用RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种

用随机扩增多态型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，在幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的杂种。结果表明，以两个杂交组合后代及其亲本ＤＮＡ作模板，用随机引物ＵＢＣ２５０－ＵＢＣ－２６６和ＵＢＣ－２７２可以分别扩增出１４００，１４００，３５０６ ５００ｂｐ的多态性片段，作为来自无核亲本的分子标记。     

RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究

用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。     

三对水稻抗白叶枯病近等基因系的RAPD分析

以水稻抗白叶枯病３对近等基因系为材料，对近等基因系基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＰＤ分析，结果显示；经１２０个１０－核苷酸随机引物对３对近等基因系基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增，有２个引物在ＩＲＢＢ３中各扩增出１－２条特异性条带；有３人引物在ＩＲＢＢ４中各扩增出２条特异性条带；有３个引物在ＩＲＢＢ５中各扩增出１－２条特异性条带因轮回中和扩增出２条特异性条带；有３个引物在ＩＲＢＢ５中各扩增出１－２条特异性条带；在     

猪瘟病毒石站株NS4B基因的序列测定及分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，利用２对此物，从猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）强毒石门株感染的猪血中成功扩增了ＮＳ４Ｂ基因，片段大小分别为７５７ｂｐ和７７４ｂｐ。克隆后经酶切鉴定，自动测序和序列分析，结果显示该基因较保守，与其他猪瘟病毒毒株均有很同的同源性，与同 ＢＶＤＶＳＤ－１株和ＮＡＤＬ株也有较高的同源性。     

用RAPD分析鉴定葡萄属远缘杂种

用随机扩增多态型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，在幼苗期鉴定了圆叶葡萄和真葡萄亚属杂交的杂种。结果表明，以两个杂交组合后代及其亲本ＤＮＡ作模板，用随机引物ＵＢＣ－２５０，ＵＢＣ－２６６和ＵＢＣ－２７２可以分别扩增出１４００，１４４０，３５０和５００ｂｐ的多态性片段，作为来自无核亲本的分子标记     

猪瘟病毒石门株NS4B基因的序列测定及分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,利用２对引物,从猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）强毒石门株感染的猪血中成功扩增了ＮＳ４Ｂ基因,片段大小分别为７５７ｂｐ和７７４ｂｐ。克隆后经酶切鉴定,自动测序和序列分析,结果显示该基因较为保守,与其他猪瘟病毒毒株均有很高的同源性,与同属的ＢＶＤＶＳＤ－１株和ＮＡＤＬ株也有较高的同源性。     

大豆育种过程中亲子遗传关系的RAPD研究初报

试验以组合８００２４×中１９亲本及其育成品系Ｂ_１，Ｂ_２为材料，用ＲＡＰＤ技术对其亲子关系进行了研究．１０个随机引物（１０ｂｐｓｅ）的ＰＣＲ扩增结果表明，双亲在遗传上有较大差异，母本８００２４有１３条特征带，父本中１９有６条特征带．其在子代中能够重组，使Ｂ_１，Ｂ_２均具有双亲ＲＡＰＤ标记的特征．但经过多代选择，双亲ＲＡＰＤ特征在育成的子代品系中的分布是不均衡的．Ｂ_１更多地继承了母本８００２４的绝大部分ＲＡＰＤ特征，遗传上更近于母本．Ｂ_２则表现出倾向于父本．这一结果与田间观察结果基本一致，说明用ＲＡＰＤ追踪育种过程，探讨亲子遗传关系是可行的．另外，试验观察到子代品系在继承双亲ＲＡＰＤ特征的同时，还出现了新的子代所特有的ＲＡＰＤ特征．产生这种超亲ＲＡＰＤ特征的真实原因及其意义有待进一步研究．     

采用PCR法和限制性内切酶分析对12种分枝杆菌进行鉴定

采用６５ＫＤａ热激蛋白基因为模板,选择位于３９８－８３６基因序列处的一对分枝杆菌通用引物,扩增出４３９ｂｐ的基因片段。将１２种标准分枝杆菌的ＰＣＲ扩增产物即４３９ｂｐ用ＢｓｔＥⅡ限制性内切酶切分析,根据酶切带 大小,强弱以及带型数量进行分枝杆菌菌种鉴定。     

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF5基因的克隆及序列分析

本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ     

传染性囊病病毒CJ801VP2基因cDNA的序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０，ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７．４％，９７．６％和９６．９％，与变异株，Ａ，Ｅ，ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６．５％，９６．３和９６．７％。     

