橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株

[目的]优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础.[方法]以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率.[结果]酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12h时,继代培养第5d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6 ×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%.原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株.[结论]通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系.     

普通野生稻胚性细胞悬浮系的建立及原生质体再生植株

广西普通野生稻(Oryza rufipogon)2个品种的成熟种子经54±1℃温度处理5d打破休眠后,诱导产生出愈伤组织。挑选胚性愈伤组织置于液体培养基中振荡培养。经6个月继代培养,建立起胚性细胞悬浮系。其中1个品种(No.40)的悬浮细胞经酶解游离获得大量原生质体,用琼脂糖包埋培养,2周内分裂频率达21.4％。形成的小愈伤组织经增殖后在分化培养基上再生出绿色小植株。     

木薯脆性胚性愈伤组织原生质体培养与植株再生

【目的】建立有效的木薯原生质体再生体系,为原生质体融合以及原生质体转化等研究奠定技术基础。【方法】酶解木薯品种TMS60444 的脆性胚性愈伤组织（FEC）的悬浮系,分离原生质体的产量最高达3.5×106个/g,FDA检测其活性约90%。用TM2G培养基以液体浅层法分别在5×105个/mL和2×105个/mL密度下培养,培养过程中前30 d用0.3 mol•L-1 TM2G新鲜培养基每10 d更换1次,此后每10 d用0.25 mol•L-1 TM2G新鲜培养基更换。原生质体培养45 d后即可挑出1-2 mm大小的愈伤组织分别在MSN培养基上分化胚、CMM上促胚成熟、CEM上茎伸长、MS上生根。【结果】在5×105个/mL的原生质体培养密度下,长出的都是致密型愈伤组织（能分化胚状体）,而在2×105个/mL的密度下培养长出的有致密型愈伤组织,也有空泡型愈伤组织（不能分化胚状体）。本试验共挑出1 479个致密细胞团,分化获得757个子叶胚,已再生完整植株186棵。【结论】本研究分离的原生质体产量和活性有较大提高,对前人所指出的瓶颈问题有所改进,原生质体再生植株效率有较大提高。     

籼稻原生质体游离培养及再生植株

籼稻(Oryza sativa L.)推广品种“秋桂矮11”成熟种胚在N6+2,4-D培养基上诱导选择胚性愈伤组织,然后转入N6+2,4-D及高浓度脯氨酸的液体培养基悬浮培养。继代近6个月后建成胚性细胞悬浮系.悬浮细胞通过酶解游离产生大量原生质体,经合适渗透压的KpR琼脂糖培养基包埋,在无哺育培养条件下,分裂频率为11.36％,细胞克隆转至N6分化培养基再生出完整绿色小植株,分化频率为9.4％。     

甘薯及其近缘野生种种间体细胞杂种植株的有效再生

将甘薯品种栗子香的胚性悬浮细胞原生质体和近缘野生种I.triloba的叶柄原生质体用PEG融合法融合后,培养在含有0.05mg/L2,4-D和0.5mg/L KT的改良MS液体培养基中。培养10周后,形成直径达1～2mm的小愈伤组织。将这些小愈伤组织转移到添加0.05mg/L2,4-D和0.5mg/L KT的MS培养基上,愈伤组织迅速增殖。将其中的78个愈伤组织培养在添加2.0mg/L BAP的MS培养基上,愈伤组织形成了不定根。将具有不定根的愈伤组织进一步培养在MS基本培养基上,共获得137株再生植株。过氧化物酶同工酶及RAPD分析表明,所获得的137株再生植株均为栗子香和I.triloba的种间体细胞杂种植株。     

海岛棉胚性细胞团的原生质体游离和培养

以海岛棉无菌苗下胚轴为外植体诱导产生愈伤组织，挑选胚性愈伤组织建立悬浮培养胚性细胞系。用含有纤维素酶、半纤维素酶和离析酶的混合酶液从新海３号、新海７号和２８２这３个品种的胚性细胞悬浮培养物中游离出原生质体。原生质体用液体浅层法培养仅见再生细胞的１次分裂；用含有低融点琼脂糖的ＫＭ８Ｐ培养基进行琼脂糖珠悬浮法培养，原生质体再生细胞经几次分裂后产生再生细胞团     

