不同地区醉马草对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响

为了探索不同地区醉马草中活性物质的差异及对奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成的影响,通过微量板半定量法对1号采集点和2号采集点的醉马草所制备的水煎液及提取的总生物碱进行生物膜形成影响的检测。结果显示,1号采集点的醉马草水煎液及提取的总生物碱在不影响表皮葡萄球菌生长的情况下对生物膜形成有显著抑制作用(P0.05),而相同处理的2号采集点样品对表皮葡萄球菌的生长及生物膜形成均无明显影响(P0.05)。该结果表明不同地区来源的醉马草中总生物碱的成分受地理环境因素影响较大,与地域性密切相关。     

新疆南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成及其相关基因的检测

为了揭示新疆南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成状况,采用微孔板半定量法检测了分离自新疆南疆地区奶牛乳房炎乳样中表皮葡萄球菌的生物膜形成能力,并采用PCR技术扩增表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因.结果表明,41％的表皮葡萄球菌能形成不同程度的生物膜,且生物膜形成相关基因较复杂,给本地区奶牛乳房炎的防制带来很大困难.     

新疆南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成与三种抗生素耐药性相关性分析

【目的】探索分离自新疆南疆地区奶牛场乳房炎发病乳样中的表皮葡萄球菌抗生素耐药性与其生物膜形成能力间的相关性。【方法】本试验采用分子生物学方法对阳性乳样中表皮葡萄球菌进行鉴定,微量板半定量法检测表皮葡萄球菌的生物膜形成能力,二倍稀释法检测分离的表皮葡萄球菌对常规兽用抗生素(青霉素、链霉素和土霉素)的敏感性。卡平方(χ2)分析表皮葡萄球菌耐药性与生物膜形成能力之间的相关性。【结果】分离获得表皮葡萄球菌56株,其中生物膜形成阳性菌株28株。分离的56株表皮葡萄球菌均对链霉素耐药;25株对青霉素耐药,其中生物膜形成阳性菌株17株,占68%;21株对土霉素耐药,其中生物膜形成阳性菌株16株,占76%;经统计学分析,生物膜形成阳性菌株与阴性菌株对青霉素及土霉素的耐药率具有极显著差异(p0.01)。【结论】奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成阳性菌株对常规兽用抗生素具有较强的耐药性,生物膜形成能力是表皮葡萄球菌耐药的重要原因。     

不同理化因素对乳房链球菌生物膜形成的影响

采用微量板半定量法,研究影响新疆南疆地区奶牛乳房炎性乳房链球菌生物膜形成的因素,探索不同理化因素对乳房链球菌生物膜形成的影响。结果表明,在THY(Todd Hewitt Broth+0.1%Yeast Extract)培养基中加入w=0.5%的牛奶能促进乳房链球菌的生长及生物膜的形成;检测的3种培养基中,BHI培养基最有利于乳房链球菌的生长及生物膜的形成;不同培养时间结果显示,36h培养更有利于乳房链球菌的生长及生物膜的形成;不同pH的试验结果表明,pH等于7时最有利于乳房链球菌的生长及生物膜的形成。     

新疆南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成依赖型检测

[目的]揭示新疆南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成状况及形成依赖型.[方法]采用微量板半定量法检测分离自新疆南疆地区奶牛乳房炎乳样中55株表皮葡萄球菌.[结果]结果表明,所检表皮葡萄球菌中有7株菌为表皮葡萄球菌生物膜形成阳性菌株;选择生物膜形成能力最强的1株菌(编号5-121-2),对其生物膜形成依赖型进行检测,结果表明该菌株生物膜形成属于胞外多糖与蛋白质混合依赖型,即胞外多糖和蛋白质均参与5-121-2生物膜的形成,但蛋白质起主要作用,同时胞外DNA也显著参与5-121-2的生物膜形成.[结论]新建南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌5-121-2生物膜形成主要依赖胞外蛋白、胞外多糖和胞外DNA,它们在其生物膜形成的贡献率分别达99.6;、82.6;和99.7;.     

