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砀山酥梨基因组DNA提取和RAPD条件优选 总被引:11,自引:0,他引:11
分别以砀山酥梨不同品系的成熟叶片、幼叶和芽为材料,采用SDS法提取基因组DNA,比较了不同材料的提取效果,并以此为模板进行RAPD反应,优化了RAPD反应条件。结果表明:用幼叶和芽均能提取高质量的基因组DNA,可直接用于RAPD分析,而用成熟叶片虽能提取到基因组DNA,但不能直接用于RAPD分析;优化的RAPD反应体系为:反应体积50μL,包含80ng左右模板DNA、5μL市售10×PCRBuffer、2.0mmol/LMgCl2、120μmol/LdNTPs、3U的Taq酶、0.5μmol/L随机引物;热循环程序为94℃预变性5min,使模板DNA充分变性,然后进入下列温度循环,94℃变性30s,36℃退火45s,72℃延伸90s,循环数40,最后72℃延伸7min。 相似文献
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以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq... 相似文献
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[目的]得到适用于罗布麻RAPD的最优体系.[方法]以伊犁地区新源县罗布麻硅胶干燥叶片为材料,采用TIANGEN试剂盒提取罗布麻基因组DNA,得到满足RAPD(Random amplified polymorphic DNA)分析的罗布麻基因组DNA.[结果]通过单因素优化实验,得到罗布麻RAPD分析的最佳反应体系为:Mg2+ (2.0mmol/L)、dNTPs(0.5 mmol./L)、primer(0.4 mmol/L)、DNA(1μL)、Tap酶取1μL、10×buffer取1μL,总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2min),最后在72℃延伸7 min.[结论]提取的罗布麻总DNA均有较高的质量,适合RAPD分析;Tiangen植物基因组DNA提取试剂盒对罗布麻基因组DNA有着良好的提取效果;对罗布麻RAPD-PCR中Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶和引物浓度进行优化,较为理想的各因子用量和扩增程序为:Mg2+(2.0 mmol/L)、dNTPs(0.5mmol/L)、primer(0.4 mmol/L)、Tap酶(0.5 U/μL)、DNA(40 ng),总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性5 min,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2 min),最后在72℃延伸7min. 相似文献
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峨眉含笑基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化 总被引:8,自引:0,他引:8
以峨眉含笑嫩叶为材料,研究了峨眉含笑基因组DNA提取方法及RAPD反应条件。结果表明:采用改良的CTAB方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析。在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:1.5 mmol/L Mg2+、0.8 mmol/L dNTP、240 nmol/L随机引物、80 ng DNA、1.0 U Taq DNA聚合酶。 相似文献
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人参基因组DNA的提取及RAPD—PCR反应条件的优化 总被引:1,自引:1,他引:0
探讨了人参基因组DNA提取方法及RAPD—PCR反应条件的优化.结果表明,用改良的CTAB方法提取的DNA均达到了RAPD—PCR分析的要求;优化的RAPD—PCR反应条件为:在25μLRAPD—PCR反应体系中,模板DNA20ng,dNTP200μmol/L,MgCl2 1.5mmol/L,10×Buffer2.5μL,引物浓度0.4pmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U,其余以ddH20定容至25μL.PCR反应程序为:94℃预变性5min;94℃45S,40℃退火1min,72℃1min,共40个循环;最后在72℃延伸5min. 相似文献
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当归RAPD反应条件的优化 总被引:3,自引:2,他引:3
以当归DNA为模板,对影响当归RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立当归RAPD反应的最适体系。通过正交法及单因素试验对RAPD反应条件进行优化,7个试验因子的最适条件为:模板DNA 0.5 ng/μL,引物0.8μmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,Taq酶0.8 U,退火温度36~37℃,循环次数40。 相似文献
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基因组DNA的提取及RAPD条件优化 总被引:15,自引:0,他引:15
提取了木奈基因组 DNA,并以其为模板对影响 RAPD扩增的重要参数进行优化试验 ,以期建立木奈 RAPD反应的优化体系 .结果表明 ,PCR扩增体系最佳条件是 :2 0 μL体积中 ,2 0 0 μmol·L- 1 d NTP、2 .5 mmol· L- 1 Mg Cl2 、0 .2 μmol· L- 1随机引物、2 5 .0 ng·μL- 1 DNA模板、1 -2 U Tag酶 相似文献
