鸡志贺氏菌产超广谱13内酰胺酶(ESBLs)的分子进化

[目的] 检测鸡志贺氏菌分离株和诱导株所产ESBLs的基因型,探讨其产酶耐药的分子进化机制.[方法] 对1株诱导和5株临床分离产ESBLs细菌分别用TEM、SIIV、CTX-M 3种通用引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型和基因亚型. [结果] 5株临床福氏志贺氏菌质粒上具有相同的TEM序列和相同的SHV序列,TEM型序列与AY903309(TEM-116)序列相比发生了2个位点基因突变即G157A、C409T,其中409位点碱基突变为沉默突变,157位点碱基突变导致相应氨基酸序列53位发生突变Gly53Ser,此氨基酸突变为新的突变位点,所以该TEM型ESBLs是一种新的TEM亚型,暂命名为TEM-1V型;SHV型与AY826418(SHV-12)序列完全相同,为SHV-12型.头孢噻呋诱导标准福氏志贺氏菌,诱导10代时产生了TEM-1型β-内酰胺酶,诱导50代时产生了TEM-1V型ESBLs.[结论] 临床分高鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型为TEM-IV型和SHV-12型,鸡福氏志贺氏菌TEM-1w型ESBLs是由TEM-1型β内酰胺酶直接进化而来.     

猪鸡致病菌β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测与药敏试验

 对分离的猪鸡致病菌，分别进行了?－内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测，并用试管二倍稀释法测定了β－内酰胺环类抗生素或β－内酰胺环类抗生素与抑制剂舒巴坦联用对非产酶菌、产?－内酰胺酶菌、产ESBLs菌的抗菌活性。结果表明，43株分离菌的大多数可产生?－内酰胺酶，3株鸡志贺氏菌为ESBLs阳性菌株。30株分离产酶菌均对阿莫西林、氨苄西林耐药（MIC≥32 ?g/ml），16株非产酶菌（标准菌株及分离株）中的15株对阿莫西林、氨苄西林敏感，只有一株非产酶分离菌耐药。氨苄西林与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时，其对分离产酶菌的MIC值分别降低10~40倍、10~20倍。临床致病菌对三代头孢均敏感，与舒巴坦以2∶1、4∶1配比联用时，三代头孢的MIC值不变。当头孢噻呋、头孢曲松与舒巴坦以2∶1配比联用时，其对产ESBLs菌的MIC值降低2～4倍。     

鸡志贺氏菌产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的分子进化

【目的】检测鸡志贺氏菌分离株和诱导株所产ESBLs的基因型,探讨其产酶耐药的分子进化机制。【方法】对1株诱导和5株临床分离产ESBLs细菌分别用TEM、SHV、CTX-M 3种通用引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型和基因亚型。【结果】5株临床福氏志贺氏菌质粒上具有相同的TEM序列和相同的SHV序列,TEM型序列与AY903309（TEM-116）序列相比发生了2个位点基因突变即G157A、C409T,其中409位点碱基突变为沉默突变,157位点碱基突变导致相应氨基酸序列53位发生突变Gly53Ser,此氨基酸突变为新的突变位点,所以该TEM型ESBLs是一种新的TEM亚型,暂命名为TEM-1V型;SHV型与AY826418（SHV-12）序列完全相同,为SHV-12型。头孢噻呋诱导标准福氏志贺氏菌,诱导10代时产生了TEM-1型β－内酰胺酶,诱导50代时产生了TEM-1V型ESBLs。【结论】临床分离鸡福氏志贺氏菌ESBLs的基因型为TEM-1V型和SHV-12型,鸡福氏志贺氏菌TEM-1V型ESBLs是由 TEM-1型β内酰胺酶直接进化而来。     

