一种木本果树基因组DNA提取方法研究

研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组ＤＮＡ提取方法．其改良策略是：在细胞核被裂解前去除细胞质中的多酚类等杂质，防止多酚类物质被氧化，从而排除多酚类等杂质的干扰．利用这一方法提取的柑桔、枇杷、梨、苹果、湖北海棠、桃、樱桃等７种果树基因组ＤＮＡ均能被限制性内切酶完全消化，获得理想的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果，也可作为ＰＣＲ模板应用，成功地进行特异性基因扩增和ＲＡＰＤ．     

一种木本果树基因组DNA提取方法研究

研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组ＤＮＡ提取方法。其改良策略是：在细胞核被裂解前去除细胞质中的多酚类等杂质，防止多酚类物质被氧化，从而排除多酚类等杂质的干扰。利用这一方法提取的柑桔、枇杷、梨、苹果、湖北海棠、桃、樱桃等７种果树基因组ＤＮＡ均能被限制性内切酶完全消化，获得理想的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果，也可作为ＰＣＲ模板应用，成功地进行特异性基因扩增和ＲＡＰＤ。     

核分离—中性微孔滤膜洗脱法检测大麦种胚细胞核DNA DSB

从^3Ｈ－ＴｄＲ预标记的大再生产中胚中分离细胞核,在孔径０．４５μｍ的微孔滤膜上用蛋白酶将其裂解,用ｐＨ１０．０的缓冲溶液进行洗脱,成功建立了适用于植物组织细胞ＤＮＡ ＤＳＢ检测的核分离－微孔滤膜洗脱实验技术,克服了植物组织细胞壁的屏障。     

应用参考家系信息构建猪12号染色体部分微位星位点遗传图 …

为了提高猪１２号染色体遗传图的精度,选择德系大约克与二花脸猪通过回交方法建立了参考家系,采取了两胎共１５４头个体的血样,全血裂解法提取ＤＮＡ后,对每头猪的ＤＮＡ样品进行ＰＣＲ扩增后应用银染法检测了每头个体在猪１２号染色体上３个微卫星位点（ＳＷ１５５３,ＳＷ８７４,ＳＷ１３５０）的基因型,应用ＣＲＩＭＡＰ程序进行了统计分析,得到的３位点间的最佳排离为：ＳＷ１５５３－ＳＷ１３５０－ＳＷ８７５。其中在两     

马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒，而且成功地将ｇＤ基因与病毒前ＤＮＡ一起整合在ＣＥＦＤＮＡ中     

应用参考家系信息构建猪12号染色体部分微位星位点遗传图的研究

为了提高猪１２号染色体遗传图的精度,选择德系大约克与二花脸猪通过回交方法建立了参考家系,采取了两胎共１５４头个体的血样,全血裂解法提取ＤＮＡ后,对每头猪的ＤＮＡ样品进行ＰＣＲ扩增后应用银染法检测了每头个体在猪１２号染色体上３个微卫星位点（ＳＷ１５５３,ＳＷ８７４,ＳＷ１３５０）的基因型,应用ＣＲＩＭＡＰ程序进行了统计分析,得到的３位点间的最佳排序为：ＳＷ１５５３－ＳＷ１３５０－ＳＷ８７４。其中在两个美国肉畜研究中心图中重组率为０的位点（ＳＷ１５５３,ＳＷ１３５０）上发现了重组,并与其他位点做了排序,提高了这一区域的定位精度。     

云南龙陵黄山羊的核型及C－带和Ag－NOR_s研究

采用外周血淋巴细胞培养及染色体分带技术，分析了龙陵黄山羊的核型，Ｃ—带和银染核仁组织区（Ａｇ—ＮＯＲ＿ｓ），结果表明：龙陵黄山羊染色体数为２ｎ＝６０，常染色体及Ｘ染色体为端部着丝粒染色体，Ｙ染色体最小，为中部着丝粒染色体。常染色体着丝粒区均显示Ｃ—带，性染色体未显Ｃ—带．雌性银染核仁组织区（Ａｇ—ＮＯＲ＿ｓ）分布于Ｎｏ．１，２，３，４，５，２５号染色体，雄性分布于Ｎｏ．１，２，２５号染色体，显示了性别及分布多态性。研究还发现三种不同的联合（ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ）。     