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椰子基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
以椰子叶片为实验材料,探索了椰子基因组DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了椰子的优化反应体系和程序。试验最终建立的椰子RAPD反应总体积为20μL,各有关成分的最佳浓度分别为Mg2+2.5 mmol/L,Taq DNA0.75 U,dNTP 0.2 mmol/L,Primer 1μmol/μL,模板DNA2.5 ng/μL。PCR循环程序为:94℃预变性1.5min;94℃变性20 s,36℃退火20 s,72℃延伸45 s,35个循环;最后72℃延伸3 min。 相似文献
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家兔RAPD分析反应体系的优化 总被引:3,自引:0,他引:3
《山东农业科学》1999,(5):15-17
以家兔的基因组DNA 为模板,研究影响家兔RAPD 扩增的因素。实验结果表明,Taq酶、随机引物和Mg2 + 浓度及模板DNA 的纯度对RAPD 扩增影响较大。本实验建立了适于家兔RAPD 分析的反应体系:反应体积为20μl,其中含有1 ×扩增缓冲液,2 .0m mol/L MgCl2 ,0 .1m mol/LdNTP,0-2μmol/L 随机引物,1 .5UTaq 酶,90ng 模板DNA 相似文献
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人参黑斑病菌RAPD反应体系的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
采用改良的CTAB法提取人参黑斑病菌的基因组DNA,建立人参黑斑病菌RAPD反应的体系.最佳体系容积为25μL,其中包括10×Taq配套缓冲液2.5μL,模板DNA 20 ng/μL,引物15 pmol/L,dNTP 150μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,Mg2+1.5 mmol/L,其余部分用DW补充.PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40次循环,72℃延伸7 min. 相似文献
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[目的]研究提取火棘基因组DNA的最佳方法,并研究适合火棘的稳定的RAPD反应体系,为以后开展火棘的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。[方法]采用改进的CTAB法,成功地提取了火棘基因组DNA,并对RAPD反应体系中的Taxi酶、MgCl2、dNTPs和引物4个因素进行4因素4水平的正交试验设计,从中筛选出最佳的优化条件。[结果]电泳结果显示,DNA无降解,杂质少。DNA浓度较高约为500ng/μl。并以此DNA为模板,成功地建立了RAPD稳定的反应体系:总体积25山,包括25ng的DNA,1×buffer,2.3mmol/LMgCl2,1.0μmol/L引物,O.15mmol/LdNTPs和2.0U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为:先在94℃下变性4min,然后在94℃下变性40s,36.8℃下复性50s,72℃下延伸70s,反应40个循环,最后72℃延伸4min。[结论]改进的CTAB法能成功地提取火棘基因组DNA,利用正交试验设计所建立的RAPD反应体系,可以获得较为稳定、可靠的扩增产物。该体系可应用于火棘遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为进一步开展火棘分子生物学研究奠定了基础。 相似文献
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大字杜鹃RAPD反应体系的优化 总被引:3,自引:2,他引:1
以大字杜鹃为材料,以改进的CTAB法提取大字杜鹃叶片总DNA,分别就模板DNA浓度,引物浓度,DNTP浓度,TaqDNA聚合酶量及镁离子浓度对大字杜鹃RAPD反应结果的影响进行研究.通过对各因子的组合比较,建立了大字杜鹃RAPD反应的优化体系,即总反应体积为25pL,其中包括10×Taq酶配套缓冲液2.5pL,模板DNA浓度50mg/L,引物浓度0.5μmol/L,dNTP浓度0.15mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,Mg^2+浓度2.0mmol/L,其余用重蒸馏水补足.扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,38℃退火40S,72℃延伸2min,共41个循环,72℃延伸7min. 相似文献
18.
苦楝RAPD反应体系的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2+,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明:当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为:94℃预变性2 m in;然后38个循环(94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s);最后72℃延伸8 min,4℃保存. 相似文献