致病性大肠埃希菌对头孢噻呋的耐药性研究

[目的]以头孢噻呋为底物将大肠埃希菌标准菌株诱导为耐药菌株,研究诱导的耐药菌株对头孢噻呋产生耐药性的机制。[方法]用亚抑菌浓度法对标准菌株C83907和C83845进行诱导,诱导10代后用双纸片法和PCR扩增法,进行超广谱β-内酰胺酶（Extendspectrumβ-lactamses,ESBLs）检测;用试管2倍稀释法测定头孢噻呋对产ESBLs菌株的最小抑菌浓度值;对产生ESBLs的耐药菌株,用试管2倍稀释法测定了头孢噻呋与他唑巴坦钠以不同配比对产生ESBLs大肠埃希菌的最小抑菌浓度。[结果]诱导15代后,头孢噻呋对诱导菌的MIC值8～10μg/ml,且均检测出ESBLs;头孢噻呋与他唑巴坦钠质量比（1∶1～8∶1）联合使用对产生ESBLs的大肠埃希菌的最小抑菌浓度较头孢噻呋单独使用降低20～22倍。[结论]致病性大肠埃希菌对头孢噻呋产生耐药性的主要机制是产生了ESBLs。     

泵抑制剂对诱导产ESBLs鸡大肠杆菌抗菌药物敏感性的影响

目的:探讨头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋诱导鸡源大肠杆菌耐药产ESBLs与主动外排机制的关系。方法:用头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋诱导3株临床分离菌和标准菌O78至产ESBLs;采用琼脂二倍稀释法观察外排泵抑制剂利血平和CCCP对诱导菌抗菌药物敏感性的影响。结果:加入利血平后,头孢曲松诱导后的菌株,阿米卡星、氟苯尼考、磷霉素组的MIC值变化有统计学差异,耐药率下降范围为25%～75%;头孢噻肟诱导后的菌株,头孢曲松、头孢噻呋、多西环素、氟苯尼考、磷霉素组MIC值变化有统计学差异,耐药率下降为25%～100%;头孢噻呋诱导后的菌株,其中头孢曲松、头孢噻呋、阿米卡星、氟苯尼考、磷霉素有统计学差异,耐药率下降为25%～100%。加入CCCP以后,仅头孢噻肟诱导后的菌株,头孢曲松MIC值变化差异显著;头孢噻呋诱导的菌株,头孢曲松、氟苯尼考差异显著;且耐药率下降范围均为25%～75%;利血平与抗菌药物合用后对诱导菌抗菌药物敏感性的影响高于CCCP。结论:3种头孢类药物诱导后的菌株对10种抗菌药物的外排表型存在差异;鸡大肠杆菌特异性耐药机制ESBLs可激活非特异性耐药机制外排表型的过度表达。     

氟苯尼考联合用药对产ESBLs鸡大肠杆菌抗菌活性的影响

为测定氟苯尼考联合用药对临床分离产ESBLs鸡大肠杆菌的抗菌活性的影响,采用纸片扩散法检测ESBLs菌,并用微量液体2倍稀释法测定单独使用氟苯尼考、黏菌素、头孢噻呋、阿米卡星、多西环素、痢菌净、磷霉素,以及氟苯尼考与上述6种药物不同比例联合使用时对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC).结果发现,临床分离的7株大肠杆菌均产ESBLs,对氟苯尼考、头孢噻呋、痢菌净耐药率高达100%,对阿米卡星、多西环素、磷霉素的耐药率分别为71%、57%、57%.氟苯尼考与黏菌素、阿米卡星、多西环素、痢菌净联合使用时,抗菌活性有所提高,氟苯尼考与多西环素以1:2比例复配时,MIC值下降幅度最大.     

舒巴坦和EDTA使产ESBLs鸡大肠杆菌恢复对抗菌药物敏感性

摘要：为测定舒巴坦和EDTA对抗菌药物体外抗菌活性的影响,采用微量肉汤稀释法,测定10种抗菌药物及其与舒巴坦、EDTA、舒巴坦 EDTA联用对产ESBLs鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,舒巴坦和EDTA可以增强部分抗菌药对产ESBLs鸡大肠杆菌的抗菌活性,产ESBLs菌对常用第三代头孢头孢噻呋、头孢噻肟的耐药率高于80%,对氟喹诺酮类、多西环素、氟苯尼考、阿米卡星、磷霉素的耐药率高达100%,对第四代头孢头孢吡肟的敏感率为100%;对加舒巴坦的头孢噻肟、氟苯尼考、阿米卡星及磷霉素的耐药率低于未加舒巴坦的单方药物,分别为0、88.9%、88.9%、0;对加EDTA的加替沙星、多西环素、氟苯尼考、阿米卡星及磷霉素的耐药率低于未加EDTA的单方药物,分别为30%、11.1%、22.2%、11.1%、0;多数菌株对加舒巴坦 EDTA的阿米卡星、磷霉素、氟苯尼考、头孢噻呋的耐药率较加舒巴坦或EDTA进一步降低,耐药率均为0。     