猪二价染色体上双色引物原位标记技术初探

人性成熟的猪睾丸中获得比有丝分裂中期明显要长的二价体，采用红、绿两种颜色的报告分子（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ和ｉｏ－１６－ｄＵＴＰ）来标记不同染色体ＤＮＡ的特 目的序列，得到了标记信号。由此探索了一种在猪二价染色体上能同时检测两种不同 列的绰物原位标记（ＰＲＩＮＳ）技术。讨论了影响双色和ＰＲＩＮＳ技术的几个因素。     

球壳孢目真菌高分子量纯DNA的大量提取

采用液氮冷冻研磨破碎菌体细胞壁，氯仿－异成醇反复抽提去蛋白的方法，成功地提取了球壳孢目５属１７种２４个菌株的ＤＮＡ，所得样品纯度高，其Ａ２６０／Ａ２８０多在１．８０～１．９５之间，Ａ２３０／Ａ２６０在０．４１～０．５９之间，紫外吸收光谱符合天然ＤＮＡ标准吸收光谱，热变性增色效应在３２％～４９％之间，可用于Ｔｍ值法测定Ｇ＋Ｃｍｏｌ％和分光光度法分析ＤＮＡ同源性。此法每克湿干菌体可得纯ＤＮＡ４０～８０μｇ，产量高时可达１５９．９μｇ／ｇ，很适合真菌高分子量纯ＤＮＡ的大量提取。     

荧光原位杂交在作物遗传育种研究中的应用

荧光原位杂交是一种原位杂交新技术，具有快速，灵敏，准确和有效等特点，它采用生物示记探针，能够将特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ序列直接定位于染色体上，该文就荧光原位杂交技术在作物遗传育种研究中的应用进行综述，主要包括以下方面：１）检测重复ＤＮＡ序列及多拷贝基因家族；２）鉴定异源多倍体物种中的异源染色体或染色体片段；（３）检测和定位低拷贝或单拷贝ＤＮＡ序列。随着一些新技术的发展，ＦＩＳＨ技术将会在作物育种的更多     

CpG DNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

 将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射 ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂和ＤＮＡ疫苗联合免疫后的抗体水平比单一使用ＤＮＡ疫苗的要高，而佐剂组的发病率、死亡率均低于非佐剂组，保护率则高于非佐剂组。这表明 ＣｐＧ ＤＮＡ佐剂增强了 ＩＬＴＶ ＤＮＡ疫苗的免疫效果。     

一种简单快速分离鉴定少量质粒DNA方法

建立了一种以一定ＥＤＴＡ深度的ＮａＯＨＯ－ＳＤＳ溶液和ＢａＡＣ２溶液快速分离鉴定质粒ＤＮＡ的方法。该法是将菌落直接挑在ＮａＯＨ－ＳＤＳ溶液中，待细菌细胞壁破裂、质粒ＤＮＡＩ了出来后，按比例加入ＢａＡＣ２溶液、离心取上清液电泳、紫外灯下分析鉴定。与其他快速分离鉴定质粒ＤＮＡ的方法相比较，本法具有简单、可靠、省时、无染色体ＤＮＡ及ＲＮＡ污染、灵敏度高（可检出１ｍｍ左右直径的单个菌落听质粒ＤＮＡ）等优点     

诸葛菜基因启动子的分离

利用启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ２首次从诸葛菜总ＤＮＡ中克隆了７个具有启动功能的ＤＮＡ片段，转化Ｅ．ｃｏｌｉ表明最高卡那霉素（ｋｎａ）抗性为１４０μｇ／ｍｌ，最低为２０μｇ／ｍｌ。含启动子片段的７个重组质粒子分别命名为ｐＳＵＰＺ１－７，Ｓｏｕｔｈｒｅｎ印迹表明ｐＳＵＰＺ６对Ｋｎａ的抗性功能来源于诸葛菜的１０ｋｂ，５ｋｂ和３．９ｋｂ片段。     

