不同H5亚型禽流感灭活苗对鸡H5N1株的免疫效力试验

采用H5N2和H5N1两种类型的禽流感（AI）油乳灭活疫苗免疫鸡群对高致病性AI流行株H5N1AIV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明：在同等免疫剂量条件下，H5N2和H5N3油乳灭活苗对鸡群具有相似或同等的免疫效力，均能抵抗对高致病性AIH5N1流行株的攻击；AI母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

蛋鸡重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗免疫效果的评价

参照农业部既定的蛋鸡高致病性禽流感免疫程序,对100只蛋鸡雏免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗,300只蛋鸡雏分3组分别免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4)株、(Re-5)株灭活单苗作为对照,通过免疫应激反应观察、抗体效价检测,以评价该疫苗的免疫效果。     

重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗（H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2）对蛋鸡免疫效果抗体监测以及安全性试验评估

试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)在接种蛋鸡后产生抗体效价值的情况,评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 Re-2株)对蛋鸡预防高致病性禽流感疫病的效果。同时进行安全性试验。结果表明,蛋鸡在15日龄接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株),45日龄进行二次免疫,75日龄进行三免,产生H5N1Re-11株抗体滴度、H5N1Re-12株抗体滴度、H7N9 Re-2株抗体滴度都较高,从抗体消长规律来看,对产蛋前的蛋鸡都有较好的保护力,疫苗接种后未对鸡群造成应激反应。通过本试验在蛋鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)首次免疫后14 d产生抗体有保护力,二免后14 d抗体滴度达到高峰,对蛋鸡有很好的保护力,为预防蛋鸡高致病性禽流感疫病提供临床依据。     

H5亚型禽流感灭活疫苗的研制

以H5N1亚型禽流感病毒接种鸡胚，收取鸡胚液为抗原研制了禽流感灭活疫苗，并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验。结果表明，获得了较高效价的制苗抗原．灭活前后HA分别为2^10.0-11.0和2^9.0-10.0。试制疫苗物理性状符合要求，安全性良好。试验鸡在免疫14d后血清抗体达到2^7.5，210d血清HI抗体仍维持在2^5.0左右；免疫后18d使用高致病性H5亚型禽流感病毒攻毒，获得100％的保护。分别使用0．1，0．3和0．5mL免疫鸡，发现0．3～0．5mL剂量组免疫后血清抗体达到2^7.4-8.0。疫苗在2～8℃保存540d，疫苗物理性状没有改变，免疫后血清HI抗体可以达到2^7.5。这提示研制的疫苗可以有效控制禽流感H5亚型的流行。     

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究

 表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果     

灭活后无血凝价的禽流感H_5亚型病毒的免疫原性研究

0. 4 %甲醛灭活后血凝价为 0的 2株禽流感H5亚型病毒制备的油乳剂疫苗免疫 14 0日龄蛋鸡 ,疫苗免疫 10天后HI抗体水平分别升到 8. 0Log2、6 . 2Log2以上 ,免疫后 17～ 2 4天HI抗体水平升到高峰 (8. 8Log2、7. 8Log2 ) ,免疫 38天后能抵御剂量为 4ELD50 的同种强毒的攻击。结果表明 ,灭活后血凝价为 0的禽流感H5亚型病毒与灭活后血凝价为 5的病毒抗原的免疫原性无显著差异     

重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5 N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2)对黄羽肉鸡免疫效果抗体监测试验

试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re-2株)在慢速型黄羽肉鸡上接种后产生抗体效价值的情况,来评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 Re-2株)对黄羽肉鸡预防高致病性禽流感疫病的效果。结果表明黄羽肉鸡在15日龄接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株),45日龄进行二次免疫,75日龄进行三免,产生H5N1Re-11株抗体滴度、H5N1Re-12株抗体滴度、H7N9 Re-2株抗体滴度都较高,从抗体消长规律来看对慢速型黄羽肉鸡出栏前都有很好的保护力。试验在黄羽肉鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)首次免疫后14 d产生抗体有保护力,二免后28日龄抗体滴度达到高峰,对慢速型黄羽肉鸡有很好的保护力。     

不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)\[GS/GD/96\]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8 μg HA/0.3 mL（肌肉注射）、103PFU/100 μL（刺种）、106EID50/100 μL（滴鼻、点眼）、15 μg/200 μL（肌肉注射）等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒（HPAIV） GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护（不发病、不致死、不排毒）;在病毒攻击前,灭活疫苗（H5N1亚型,Re\|1株）、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗（H5亚型）、禽流感、新城疫重组二联活疫苗（rLH5\|1株）以及禽流感DNA疫苗（H5亚型,pH5\|GD）所诱导的HI抗体平均水平分别为875log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。     