舒巴坦钠和EDTA使产ESBLs鸡大肠杆菌恢复对抗菌药物敏感性

为测定舒巴坦钠、膜通透性促进剂(EDTA)对抗菌药物体外抗菌活性的影响,采用微量肉汤稀释法,测定10种抗菌药物及其与舒巴坦钠、EDTA、舒巴坦钠+EDTA联用对产ESBLs鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC).结果表明,舒巴坦钠和EDTA可以增强部分抗菌药物对产ESBLs鸡大肠杆菌的抗菌活性,产ESBLs菌对常用第三代头孢噻呋、头孢噻肟的耐药率高于80%,对氟喹诺酮类、多西环素、氟苯尼考、阿米卡星、磷霉素的耐药率高达100%,对第四代头孢头孢吡肟的敏感率为100%;对加舒巴坦钠的头孢噻肟、氟苯尼考、阿米卡星及磷霉素的耐药率低于未加舒巴坦钠的单方药物,耐药率分别为0、88.9%、88.9%、0;对加EDTA的加替沙星、多西环素、氟苯尼考、阿米卡星及磷霉素的耐药率低于未加EDTA的单方药物,耐药率分别为30%、11.1%、22.2%、11.1%、0;多数菌株对加舒巴坦钠+EDTA的阿米卡星、磷霉素、氟苯尼考、头孢噻呋的耐药率均较仅加舒巴坦钠或EDTA的低,耐药率均为0.     

头孢噻呋在雏鸭体内的血液动力学及生物利用度研究

采用高效液相色谱(HPLC)外标法,测定雏鸭血浆中头孢噻呋的代谢产物脱氧呋喃甲酰头孢噻呋(DFC)的浓度,运用药动学分析软件3P97分析药-时数据,研究经内服、静脉注射和肌肉注射头孢噻呋后,药物在雏鸭体内的血液动力学特征.结果表明:静脉注射给药,血浆药物浓度-时间数据符合无吸收因素一室开放式模型,主要动力学参数为t1/22.23h,Co27.29μg·mL-1,k0.30h-1,Vc0.07L·kg-1,AUC100.07mg·L-1·h-1.内服给药,血浆药物浓度-时间数据符合二室开放式模型,主要动力学参数为t1/2.1.64h,t1/2β26.85h,tmax1.09h,Cmax9.08μg·mL-1,AUC89.60mg·L-1·h-1,生物利用度(F)为89.54%.肌肉注射给药,血浆药物浓度-时间数据符合二室开放式模型,主要动力学参数为t1/2α2.28h,t1/2β14.84h,tmax0.28h,Cmax15.23μg·mL-1,AUC为99.32mg·L-1·h-1,F为99.25%.上述结果表明,头孢噻呋经口服和肌肉注射给药,在雏鸭体内的药动学特征优良,其吸收迅速,半衰期较长,生物利用度高.     

吉林地区水稻纹枯病菌对噻呋酰胺药物的敏感基线探讨

为明确吉林省水稻纹枯病对噻呋酰胺药物的敏感水平,采用菌丝生长速率法测定了采自吉林省8个水稻产区分离获得的102株水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)对噻呋酰胺药物的敏感性。结果表明:供试菌株中最敏感菌株的EC50值为0.0109mg·L-1,最不敏感菌株的EC50值为3.0913mg·L-1。多核菌株EC50范围为0.0109~0.2023mg·L-1,双核菌株EC50范围为0.2956~3.0913mg·L-1。供试多核菌株的敏感性频率分布呈近似正态分布,初步确定将多核菌株的EC50平均值(0.0630±0.0388)mg·L-1作为吉林省水稻纹枯病对噻呋酰胺药物的敏感基线。水稻纹枯病菌双核菌株与多核菌株之间对噻呋酰胺药物的敏感性具有显著差异。