鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定

利用ＩＢＶ全长Ｓ１基因特异性引物,以纯化的３个标准株Ｍ４１、Ｈ５２、Ｔ和６个地方分离株（ＱＤ、ＺＺ、ＧＺ、ＧＪ、ＤＬ和ＹＣ）的基因组ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出预期大小约１．７３ｋｂｃＤＮＡ片段,经ＢＡＭＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切插入到质粒ｐＵＣ１８中,并在大肠杆菌ＪＭ８３中实现了克隆。对６个分离株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物进行ＨａｅⅢＲＦＬＰ分析,表明ＱＤ、ＴＪ属于Ｍ４１基因型,ＺＺ和ＧＺ与Ｔ基因     

含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建

以含有鸡传染性支气管炎病毒Ｈｏｌｔｅ株Ｓ１基因的重组质粒ｐＵＣ１８－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ和ｐＵＣ１８－Ｓ‘１．Ｈｏｌｔｅ为材料,分别构建了可表达ＩＢＶ Ｓ１基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（含ＩＢＶ先导序列）,ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３／４－Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（ＩＢＶ先导序列为融合短肽）,ｐＡｃＧＨＬ－Ｃ－Ｓ１,Ｈｏｌｔｅ。     

拟南芥ATLP-3基因在转基因烟草中的整合和表达

将拟南芥ＡＴＬＰ－３基因从质粒ｐＵＣＴＬ亚克隆到植物表达载体ｐＢＩ１２１中,得到了质粒命名为ｐＢＩＴＬ。被亚克隆到重组质粒ｐＢＩＴＬ的ＡＴＬＰ－３基因通过农杆菌ＬＢＡ４４０４介导法导入烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｃｏ Ｌ．ｖａｒ Ｇｅｘｉｎ Ｎｏ．１）。通过卡那霉素抗性筛选,得到１９株再生烟划植株。ＰＣＲ（用根据ＣａＭＶ３５ｓ启动子和ＮＯＳ终止子序列合成的引物）分析表明,ＡＴＬＰ－基因是在     

新霉素磷酸转移酶Ⅱ基因和β—葡萄糖苷酸酶基因的制备

采取小量快速制务粒ＤＮＡ的方法制备双元质粒载体－ｐＢＩ１０１，用限制性内切酶ＰｓｔＩ从ｐＢＩ１０１中切下新霉素磷酸转移酶Ⅱ（ＮＰＴⅡ）基因，ＨｉｎｄⅢ和ＳａｃＩ切下β－葡萄糖苷酸酶（ＧＵＳ）基因，ＮＰＴⅡ主ＧＵＳ基因分别经琼脂糖凝胶电泳分离，最后用二氧化硅吸附剂从琼脂糖凝胶中提纯出ＮＰＴⅡ和ＧＵＳ基因。     

大麦黄矮病毒缺失复制酶基因植物表达载体的构建及转基因小麦的 …

以大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系的ＲＮＡ为模板,采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,扩增出１１３４ｂｐ的缺失复制酶基因。将扩增的片段克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点上并进行了序列测定,获得正向插入的重组质粒ｐＵＣ１９Ｄ。以Ｋｐｎｌ从Ｘｂａｌ从ｐＵＣ１９Ｄ上切下此基因并插入质粒ｐＥｍｕ－ｍｃｓ－Ｎ得到植物表达载体ｐＰＰＩ８。应用花粉管通道法转化普通小麦品种陇鉴１２７、陕１６０和晋麦４７,通过卡那酶     

云南鼠李科新资料

记载１个新种李叶雀梅藤Ｓａｇｅｒｅｔｉａ ｐｒｕｎｉｆｏｌｉａ Ｃ．Ｙ．Ｗｕｅｘ Ｇ．Ｓ．Ｆａｎｅｔ Ｘ．Ｗ．Ｌｉ和３个云南新记录种亮叶雀梅藤Ｓａｇｅｒｅｔｉａ ｌｕｃｉｄａ Ｍｅｒｒ．，冻绿Ｒｈａｍｎｕｓ ｕｔｉｌｉｓ Ｄｅｃｎｅ．和皱叶鼠李Ｒｈａｍｎｕｓ Ｒｕｇｕｌｏｓａ Ｈｅｍｓｌ。     