西瓜炭疽病菌Colletetrichum orbiculare的分子检测

【研究目的】探索西瓜炭疽病菌(Colletetrichum orbiculare )的分子检测技术，为西瓜、甜瓜等生长期和采后炭疽病的快速、准确鉴定和检测提供技术和方法。【采用的主要方法和研究结果】根据GeneBank中Colletetrichum属的24个种的ITS系列，比较设计出一对引物CY1/CY2，可以特异的从西瓜炭疽病菌C. orbiculare和菜豆炭疽病菌C. lindemuthianum菌株中扩增到一条442bp的条带，将这两个种的炭疽菌和其它菌分开。进一步利用RAPD随机引物扩增C. orbiculare和C. lindemuthianum，找出在C. orbiculare中的特异性条带，经过克隆、测序后，设计出一对SCAR引物RB/RC，可以特异的在C. orbiculare中扩增出一条216bp的条带，将C. orbiculare和C.lindemuthianum分开。采用两对引物组成双重PCR，能够将C. orbiculare和其它相关和近似菌株分开。【主要结论】利用上述两对引物组成双重PCR检测体系，可以快速鉴定C. orbiculare，并且能够直接在植物组织中将西瓜炭疽病菌C. orbiculare检测出来，灵敏度可以达到1pg/μl。     

OPAY02型标记与萧山鸡及其杂种早期生产性能相关性的研究

以萧山鸡、SR92A系鸡及其杂交后代为研究对象,以OPAY02为随机引物,将探测到的1660.8与2326.0bp的2条多态性条带分为4种遗传型,2条带同时出现的个体定为A型,1660.8bp带单独出现的个体为B型,2326.0bp带单独出现的个体为C型,2条带均不出现的个体为D型,研究OPAY02型标记与鸡早期生产性能的关系。结果表明:B型标记首次在萧山鸡、SR92A系及其杂交后代检出,其频率为9.30%;在萧山鸡群中,不同带型49日龄体重间效应显著,49、75日龄体重由高到低依次为A>C>B,而在SR92A系和SR92A×萧山的杂交后代中差异不显著,说明不同遗传群体的4种遗传型效应不同。     

茶树品种资源遗传多态性RAPD 分析

探讨了采用RAPD 分子标记法进行茶树及其近缘种分类和亲缘关系鉴别的可能性。结果表明, RAPD 能有效地区分物种间和茶树种内变种间的差异, 阿萨姆类型茶树和中国类型茶树的特异性RAPD 分子标记分别为1 200 bp 的WKA-24 a 和610 bp 的WKA-24 b 。日本茶树品种与中国茶树品种具有较近的亲缘关系。部分越南茶树品种为中-印杂种。图1 表1 参4     

农安籽鹅50周产蛋量的分子遗传标记研究

以未经选育的吉林省地方品种农安籽鹅为试验材料,应用RAPD技术对其有关产蛋性状进行遗传多态性分析,并对其基因组DNA RAPD扩增产物进行多态标记的T检验,结果得到了RMC01-C、RMC06-D、RMD02-G、RMD06-A带等4条多态标记带与50周龄产蛋量性状有着显著的相关关系,以上4条带可作为农安籽鹅50周龄产蛋量标记位点。     

野生稻DNA片段存在于高世代水稻变异系进一步的分子验证

【目的】小粒野生稻(O. minuta) DNA导入水稻保持系V20B，第1代（D1）获得变异株,经过连续16代繁育，选出了完全稳定遗传的新不育系及其保持系“野威A”/“野威B”。本试验旨在从分子水平上证明野生稻DNA转移整合进栽培稻“野威B”基因组中，并能稳定遗传。【方法】通过RAPD分析、RAPD扩增特异条带测序分析及AFLP分析等方法揭示了远缘资源基因组DNA导入栽培稻的高世代变异系的基因组整合了远缘基因组片段。【结果】对供体（小粒野生稻）、变异系（野威B）和受体（V20B）进行RAPD分析发现，变异系含有供体存在而受体不存在的“特异带”，在此基础上，对“特异带”，DNA片段进行了核苷酸序列分析, 发现RAPD引物OPG-11在变异系与供体中扩增出的1对“特异带”DNA片段的长度均为975 bp, 二者间存在97%的同源性，有29个碱基的差异，碱基突变包括转换、颠换、插入及缺失4种类型；同时，AFLP分析表明：高世代（第16代）变异系“野威B”与受体（V20B）存在大量遗传多态性，并含有供体特异AFLP标记。【结论】证明了野生稻DNA向栽培稻的转移整合。     

猕猴桃品种"皖翠"芽变位点的SCAR标记研究

对 "海沃德"与"皖翠"RAPD扩增的2条分子量为740 bp、649 bp的特异带,进行了分离、纯化、克隆与测序,根据测序结果设计出4条20 bp的特异引物,进行SCAR-PCR扩增.SCAR-PCR扩增结果显示,分子量为649 bp的特异带在"皖翠"与"海沃德"中都扩增出了条带,说明"皖翠"这一RAPD扩增特异带并不存在;"皖翠"扩增出现了分子量为740 bp的特异带,而"海沃德"未出现此带,证明"海沃德"与"皖翠"存在此变异位点,成功地将"皖翠"变异的RAPD标记转化为SCAR标记,此标记可应用于"皖翠"品种的快速鉴定.     