禽流感单价与二价油乳剂灭活苗免疫鸡群HI抗体水平比较

用禽流感单价与二价油乳剂灭活苗免疫试验鸡群 ,于 42 ,68,91日龄采用HI血凝抑制试验测定其抗体水平 ,结果表明 :首免后 ( 4 2日龄 )和二免后 ( 68日龄与 91日龄 ) ,注射二价油乳剂灭活苗的B群鸡的H5N1 亚型抗体水平均明显高于注射单价苗的A群鸡 ,其中在 42和91日龄时差异极显著 ( p <0 .0 1 ) ,在 68日龄时差异显著 ( p <0 .0 5 ) ;B群鸡的H9N2 亚型抗体也明显高于A群鸡 ,其中在 42日龄和 68日龄时差异极显著 ( p <0 .0 1 )。     

广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及遗传进化分析

[目的]明确广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子遗传变异规律及其对公共卫生安全的影响,为H9亚型禽流感(AI)的防控提供参考依据.[方法]从广西某肉鸡养殖场采集病料,经SPF鸡胚接种进行病毒分离,对初步鉴定为H9亚型AIV分离株的HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M和NS等8个基因片段进行克隆测定及遗传进化分析,同时对分离毒株的生物学特性进行测定.[结果]从广西发病鸡群中分离获得一株H9N2亚型AIV,命名为A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2).分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)HA基因的裂解位点为PSRSSR↓GLF,具有典型的低致病性AIV(LPAIV)分子特征,在遗传进化关系上属于4.2.5分支,与国内常用H9N2亚型AIV疫苗株所属的4.2.3分支存在一定差异;其他7个基因也分别来源于不同的AIV亚型.分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016 (H9N2)同时具备与α-2,3唾液酸和α-2,6唾液酸受体结合的特性,且具有感染人类的潜在风险;其感染鸡群后病毒分布主要集中在气管、肺脏和脾脏,可通过呼吸道和消化道同时排毒,且在攻毒后第1d即开始排毒,第5d为排毒高峰.[结论]从广西发病鸡群中分离获得的A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)属于LPAIV,是由不同亚型AIV重组产生的H9N2亚型新毒株,可导致鸡群疫苗免疫失败,且具有感染人类的潜在风险.     

基于荧光熔解曲线模式RT-PCR快速检测H5N1亚型禽流感病毒

针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR Green Ⅰ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因.熔解曲线分析显示,H5和N1扩增片段的熔解温度分别为(795±03)℃和(833±03)℃,无引物二聚体形成,扩增产物片段大小分别为150bp和474bp,与预期大小相符,测序结果证实为H5和N1亚型基因的靶序列.该方法能从H5N1样本中检出阳性扩增信号,熔解曲线可见H5和N1双特异峰;而H5N2样本有阳性扩增,熔解曲线仅见H5单特异峰.AIV的其他HA亚型和其他病毒的RNA、DNA 无扩增信号.本法最低可检测210拷贝·μL-1和195拷贝·μL-1 H5和N1重组质粒,敏感度分别是RT-PCR的100、1 000倍.本研究建立的基于荧光熔解曲线模式RT-PCR可用于H5N1亚型AIV的检测.     

禽流感病毒分子生物学研究进展

禽流感是由A型流感病毒引起鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑等家禽的传染病。禽流感病毒H5N1亚型于1997年、H9N2亚型于1999年、H7N7亚型于2003年和H5N1亚型于2004年先后发生感染人的事件，人们不得不重新认识禽流感的公共卫生意义。本文综述了禽流感病毒的基因组、主要蛋白及其功能、毒力分子学基础、分子生物学诊断和疫苗研究等。     

H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律的研究

通过对父母代肉鸡、水禽禽流感病毒H5血清血凝抑制抗体水平连续跟踪监测。探讨Hs亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律。结果表明：雏鸡7日龄时母源抗体水平达最大值,20日龄时母源抗体下降到极低水平,雏鸡最佳首次免疫日龄为10日龄左右,二次免疫应根据鸡群母源抗体水平于首次免疫后100d左右进行。雏鹅、鸭3日龄进行首次免疫,水禽对禽流感疫苗产生良好的免疫应答,并于免疫后25-30d达到抗体高峰,但首次免疫抗体维持时间不长,最佳二次免疫时间应在首次免疫后30d左右进行。     

减氮配施腐植酸对草甸黑土理化性质及玉米产量的影响

高强度利用导致草甸黑土肥力下降、质量不断退化.为探讨减氮配施腐植酸对土壤持水性能、保肥能力以及玉米产量的影响,设置草甸黑土田间试验,包括6个处理:不施肥(CK),常规施肥处理(N100H0),减施氮肥20％+5 t·hm-2腐植酸(N80H5),减施氮肥20％+10 t·hm-2腐植酸(N80H10),减施氮肥30％+5 t·hm-2腐植酸(N70H5),减施氮肥30％+10 t·hm-2腐植酸(N70H10).结果表明,施用腐植酸各处理土壤理化性状均得到有效改善,其中N80H10处理为最佳施肥模式,与常规施肥处理相比,土壤容重降低18.20％,土壤碱解氮、速效钾、速效磷含量分别增加5.69％、7.58％和10.13％,玉米产量提高21.17％,肥料利用率显著提高.可见,减氮配施腐植酸对玉米稳产增产及绿色农业发展具有重要意义.     