胡萝卜悬浮细胞原生质体的培养及植株再生的研究

采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。     

燕麦叶肉原生质体培养—再生细胞持续分裂形成小愈伤组织

在修改的Ｉｍｂｒｉｅ－Ｍｉｌｌｉｇａｎ和Ｈｏｄｇｅｓ培养基上，采用低熔点琼脂糖包理培养方法，以小麦ＨＩＮＦ悬浮细胞系作为看护细胞，成功地诱导燕麦叶肉细胞原生质体进行脱分化，再生细胞壁和细胞的持续分裂。最后形成肉眼可见的小愈伤组织。     

温度和pH对农杆菌介导转化橡胶树悬浮细胞的影响

橡胶树胚性细胞悬浮培养系及其植株再生体系的建立可为橡胶树遗传转化研究提供良好的材料.以橡胶树品种热研8-79悬浮培养的胚性细胞为受体,研究了共培养基pH值和共培养温度对农杆菌介导的橡胶树胚性悬浮细胞遗传转化的影响.结果表明:pH5.2～5.4、20℃～22℃共培养适宜于农杆菌介导的橡胶树胚性悬浮细胞的遗传转化.     

新疆长绒棉胚性悬浮细胞原生质体的培养及再生

在进行新疆长绒棉胚性细胞原生质体培养期间，比较酶液中不同甘露醇浓度，悬浮细胞不同继代时间及不同培养方法，不同包埋培养基，不同滴加液对原生质体培养的影响。发现琼脂糖珠包埋培养最适宜其培养，获得了原生质体的再生，植板率为２９．８４％（以第八天计），进一步培养，获得再生愈伤组织，愈伤是胚性愈伤。     

水稻原生质体制备条件的优化及其细胞壁变化的快速检测

以疣粒野生稻和栽培稻02428的成熟种子为材料,对愈伤组织的诱导和继代、胚性悬浮细胞系建立、原生质体制备、再生细胞团分化及植株再生进行研究。结果表明:(1)水稻愈伤组织诱导的最佳2,4-D浓度为0.014mmol/L;(2)胚性悬浮细胞系建立的最佳条件为AA悬浮培养基+0.009mmol/L 2,4-D,每25mL液体培养基加入0.4g愈伤组织的初始接种量,7d的继代周期;(3)原生质体制备的最佳条件为20g/L纤维素酶+1g/L果胶酶,酶解5h,800r/min离心5min;(4)用荧光增白剂(VBL)细胞壁染色液可以快速、准确的检测原生质体制备及培养过程中细胞壁的变化情况。     

云南疣粒野生稻原生质体高效分离培养体系的建立

【目的】为云南疣粒野生稻原生质体的培养、细胞融合、细胞再分化成植株奠定基础。【方法】测定不同酶解组合及浓度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度下云南疣粒野生稻原生质体的产量和活力,同时筛选云南疣粒野生稻原生质体分离和培养的较优条件。【结果】优化后建立云南疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的周期可缩短至45～60 d;在纤维素酶1.5%+果胶酶0.3%+甘露醇0.6 M+MES 5 mM+CaCl_(2 ) 5 mM条件下酶解2 h,云南疣粒野生稻原生质的产量为1.45×10~(6 )个/g·FW,活力达到90.17%,制备出的原生质体在固液培养下得到云南疣粒野生稻原生质体再生植株。【结论】建立了一套快速高效分离培养云南疣粒野生稻原生质体的体系,对研究重要植物资源、种质创新和发掘其优良基因具有重要意义。     

甘薯(Ipomoea batatas)原生质体的分离、培养与根的分化

用甘薯品种农林17号(中紫)的叶柄分离原生质体,对其在添加各种浓度的萘乙酸和激动素的改良细胞薄层培养基中进行悬浮培养。培养1～2 d 后,原生质体再生细胞壁,培养2～3 d 后,再生细胞发生第一次分裂,持续的细胞分裂形成小愈伤组织。悬浮培养的结果表明萘乙酸和激动素的适宜浓度分别为2.0～5.0mg/L 和1.0～5.0mg/L。此后,将小愈伤组织转移到MS 固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长。本试验达到根的分化.     