天敌对烟粉虱捕食作用的SCAR标记检测

 以烟粉虱和捕食性天敌为研究对象，采用特征序列扩增区域（SCAR）标记法，通过对目的片段的克隆与测序设计烟粉虱特征片段扩增引物，检验该引物的种、虫态及性别特异性，并利用该引物检测捕食性天敌对棉田烟粉虱的捕食作用。研究结果表明，利用SCAR标记法获得了长度为347 bp的烟粉虱特异性片段（GenBank登录号为AY841800），根据此片段的碱基序列设计烟粉虱特异引物1对TB-F/TB-R 94585, 其扩增片段约为240 bp；种特异性检验结果表明，该引物只对烟粉虱具有扩增能力，对温室粉虱及其它相关种类不具有扩增效果；同时该引物对不同虫态、不同性别的烟粉虱具有同样的扩增效应。田间检测结果表明，同种天敌昆虫幼体捕食作用检出率高于成虫；在所检测的4类群9种捕食性天敌中，龟纹瓢虫幼虫、异色瓢虫幼虫、草蛉幼虫及东亚小花蝽成虫和蜘蛛对烟粉虱捕食作用的检出率高于50%。     

番鸭随机扩增多态性DNA及遗传多样性研究

利用随机扩增多态DNA(RAPD)技术分析番鸭的遗传多样性,20个引物共扩增出164条带,分子量约在200 ～2 000 bp之间,番鸭20个个体间遗传距离为0．4572～0．0177,群体内个体间遗传相似度(F)为0．9823～0．5428,遗传多样性指效(Ho)平均为0．1639．结果表明番鸭DNA的同源性高,品种的纯度保持较好．     

Identification of <Emphasis Type="Italic">Habrobracon hebetor</Emphasis> Populations Using RAPD Markers

It was found that food preferences and conditions of breeding of Habrobracon hebetor laboratory populations vary considerably. In this regard, it is necessary to identify populations within the studied species using DNA markers: an effective and reliable means for assessing the genetic differences between samplings of this insect species. A molecular genetic analysis of two different geographic populations of the Habrobracon hebetor entomophage (from Krasnodar, Russia, and Chimkent, Kazakhstan) was carried out using RAPD markers; 21 RAPD primers were tested for specificity to H. hebetor DNA. Five RAPD primers (OPA05, OPA10, OPB01, OPB04, and UBC519) were identified that have high specificity and the ability to differentiate H. hebetor populations. DNA markers that are specific for the Krasnodar and Chimkent entomophage populations and that can clearly identify them were revealed: for the Krasnodar population, RAPD markers with a molecular weight of 550 bp (UBC 519); 500 and 700 bp (OPA05); 1100, 1200, and 1300 bp (OPA10); 220 and 800 bp (OPB04); and 880 bp (OPB01); for the Chimkent population, 400, 600 and 1200 bp (UBC519); 600 and 950 bp (OPA10); and 800 bp (OPB01). It is concluded that these RAPD primers can be used for identification and differentiation of other H. hebetor populations.     

基于AMEL基因的绵羊性别鉴定技术

[目的]探讨将牙釉蛋白(AMEL)基因用于绵羊性别鉴定的可行性。[方法]采用酚-氯仿法从湖羊的耳皮肤组织中提取基因组DNA。分别以公羊和母羊的DNA为模板,以AMEL引物和SRY引物进行PCR扩增。[结果]经扩增后母羊得到一条来自X染色体的270bp条带,而公羊则得到270和210 bp的两条带。两种方法对10份已知DNA样品检测结果与实际性别完全一致。PCR产物的电泳条带较为清晰,相同性别电泳条带数完全一致,而不同性别间电泳条带数和片段大小差异显著。AMEL引物扩增雌性个体DNA实际电泳条带数和理论条带数一致,而来自雄性结果却不一致,这可能与非特异性扩增有关。[结论]AMEL基因比SRY基因具有更高的灵敏性,可用于判定XY染色体动物的性别。