番鸭细小病毒M91G27株VP3基因的克隆与序列测定

利用ＰＣＲ技术,从纯化番鸭细小病毒Ｍ９１Ｇ２７毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒结构多肽ＶＰ３基因。将该ＰＣＲ扩增片段克隆入ｐＵＣ１８质粒载体的ＨｉｎｃⅡ和ＳａｃⅠ位点之间,酶切分析筛选到含１．６ｋｂ基因片段的重组质粒ＭＰ１３。结果表明：该片段与国外已报道毒株核苷酸序列有９８．８％的同源性,氨基酸序列有９８．１％的同源性,证明该重组质粒是ＶＰ２基因的克隆。     

马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲⅠ，ＰｓｔⅠ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒糖蛋白Ｄ基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用ＣｌａⅠ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａⅠＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａⅠ位点。     

甘兰型油菜双低品种抗病毒遗传转化的研究

用携带植物抗病毒基因表达栽体ｐＢＴＵ的农杆菌转化油菜双低品种Ｈ０９０．Ｈ１６６，最大量转基因植株。栽体质粒ＰＢＴＵ上有卡那霉素抗性标记基因和ＣａＭ３５Ｓ启动子控制的芜菁花叶病毒ＴｕＭＶ－ｃｐ外壳蛋白基因，用品种Ｈ０９０和１６６的带柄子叶与携带载体质粒的农杆菌共培养后，将其转移到含有６－ＢＡ１－１０ｍｇ／ｌ的ＭＳ培养其中，７－１５天后又将其转移到含有６－ＢＡ１－１０ｍｇ／ｌ的ＭＳ加卡那霉素１０ｍｇ的     

广东省龙眼几种新病原真菌的鉴定

报道了龙眼的６种新病害，分别是：拟盘多毛孢［Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｐａｕｃｉｓｅｔａ（Ｓａｃｃ．）Ｙ．Ｘ．Ｃｈｅｎ］引起的叶枯病，壳二孢（ＡｓｃｏｃｈｙｔｓｌｏｎｇａｎＣ．Ｆ．ＺｈａｎｇｅｔＰ．Ｋ．Ｃｈｉｓｐ．ｎｏｗ．）引起的叶斑病，拟茎点霉（ＰｈｏｍｏｐｓｉｓｇｕｉｙｕａｎＣ．Ｆ．ＺｈａｎｇｅｔＰ．Ｋ．Ｃｈｉ，ｓｐ．ｎｏｖ．）引起的灰色叶枯病，盘二孢（ＭａｒｓｓｏｎｉｎａｅｕｐｈｏｒｉａｅＣ．Ｆ．ＺｈａｎｇｅｔＰ．Ｋ．Ｃｈｉ，ｓｐ．ｎｏｖ．）引起的褐斑病和两种小球腔菌（ＬｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａｌｏｎｇａｎＣ．Ｆ．ＺｈａｎｇｅｔＰ．Ｋ．Ｃｈｉ，ｓｐ．ｎｏｖ．）（ＬｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａｇｕｉｙｕａｎＣ．Ｆ．ＺｈａｎｇｅｔＰ．Ｋ．Ｃｈｉ，ｓｐ．ｎｏｖ．）引起的叶斑病，后５种菌为新种。新种有拉丁文描述，其模式标本存于华南农业大学真菌标本室内。     

Evaluation and Utilization Methods of Wild Soybean (Glycine Soja)Germplasms

ＥｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｏｆＷｉｌｄＳｏｙｂｅａｎ（ＧｌｙｃｉｎｅＳｏｊａ）ＧｅｒｍｐｌａｓｍｓＬｉＸｉｎｈａｉ（ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０，ＰＲＣ）...     

芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。     

肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因快速克隆和鉴定

以提纯的肠炎沙门氏菌染色体ＤＮＡ为材料,在一对含有ＣＵＡＣＵＡＣＵＡＣＵＡ的特殊引物引导下,应用ＰＣＲ扩增出鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ．ｍ,允１．８ｋｂ左右大小,然后以ＵＤＧ法快速克隆到质粒,ｐＡＭＰ１０中,转化第１宿主大肠杆菌ＴＧ１或大肠杆菌ＤＨ５ａ,在氨苄青霉素平板上筛选转化子,小量制备重组质粒ＤＮＡ,再转入第２宿主大肠杆菌ＬＣ－２ａ（ｈａｇ－,ｒｅｃＡ－）,所有转化子均出现动力。其中的一个克隆ｐ     

旋毛虫ES抗原结构基因TSPGⅡ重组表达质粒构建

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ,从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因,经ＥｃｏＲＩ和ＢｓｔＸＩ酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经ＥｃｏＲⅠ,ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ．     

Genus CAMPOCRASPEDON Uchida

ＧｅｎｕｓＣＡＭＰＯＣＲＡＳＰＥＤＯＮＵｃｈｉｄａ,１９５７．ＣａｍｐｏｃｒａｓｐｅｄｏｎＵｃｈｉｄａ,Ｔ．,１９５７．Ｊｏｕｒｎ．Ｆａｃｕｌ．Ａｇｒ．,ＨｏｋｋａｉｄｏＵｎｉｖ．５０（３）：２３７．Ｇｅｎｏｔｙｐｅ：Ｃａｍｐｏｃｒａｓｐｅｄｏｎｓａ...     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ－２－ＵＫ分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２－ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

Genus SYRPHOPHILUS Dasch

ＧｅｎｕｓＳＹＲＰＨＯＰＨＩＬＵＳＤａｓｃｈ,１９６４．ＳｙｒｐｈｏｐｈｉｌｕｓＤａｓｃｈ,Ｃ．Ｅ．,１９６４．Ｍｅｍ．Ａｍｅｒ．Ｅｎｔ．Ｉｎｓｔ．３：５９．Ｇｅｎｏｔｙｐｅ：ＢａｓｕｓｂｉｚｏｎａｒｉｕｓＧｒａｖｅｎｈｏｒｓｔ,Ｊ．Ｌ．Ｃ．,１...     

人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建

采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｈｕＩＧＦ－Ｉ）基因的４条寡核苷酸 片段，再通过片段１、２与３、４末端互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平及酶切连接成为完整的ｈｕＩＧＦ－ＩＤＮＡ片段，用 ＥｃｏＲ　Ｉ／ＰｓｔＩ酶切后克隆于 ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ，经测序证明所得 ＤＮＡ序列与设计的序列完全一致；选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ＡＴＧ下游的６个密码子，并在ＡＴＧ处增加Ｋｏｚａｋ序列后，插入ｐＢＩ１２１的ＢａｍＨＩ／ ＳａｃＩ位点，构建了以 ３５Ｓ为启动子的植物表达载体；以 Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲＩ切下“３５Ｓ－Ｋｏｚａｋ－ＩＧＦ－Ｉ－ＮＯＳ（ｔｅｒ．）”插入 ｐＣＡＭＢＩＡ２３００之Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲ　Ｉ位点，构建成ｈｕＩＧＦ－Ｉ植物表达载体；通过ＣａＣｌ２直接转化法将表达载体导入农 杆菌ＥＨＡ１０５（Ｒｉｆ．ｒ），并以菌落原位杂交技术和 ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌株为培育ｈｕＩＧＦ－Ｉ豆药用植物奠定了基础。     

Idntification of Relaxation Parameters by Computer

ＩｄｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＲｅｌａｘａｔｉｏｎＰａｒａｍｅｔｅｒｓｂｙＣｏｍｐｕｔｅｒＬｅｉＤｅｔｉａｎ；ＭａＸｉａｏｙｕ；ＺｈａｏＳｈｕｈｏｎｇ；ＺｈａｎｇＺｈａｎ（ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１...