对棕色固氮菌OP固氮酶钼铁蛋白功能的初步研究

在固氮酶所催化的N_2、C_2H_2等底物还原反应以及ATP水解反应中,固氮酶的钼铁蛋白和铁蛋白各起什么作用,研究这一问题对于阐明固氮酶催化机理有重要的意义。近年来,国内外的研究表明,铁蛋白分子能络合二个MgATP,在Na_2S_2O_4与钼铁蛋白分子之间起传递电子的作用。Mortenson等及Tso等分别用EPR法及凝胶平衡法揭示:钼铁蛋白分子不能络合MgATP。但是,最近Kimber     

毒鼠磷灭杀森林害鼠的研究

目前,在我国林区广泛使用的杀鼠剂毒性大、不安全,并有二次中毒现象,特别是长期单一使用一种杀鼠剂,容易产生抗药性和拒食性,影响灭鼠效果。为此、研制了以毒鼠磷为主剂的杀鼠毒饵,用以取代氟乙酰胺。主要做了毒力测定、室内和野外药效试验、残效及二次中毒试验等项工作,并搞了大面积飞机防治。结果表明:以毒鼠磷为主剂的杀鼠毒饵灾鼠效果好,经济安全,在我国林区有广泛地推广使用前途。     

温度、湿度及通气状况对土壤中N2O释放量影响的研究

采用乙炔抑制法,利用气相色谱仪测定土壤中 N_2O 释放量,并研究其影响因素。测定结果表明:温度、湿度及通气状况对土壤中 N_2O 释放量的影响具有显著差异,并且交互作用的差异也达到极显著水平。由温度、湿度与土壤中 N_2O 最大释放量的逐步回归方程式看出,在嫌气条件下温度对反硝化作用的影响比湿度的影响较为显著,而好气条件下湿度的影响要比温度的影响显著。     

H_2O_2、NaCl、SA处理对砂磨后甘草种子发芽特性的影响

研究了砂磨后H2O2、NaCl和SA溶液处理对甘草种子发芽率、发芽势、发芽指数等发芽特性的影响.结果表明:甘草种子砂磨后经适宜浓度的H2O2、NaCl和SA处理均能显著促进种子萌发,其中,以0.4 mol.L-1H2O2、50 mmol.L-1NaCl和0.01 mmol.L-1SA处理效果最好,种子发芽率较未经砂磨处理的种子分别提高244.1%、264.7%和269.8%,发芽势分别提高279.5%、334.0%和320.4%,发芽指数分别提高411.0%、364.9%和456.3%,与单一砂磨处理比较也表现出明显促进种子萌发的效果.H2O2、NaCl和SA的3个最优浓度中,以0.01 mmol.L-1SA处理的促甘草种子萌发效果最佳.     

Cytochemical localization of H_2O_2 in pigment glands of cotton(Gossypium hirsutum L.)

Programmed cell death(PCD) plays a critical role in the development of plant pigment glands, while H_2O_2, which is a kind of reactive oxygen species(ROS) produced by the aerobic metabolism of cells, acts as an important signal in this process. Here, we investigated the temporal and spatial dynamics of accumulated H_2O_2 in pigment glands of Gossypium hirsutum L. with 3,3-diaminobenzidine(DAB) staining, 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate(DCFH2)-DA fluorescent labeling and Ce Cl3 cytochemical localization techniques. The results showed that the pigment glands of G. hirsutum could generate H_2O_2, and the amount and localization of H_2O_2 varied at different developmental stages. At the early developmental stage, a small amount of H_2O_2 accumulated in the vacuole membrane of pigment gland cells. At the intermediate stage, a large number of H_2O_2 appeared in the vacuole membrane, while cell walls started to accumulate a small amount of H_2O_2. When pigment gland cell degraded, H_2O_2 mainly accumulated on the chloroplast envelope membrane of inner sheath cells. With the degradation of the sheath cells, H_2O_2 was detected in cell wall and the membrane of secretory vesicles which contains the preliminary contents of pigment gland. With the pigment glands completely maturation, H_2O_2 would disappeared. The accumulation sites of H_2O_2 are consistent with the process of PCD of individual gland cells, which started from the degradation of intracellular membrane and ended with the degradation of cell walls. Thus H_2O_2 probably plays an important role in the development of pigment glands. In addition, the development of pigment glands and the generation of H_2O_2 are not associated with the light, and no H_2O_2 was detected in the secretions of pigment glands.