抗氧化剂对杏和中国李原生质体培养的影响

以杏和中国李种胚愈伤组织为试材,研究了抗氧化剂对魇生质体培养效果的影响。结果表明,在酶解注和培养基中加入聚乙烯吡咯烷酮对提高原生质体产量、活力和分裂性力具有显著的效果。在培养基中加入不同浓度的甘氨酸和抗坏血酸也可提高中国李原生质体培养的分裂频率和植板率。     

硝酸银对中国李原生质体分离和培养的影响

以种胚愈伤组织为试材,研究了硝酸银对中国李原生质体分离和培养效果的影响。结果表明,在酶解液中加入4～10mg/L质量浓度的硝酸银,可提高原生质体的活力,其中以8mg/L的效果最好,原生质体的活力比对照提高21.1%,但其对原生质体产量无明显作用。在培养基中加入4～8mg/L质量浓度的硝酸银,原生质体的分裂频率和植板率分别比对照增加19.85%～38.24%和9.23%～36.53%。硝酸银对愈伤组织不定芽的再生能力也具有明显的促进作用。     

胡萝卜悬浮细胞原生质体的培养及植株再生的研究

采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料。经不同液体培养基(Bp1,Bp2,B1)浅层培养,再生细胞高频分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经扩增后转移到分化培养基上诱导植株分化,从这两种原生质体中获得了再生植株。在原生质体培养过程中,原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有机成分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系甚大。在植株分化时,谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很大促进作用。另外,原生质体的来源及原生质体培养基对原生质体植株分化能力均有不同的影响。     

橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株

[目的]优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础.[方法]以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率.[结果]酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12h时,继代培养第5d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6 ×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%.原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株.[结论]通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系.     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

西洋参叶肉原生质体的游离与培养

[目的]为了探讨西洋参叶肉原生质体游离和培养的最佳条件。[方法]以5年生西洋参为材料,研究了纤维素酶的种类,酶的浓度和渗透压对西洋参叶肉原生质体游离的影响,并探讨了西洋参叶肉原生质体在KM8P、MS基本培养基中的分裂情况。[结果]在混合酶液其他组分相同的情况下,日本产R-10纤维素酶的游离效果最好。酶浓度为4%时,3 h后大部分叶片都被解离成原生质体。幼嫩叶片的原生质体产量最高,为4.8×105个/g。KM8P培养基适合于西洋参叶肉原生质体的培养,较高的2,4-D浓度可以促进分裂。[结论]用混合酶系统处理,能够获得大量(4.8×105个/g)有活性的原生质体。游离原生质体的酶浓度以1%～2%为宜。KM8P+2,4-D(2.0 mg/L)+6-BA(2.0 mg/L)+KT(0.7 mg/L)培养基适宜培养西洋参叶肉原生质体。     

菜豆(Phaseolus vulgaris L.)叶肉原生质体培养(简报)

本实验以菜豆无菌苗叶片为材料,成功地游离了原生质体,并在改良 BSB 液体培养基上获得了大量具有连续分裂能力的愈伤组织。本实验发现,在原生质体培养初期,更换新鲜培养液并不是必须的;但在培养15天左右,形成了细胞团时,更换培养液却非常必要。这样可增强细胞分裂能力,防止细胞贴壁死亡。在培养液组成中,氮源的变化对原生质体分裂有重要影响。较大量的无机氮对原生质体分裂有     

葡萄原生质体培养中若干因素的研究

试验结果表明,处于对数生长期、再生能力强的培养细胞有利于原生质体分离和培养。原生质体分离和初期培养的适宜渗透浓度为0.5M;固体包埋法的效果明显优于液体培养,前者分裂率为后者的3.8倍,达13.8%;外源激素浓度以 B_5基本培养基添加 NAA 2.0mg/L,BA 2.0mg/L,原生质体分裂率最高;葡萄糖取代常规稳压剂甘露醇,效果显著,细胞分裂率是后者的2.6倍。     

原生质体技术与观赏植物育种

原生质体培养和植株再生技术在观赏植物育种中起重要作用。原生质体的来源、原生质体的分离、培养基的成分、培养方法等,都对原生质体的培养有重要影响。近年来,观赏植物原生质体在细胞融合、遗传转化上有了一定发展,为创造观赏植物新种质提供了新途径和方法。     

培养条件对大白菜无菌苗叶肉原生质体培养的影响

以市售栽培品种城青2号、高脚白大白菜无菌苗叶肉原生质体为材料,分别就激素、原生质体的培养密度、培养方式、多胺类物质对细胞分裂频率以及后期发育的影响进行了系统的研究.还探讨了在原生质体培养10天后加入提高了pH值的培养液来控制细胞褐化的可能性.     

