~4.02×10^-9 g和1.62×10^-12~1.30×10^-8g，最低检出限分别为1.00×10^-13 g和5.0×10^-14 g。对于土壤样品中的syn-DP，在试验设定的添加浓度下，振荡提取和ASE方法添加回收率分别为85.32%~91.42%和90.69%~95.63%，变异系数均小于4.64%；对于anti-DP，振荡提取和ASE方法添加回收率分别为82.45%~90.16%和88.78%~98.23%，变异系数均小于4.96%。采用ASE法，大米中syn-DP和anti-DP的回收率分别为90.56%~98.56%和90.36%~96.56%，变异系数均小于5.05%，振荡提取法回收率小于加速溶剂萃取法，分别为86.47%~90.24%和85.84%~89.61%，变异系数均小于4.53%，达到了痕量syn-DP和anti-DP残留分析方法的要求。研究表明，采用ASE和振荡提取两种预处理样品的方法，二者的回收率均能满足土壤和大米样品中得克隆的痕量残留检测分析方法的要求，且该分析方法灵敏度高、准确性好，适合土壤和大米中得克隆的残留检测。     

盖草能的高效液相色谱分析

用反相液相色谱建立了分析除草剂盖草能含量的方法，采用ＯＤＳ－Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×４．００ｍｍｉ，ｄ），以乙腈－水（７３∶２７）为流动相，用紫外２４０ｎｍ检测，本方法的线性实验，回收率实验、精密度实验均良好，产品测定的变异系数为０．６７％，小于１．５０％。     

液态肥料中氨基酸态氮两种测定方法比较

采用甲醛-指示剂滴定法、甲醛-电极法测定液态肥料中的氨基酸态氮。结果表明,两种方法均适合于液态肥料中氨基酸态氮的测定,其中甲醛-电极法重复性试验标准偏差为0.013 0,变异系数为1.320%,平均回收率为99.25%,回收率标准偏差为0.978 0,变异系数为0.985%,均小于甲醛-指示剂法的相应参数,表明甲醛-电极法检测精度高于甲醛-指示剂法。甲醛用量以10.0 mL为宜。     

3种检测布鲁氏菌荧光定量PCR方法的比较

为了筛选适用于家畜布鲁氏菌病检测的荧光定量PCR方法,合成目前报道最多的布鲁氏菌IS711插入序列、per基因和bcsp31基因的引物和探针,并分别对这3种荧光定量PCR方法的敏感性、特异性、重复性以及63份临床样品检测效果进行比较。结果显示：3种荧光定量PCR方法均具有较好的敏感性且均不与其他常见细菌发生交叉反应;3种方法的批内变异系数和批间变异系数均小于5%。在检测临床样品时,3种方法的敏感性均高于套式PCR方法,其中IS711荧光定量PCR方法与套式PCR方法符合率为95.24%,其他2种方法与套式PCR方法的符合率为98.41%。比较而言,IS711荧光定量PCR敏感性最高,更适合于布鲁氏菌核酸含量低的样品的检测。     

液相色谱法测定蔬菜中的辛硫磷

采用Agilent 1100液相色谱仪,紫外可变波长检测器(VWD)液相色谱法测定西红柿中辛硫磷的残留量。结果表明:其添加回收率在82.0%～97.6%,变异数小于5.62%,符合国家农药残留量测定方法的要求。将此方法用于测定西红柿中辛硫磷的残留量,检测过程简便、快速。     

苦荞新品种‘晋荞麦2号’丰产稳产性分析及应用前景

为北方苦荞生产中提供合理利用‘晋荞麦2号’的依据,根据2006-2008年度国家苦荞品种（北方组）区域试验和2008年度国家苦荞生产试验资料,采用方差分析和新复极差测验法、高稳系数法、结合产量变异系数和适应度对品种进行丰产稳产性分析。结果表明,在2006-2008年国家苦荞品种（北方组）区域试验中和2008年国家苦荞生产试验中,‘晋荞麦2号’平均产量分别为2006.0 kg/hm2和2152.5 kg/hm2,分别比统一对照‘九江苦荞’增产13.3%和24.4%;高稳系数分别为39.80%和5.4%,均小于对照‘九江苦荞’;产量变异系数分别为41.58%和38.85%,均小于对照‘九江苦荞’;适应度分别为48.7%和100%,均高于对照‘九江苦荞’。由此得出,‘晋荞麦2号’是一个丰产稳产性高、适应性强的中熟苦荞新品种,具有较好的广适性,品质好,适宜加工各种苦荞保健产品和进行产业化开发,在中国北方苦荞种植区具有良好的应用前景。     

Establishment of PCR-ELISA for Detecting Glyphosate Resistant Transgenic Soybean

A PCR-ELISA method for detecting the glyphosate resistant transgenic soybean was established and optimized. The results showed that the key parameters of PCR-ELISA were as follows: the concentration of digoxin tag probe was 0.5 μmol · L-1, the time of hybridization reaction was 15 min and the chromogenic reaction should last for 30 min. The sensitivity and the repeatability of our PCR-ELISA method were evaluated, and the results showed that it could be detected when the concentration of DNA template from transgenic soybean samples was 0.01% or higher, and the coefficient of variation of this method was less than 5% in our research condition. These results suggested that PCR-ELISA method establishment in this study had good repeatability and high precision for detecting the transgenic soybean samples.