乌梅有机酸提取条件优化及其对生物膜形成的抑制作用

对乌梅总有机酸的提取条件进行优化并研究其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)生物膜产生的抑制作用。通过单因素试验及正交试验对乌梅总有机酸提取条件进行了优化及验证,采用结晶紫染色法对金黄色葡萄球菌生物膜形成量进行了测定。结果表明,乌梅总有机酸最佳提取条件为乙醇70%(体积分数)、料液比3∶40(g∶mL)、超声提取时间1.5 h及超声提取温度50℃。在该条件下,乌梅总有机酸提取率为24.50%。提取物浓度为0.5MIC、MIC和2MIC时,对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制率分别为13.06%、48.24%和74.01%。因此,该提取物对金黄色葡萄球菌生物膜的形成具有抑制作用。     

扁桃酸对金黄色葡萄球菌分选酶A活性的抑制机制

【目的】探究扁桃酸对金黄色葡萄球菌分选酶A (SrtA)活性的抑制作用及其分子机制。【方法】采用二倍肉汤稀释法和平板涂布法研究扁桃酸对金黄色葡萄球菌的体外抑制作用;测定金黄色葡萄球菌在含有不同质量浓度扁桃酸的培养基中的生长曲线;采用结晶紫染色法测定扁桃酸对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响;通过荧光共振能量转移试验(FRET)、分子对接技术和分子动力学模拟技术研究扁桃酸对SrtA活性的抑制作用及其分子机制。【结果】扁桃酸对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC均大于1 024μg/mL,在试验质量浓度范围内(0、64、128、256、512和1 024μg/mL)对金黄色葡萄球菌及其生长基本没有影响;不同质量浓度扁桃酸对金黄色葡萄球菌生物膜减少的总量有细微差异并形成一定抑制作用,并呈质量浓度依赖性;扁桃酸对SrtA活性有一定的抑制作用,其IC_(50)为(66.15±24.39)μg/mL;扁桃酸通过多种分子间作用力与Pro-163、Val-166、Gly-167、Val-168、Ile-199和Leu-169残基紧密结合,使SrtA的构象改变从而降低活性。【结论】扁桃酸可以与SrtA的活性中心紧凑结合并相互作用形成稳定的复合物,最终抑制SrtA的生物活性,具有成为抗金黄色葡萄球菌感染抑制剂的潜力。     

火炭母提取物抑菌性能研究

为解决细菌在不同食品表面以及食品工业环境中形成生物膜引起食品质量安全问题,以中药材火炭母提取物为对象,对不同供试菌株进行抑制细菌及抑制细菌生物膜试验,探讨其抑菌性能.结果表明:火炭母提取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的生长均有一定的抑制作用,其最低抑菌浓度(MIC)分别为3.91、1.95、15.63、15.63 mg/mL;在亚抑菌浓度下,火炭母提取物能有效抑制金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生物膜形成,其最小生物膜清除浓度(MBEC)分别为0.98和0.49 mg/mL.     

新疆南疆地区奶牛乳腺炎性金黄色葡萄球菌生物膜形成及其相关基因的检测

为了揭示新疆南疆地区奶牛乳腺炎性金黄色葡萄球菌生物膜形成情况,采用微孔板半定量法和PCR技术检测分离自新疆南疆地区奶牛乳腺炎乳样中金黄色葡萄球菌生物膜的形成能力和生物膜形成相关基因。结果表明:27%的实验菌株可形成不同强度的生物膜,且生物膜形成相关基因分布较为复杂,给本地区奶牛乳腺炎的防制带来很大困难。     