番茄原生质体培养及再生植株影响因素初探

对影响番茄原生质体分离、培养以及再生植株的一些因素进行的初步研究表明:适合番茄原生质体分离、培养的材料是3～4周龄的无菌苗叶片;适合番茄原生质体培养的培养液渗透压以0.4 mol/L 甘露醇加山梨醇为好,培养液的量以1.5 ml/L 培养皿为适宜,选择合适的激素搭配浓度对维持愈伤组织的分化、抑制褐化是有效的;培养基中添加1.15mg/L NAA 适合诱导再生苗生根,无激素培养基适合再生植株的生长。     

层出镰孢菌原生质体制备条件的研究

[目的]研究层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)原生质体的最佳条件,建立高效制备层出镰孢菌原生质体制备的方法.[方法]通过对菌丝体菌龄、酶解液组合、酶解反应温度及酶解时间等影响因素进行优化,对层出镰孢菌原生质体的制备条件进行研究.[结果]菌块在CMC液体培养基中25℃培养分生孢子3 d后,过滤离心后转移至YEPD液体培养基中培养12 h,该菌丝最适于层出镰孢菌原生质体的制备;用1.2 mol/L KCl溶液配制含有5 mg/m L裂解酶、25 mg/m L崩溃酶、0.05 mg/m L溶壁酶的酶解液在30℃下对菌丝酶解1.5 h,此时原生质体的数量最大,为2.47×10~9个/m L.原生质体再生培养时,使用40%PTC溶液恢复细胞壁,在TB3液体培养基中30℃过夜培养,离心后与TB3固体培养基混合后倒入平板培养,原生质体再生率可达39.75%.[结论]通过对菌丝体菌龄、酶解液浓度、温度、酶解时间等条件的优化,可提高层出镰孢菌原生质体的产量及再生率,为进一步研究层出镰孢菌致病分子机制提供理论依据.     

中国李原生质体培养及植株再生

对中国李（ＰｒｕｎｕｓｓａｌｉｃｉｎａＬｉｎｄｌ．）原生质体分离和培养的有关因素进行了研究。以悬浮培养物为材料,在适宜的酶解液中酶解１２ｈ,原生质体产量和活力分别达到３×１０７个／ｇ和９５％．以改良ＭＳ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,培养３０ｄ后将ＢＡ调至１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖调节渗透压,在２×１０５个／Ｌ的植板密度下液体浅层培养５０ｄ后形成了微愈伤组织。微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

影响微生物原生质体融合技术的因素

原生质体融合技术是微生物育种的有效方法之一，包括原生质体制备、原生质体融合、原生质体再生及融合子的分离等主要过程。综述了培养基成分、菌龄、酶的种类及浓度、稳定剂、PEG的分子量、浓度等因素对微生物原生质体制备、融合及再生的影响，并对近年来国内外学者在微生物原生质体融合技术及应用方面所取得的最新进展进行了概括。     

绿色木霉原生质体制备与再生条件的探索

研究菌丝体培养时间、酶组合、酶浓度、酶解时间、酶解温度、稳渗剂类型、再生培养方式等对绿色木霉原生质体制备及再生的影响。结果表明,绿色木霉原生质体制备的优化条件为：菌丝体培养60h,用1.5%溶菌酶＋0.5%蜗牛酶的混合酶液,在pH值6.0～6.5,30～35℃,酶解4h,以0.7mol/L甘露醇为稳渗剂,原生质体的产量可达1.68×107个/ml;原生质体再生的优化条件为：PDA为再生培养基,以0.5mol/L蔗糖为稳渗剂进行双层固体培养,原生质体的再生率为6.05%～6.12%。