PEG法GUS基因在水稻原生质体及其愈伤组织中的瞬间表达初报

本文作者构建了ｐＸＭ１和ｐＧＣＹ６两个质粒，其中质粒ｐＸＭ，含有高赖氨酸基因和ＧＵＳ报告基因，质粒ｐＧＣＹ６则由裂解多肽Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ基因和ＧＵＳ基因组成。这两个基因均以ＣａＭＶ３５Ｓ作为启动子，以ＮＯＳ作为终止子。经纯化的质粒ＤＮＡ以ＰＥＧ法导入４个水稻品种：８９－２、Ｌａｃｃａｓｉｎ、Ｃｙｐｒｅｓｓ、台北３０９细胞悬浮系的原生质休中，组织化学检测结果表明，ＧＵＳ基因在原生质体、愈伤组织及     

一种单子叶植物总DNA提取方法的改进及应用

本文报导了一种可用于多种单子叶植物总ＤＮＡ提取的简易方法，其特点是迅速简易、成本低、产量高、纯度好，所得粗提总ＤＮＡ产量达３００μｇＤＮＡ／ｇ组织，经ＲＮＡ酶（ＲＮａｓｅＨ）处理后，电泳检测未发现残余ＲＮＡ。该方法可用于不同用途的单子叶植物总ＤＮＡ的提取与纯化，如用于花粉管导入法分子育种的基因源植物总ＤＮＡ的提取、对转基因植物进行ＤＮＡ分析等研究。     

小麦 B 染色体组双端体旗叶 CO2 导度的研究

采用整套“中国春”Ｂ组双端体为材料，研究了田间条件下不同染色体臂缺失对叶片导度及净光合速率（Ｐｎ）的影响，结果表明：在旗叶一生中，气孔导度（ｇｓ）、叶肉导度（ｇｍ）和净光合速率（Ｐｎ）均于叶片全展达到最大值以后逐渐下降，胞间ＣＯ２体积比（Ｃｉ）自叶片全展后不断增加。各供试Ｂ染色体组双端体材料的叶片导度表现不同，染色体臂１ＢＬ、２ＢＬ、５ＢＬ、６ＢＬ、２ＢＳ和３ＢＳ对气孔导度（ｇｓ）有正效应，７ＢＬ     

辣椒基因组DNA提取与RAPD分析

采用液氮－ＳＤＳ法、ＳＤＳ法和氯化苄法对辣椒的ＤＮＡ进行了提取。结果表明：液氮－ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ具有典型的天然ＤＮＡ分子的标准紫外吸收光谱,其Ａ２６０／Ａ２８０在１．６０～１．７０之间,Ａ２６０／Ａ２３０在１．５～１．８之间,１００ｍｇ叶子ＤＮＡ产量为６０～９０μｇ。用该法提取的辣椒ＤＮＡ适于进行ＲＡＰＤ分析。ＳＤＳ法、氯化苄法不适于辣椒ＤＮＡ的提取。     

18SrDNA序列与同翅目昆虫的分类系统

大量文献资料分析发现，昆虫１８Ｓ ｒＤＮＡ序列可以用作种上分类的指标，同翅目中所有胸喙亚目昆虫的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列比头喙亚目及地翅目昆虫的１８Ｓ ｒＤＮＡ序列长，是典型的分子分类特征。     

食管鳞状细胞癌中人乳头状瘤病毒感染的意义

研究人乳头状瘤病毒可否感染食管鳞状细胞癌及其感染后的意义。方法采用原位杂交和免疫组化法检测３３例ＥＳＣＣ中ＨＰＶＤＮＡ、ＨＰＶ属特异性结核抗原和增殖细胞核抗原。结论８／３３ＥＳＣＣ中可见少量ＨＰＶＤＮＡ阳性细胞。作者认为，ＨＰＶ感染可能在某些ＥＳＣＣ的进展中起一定的作用。     

用非放射性原位杂交技术定位家猪PGD和HSL基因

用地高辛为标记物,以随机引物法标记猪ＰＧＤ ｃＤＮＡ和ＨＳＬ ｃＤＮＡ探针,经与半微量全血培养法制备的染色体进行原位杂交后,将猪ＰＧＤ和ＨＳＬ基因分别定位在猪６号染色体６ｑ＾２５和６ｃｅｎ－６ｑ＾２１区域。