南疆地区特色植物对乳房链球菌生物膜形成的影响

为了探索新疆奶牛乳房炎的防治方法,从病原菌生物膜形成角度出发,采用微孔板半定量法检测了南疆地区三种特色植物(苦豆子、盐穗木和醉马草)水煎液对乳房链球菌生物膜形成能力的影响。结果表明,低浓度(苦豆子0.05%~1.6%;盐穗木0.05%~0.8%;醉马草0.05%~3.2%)的三种水煎液均能够在不影响菌株生长的情况下对生物膜形成能力有明显抑制作用。高浓度时(苦豆子和盐穗木3.2%;醉马草6.4%)则表现为在弱抑制菌株生长的情况下促进生物膜形成。     

两歧双歧杆菌产生物膜培养基的优化

通过数理统计的方法优化双歧杆菌产生物膜培养基。试验首先采用Plackett-Burman试验确定NaCl、MnSO4和半乳糖为影响双歧杆菌生物膜生成的主要因素,再利用正交试验和中心组合试验确定最佳浓度。结果表明:MnSO4、半乳糖和NaCl的最佳浓度分别为0.005g/L,25g/L和0.1mol/L。     

玉米大斑病菌分生孢子形成的影响因素及GATA转录因子家族的表达分析

【目的】玉米大斑病(northern leaf blight of corn)是由玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)引起的一种威胁玉米生产的重要叶部病害。本研究旨在确定影响玉米大斑病菌分生孢子产量的主要因素;明确GATA家族成员基因在分生孢子形成时期的表达特征,为深入解析调控病菌发育及致病的分子机制打下基础。【方法】以玉米大斑病菌野生型菌株01-23为试材,探索13种不同培养基(乳糖酪蛋白琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、玉米茎秆葡萄糖琼脂培养基、玉米茎秆琼脂培养基、玉米叶片葡萄糖琼脂培养基、玉米叶片琼脂培养基、玉米籽粒葡萄糖琼脂培养基、玉米籽粒琼脂培养基、玉米粉葡萄糖琼脂培养基、玉米粉琼脂培养基、查氏培养基、基本培养基、水琼脂培养基)、5种碳源(乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖)、以乳糖酪蛋白琼脂培养基为基础培养基,以5 g·L~(-1)的量分别添加不同的氮源(牛肉膏、蛋白胨、NH_4Cl、KNO_3、(NH_4)_2SO_4、NH_4NO_3)、pH(4、5、6、7、8、9)、温度(15、20、25、30、35℃)及光照强度(1 500、3 000、6 000、9 000 lx)等条件对分生孢子产量的影响;进一步利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术,分析病菌菌丝形成时期和分生孢子形成时期GATA家族5个成员基因的表达量。【结果】利用单因素分析法确定了影响玉米大斑病菌分生孢子产量的主要因素,发现产孢量最大的培养条件为玉米叶片葡萄糖琼脂培养基,碳源为乳糖,培养温度为25℃,pH 8,光照条件为光暗交替各12 h,光照强度为6 000 lx。另外,还发现在培养基中添加KNO_3可显著提高分生孢子产量。对GATA家族5个基因的相对表达水平分析表明,与菌丝时期相比,在分生孢子形成时期GATA2的表达量明显上调,其他基因(GATA1、GATA3、GATA4、GATA5)表达量均显著下调。【结论】利用单因素分析法确定了影响玉米大斑病菌分生孢子产量的最佳培养条件;根据GATA家族5个基因相对表达分析结果,推测GATA2可能参与了玉米大斑病菌的分生孢子形成。     

结晶法提取乳清中乳糖工艺的研究

本试验以生产鲜奶干酪素时排放的乳清为原料,经过中和去除乳清蛋白后浓缩、结晶得到粗制乳糖.结合单因素试验确定pH值、保温时间、结晶浓度为影响乳糖提取的主要因素,结合单因素及正交试验确定最佳工艺参数为:中和pH值6.8、保温时间40 min、浓缩糖度50 B啨.所得制品的感官、乳糖含量、水分、灰分氯化物等指标均符合QB/T3778-1999一级品标准.     