软化菊苣高效原生质体培养及植株再生

为了进行体细胞杂交和基因工程改造的尝试,采用10mL酶解液处理12h,1g鲜重叶片游离出4.5~5.9×106个原生质体,生活率达78%~85%。原生质体分别用3种培养基进行培养,以软化菊苣种子无菌苗的叶片为起始材料进行了叶肉原生质体分离、培养和植株分化的研究,并建立高频率的植株再生系统。结果表明:最适合培养基为改良KMP,原生质体的分裂率和植板率分别达到48.0%和27.5%。同时对原生质体培养的时间长度与愈伤组织的胚胎发生能力及植株分化频率进行了试验比较,培养时间28~41d为最佳时间,愈伤组织的胚性(81.2%)和分化率(70.9%)最高;培养时间42~55d,胚性愈伤及植株分化的比例分别为55.0%和45.2%;培养时间56~69d,愈伤组织的胚性(22.5%)和分化率(16.5%)较差。原生质体再生植株在不含激素的1/2MS培养基上,部分植株直接生根,未生根植株转至1/2MS+IBA 0.3mg·L~(-1)+0.1%活性碳可以生根。     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

大豆原生质体愈伤组织的体细胞胚胎发生(英文)

在改良MS培养基上从5个大豆品种成熟种子来源的幼苗未展开叶片上诱导出愈伤组织,利用2个月月龄的这些愈伤组织在摇床上建立了细胞悬浮培养系,细胞悬浮培养系每1至2周转培1次,并用于原生质体分离,转培后3到5天的细胞经酶解后原生质体的产量最高,纯化后的原生质体用3种方法进行培养,即液体培养法、琼脂包埋法和琼脂底层法,在琼脂底层法中,培养皿底层先浇上无甘露醇的琼脂培养基,而原生质体则悬浮在2到4毫升含0.45 mol甘露醇的培养基中,3种方法以琼脂底层法最佳,原生质体在培养后2到3天内能见到第1次细胞分裂,在适当的条件下1周内高达80％的原生质体发生分裂,置板频率一般在40％到60％之间,5个供试品种中4个的原生质体愈伤组织在固体和液体培养中出现体细胞胚胎发生,在液体培养条件下得到了大量子叶和胚根发育良好的体细胞胚,但由于这些胚未进一步萌发,故未能得到完整的再生植株。     

小黑麦原生质体的植株再生

<正> HC—3无性系,是从八倍体小黑麦花粉植株的幼穗诱导得到的单倍性胚性愈伤组织,继代6年后仍有一定的植株分化能力,但已不易用来建立悬浮系,为此,根据愈伤组织的状态变换,使用不同培养基对其进行改造,在M_1培养基上连续继代和选择3次,挑选出HC—3—Ⅱ型愈伤组织,建立悬浮系,取悬浮细胞分离原生质体,培养在附加2,4—D2mg/L、KT0.2mg/L、NAA0.1mg/L、琼脂糖0.5%的MS培养基中,5天后见到第一次分裂,3周后可见小愈伤组织,此时补加葡萄糖减半的MC培养基,愈伤组织长到0.5mm时,将其再转到附加2.4—D1mg/L的MS培养基上,20天后转到M_3和M_4固体培     

芝麻菜下胚轴原生质体的分离培养及再生植株

以芝麻菜 Eruca sativa Mill 无菌苗下胚轴为材料,研究了光照条件、苗龄、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇浓度及纯化条件对其原生质体分离制备的影响.以附加不同激素组合的改良KM8p培养基进行液体浅层培养.结果表明,无菌苗的下胚轴酶解10 h,用"过滤-离心-漂浮法"进行纯化后,可高效分离出有活力的原生质体;在改良的KMSp培养基的进行原生质体培养,当密度为7×104mL-1时,分裂频率最高,为24.8%.4周后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,植板率为5.6%.然后转移到培养基上使其增殖,当愈伤组织长至3～5 mm时,将其转到分化培养基上诱导芽的分化,芽分化率为33.6%.当芽长2～3cm 时,将其切下插入生根培养基上诱导生根,可获得完整植株.     

马铃薯悬浮细胞原生质体培养及植株再生

试验所培养的 3个基因型的马铃薯悬浮细胞原生质体均获得再生植株。愈伤组织继代培养基、分化培养基及基因型对分化频率有显著影响     

粳型超级稻胚性细胞悬浮系的建立及植株再生

以北方粳型超级稻沈农265成熟胚为材料,对其胚性悬浮细胞系建立与植株再生进行了研究.结果表明,弱光下培养20 d,有利于成熟胚诱导出质量较好的愈伤组织,这些愈伤组织在添加2,4-D(3.0 mg/L)和脯氨酸(500 mg/L)的N<,6>固体培养基上进行状态调整后,可获得适于悬浮培养的胚性愈伤组织.悬浮培养时适宜的2,4-D浓度为2～3 mg/L;起始接种量以20 mg/mL的效果较好;最佳继代时间是7 d.悬浮细胞团先经固体继代培养获得愈伤组织小块,再将愈伤小块干燥处理2 h后进行分化,可显著提高植株再生率,愈伤组织绿点分化率和成苗率分别达58.6%和27.2%.