二氧化氯对沙门氏菌生物被膜的影响

通过扫描电镜和测定数据表明,在不锈钢表面形成的沙门氏菌生物被膜培养8 h后细菌密度达到3×10⁶ cfu/cm²;沙门氏菌以生物被膜的形式生长比以浮游形式对二氧化氯具有更强的抵抗能力;胰酶大豆肉汤(tryptone soy broth,TSB)等营养物质能明显减弱生物被膜对二氧化氯的敏感性。     

金黄色葡萄球菌分离株的菌膜测定及其影响因素

采用96孔细胞培养板法,对10株不同来源的金黄色葡萄球菌分离株的菌膜形成能力进行调查,并研究外部环境因素对金黄色葡萄球菌菌膜形成的影响。首先以金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC6538为模式菌株,确定了亲水性细胞培养板、培养48 h为适宜的菌膜体外培养条件。在此条件下测定了10株分离株的菌膜形成量,并研究了不同培养温度（25~46℃）和不同营养条件（葡萄糖和氯化钠）对菌膜形成的影响。结果显示,体外培养条件下,金黄色葡萄球菌普遍可以形成菌膜,10株菌中仅1株为菌膜阴性,不同菌株菌膜形成能力差异较大;较高的培养温度有利于菌膜的形成,有3株菌在46℃时菌膜形成量达到最大;0.5%葡萄糖和1%氯化钠的添加可显著改变各菌株的菌膜形成,葡萄糖倾向于促进临床分离株菌膜形成量的增加,而氯化钠倾向于促进食品分离株菌膜形成量的增加。这一结果,可以为实际环境中菌膜的预防及控制提供指导和方向,同时也说明金黄色葡萄球菌的菌膜形成存在着不同的调控模式。     

大蒜花序轴离体培养产生鳞茎方法的研究

为了筛选出高效培养基,确定适宜的培养方法,以大蒜花序轴为外植体,对大蒜花序轴离体培养诱导鳞茎培养方法进行研究。结果表明,大蒜花序轴离体培养诱导鳞茎最佳培养基为1/2MS+90 g.L-1蔗糖,pH值为5.8~6.0,鳞茎的形成率为96.8%,鳞茎总诱导率为800%。蒜薹总苞表面消毒的最佳方法为75%酒精2 min+0.1%升汞5 min+0.5%次氯酸钠8 min。不添加任何植物激素及添加较高浓度的蔗糖有利于试管鳞茎的形成。     

3株降烟草特有亚硝胺细菌菌株的生物学特性研究

[目的]探明3株降烟草特有亚硝胺含量的内生细菌菌株W1、W2、W3的生物学特性。[方法]选用不同的培养基,设置时间、温度、pH梯度,测定不同培养条件下菌液的生长情况。[结果]W1的最佳培养基为TSB,最佳培养时间为8 h,最适培养温度为25～32℃,最适pH为7.0;W2的最佳培养基为TSB,最佳培养时间为24 h,最适培养温度为25℃,最适pH为6.5;W3的最佳培养基为TSB,最佳培养时间为16 h,最适培养温度为25～28℃,最适pH为6.0。[结论]该研究为菌株进一步开发利用提供理论依据。     

不同理化因子对黄芩悬浮细胞系的影响

采用植物组织培养手段建立了稳定的黄芩细胞悬浮系,通过正交试验筛选出最佳的MS液体培养基为:NH4+/NO3-30/40 mmol/L,Ca2+3 mmol/L,pH值5.4,蔗糖3%.研究了碳源、肌醇、激素、水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)对悬浮系中黄苓甙含量的影响.结果表明:复合碳源、较低浓度肌醇对悬浮细胞系中黄芩甙的积累和胞外释放具有促进作用,2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L Kt最有利于悬浮系中黄芩甙的积累;水解酪蛋白和水解乳蛋白对黄芩甙的生成没有促进作用,反而起到了一定的抑制效应.