侧耳木霉产漆酶酶活力测定和脱色方法

为研究木霉粗酶液胞外分泌物的生物活性,从愈创木酚的用量、反应温度、缓冲液种类、缓冲液pH、缓冲液浓度5个因素,对木霉粗酶液胞外分泌物漆酶的酶活力进行研究;从反应时间、反应温度、缓冲液pH、染料浓度、缓冲液浓度、酶液稀释倍数6个因素对木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶对染料的脱色作用进行研究.结果表明:木霉漆酶在反应温度为25℃,琥珀酸缓冲液的pH为4.0,琥珀酸缓冲液浓度为0.045 mol/L,愈创木酚用量为0.04 mol/L时,木霉粗酶液胞外分泌物漆酶酶活力最优;木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶其脱色作用在反应温度为30℃,pH为3.5,染料浓度为0.01 g/L,醋酸缓冲液浓度为0.2 mol/L时,木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶脱色作用最好.     

黄粉虫蛹超氧化物歧化酶的提取及性质研究初报

以黄粉虫蛹冻干粉为研究材料,获得了一种超氧化物歧化酶(SOD),PAGE法显示为均一的蛋白谱带.通过在相同时间内,不同pH值、温度对酶的影响,结果表明,意大利蜂蛹中SOD在相同的时间内,pH值为8.35时,有最大的酶活力,pH值高于或低于8.35,酶活力均明显下降;温度在25.5℃左右酶活力最高,400C时保持活力80%以上,到90℃时没有活力.     

青梅果超氧化物歧化酶粗酶的提取及活性研究

[目的]测定青梅果超氧化物歧化酶（SOD）活性,筛选青梅果SOD粗酶提取最有效的方法。[方法]以重庆綦江青梅果为原料,采取不同料液比提取青梅SOD粗酶,以Sevage法除去杂蛋白,硫酸铵分级沉淀。同时对各步骤所得S0D粗酶活性、蛋白量、比活的检测结果进行比较。[结果]H3P04缓冲液的用量对SOD粗酶的提取有直接影响。当H3PO4缓冲液与梅果的比例为3：1时,测得酶的比活最高,为25．34U／mg蛋白;粗酶液按3：1体积比加入的氯仿-乙醇混合液除去杂蛋白效果明显;粗酶液添加（NH4）2SO4至90％饱和度沉淀SOD效果好,比活较提取液上升51．43U／mg蛋白。[结论]青梅果SOD粗酶提取的最佳条件：H3PO4缓冲液与青梅比例为3：1,温度为25～30℃,pH值为7．8,Sevage法除去杂蛋白,（NH4）2SO4盐析从35％添加至90％饱和度沉淀SOD。该条件下,总蛋白为215．13mg,酶总活力为5415．74U／mg蛋白,比活为25．34U／mg蛋白。     

树莓超氧化物歧化酶的分离纯化和部分性质研究

树莓SOD粗酶液经硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100柱层析,同时对比DEAE-52柱层析和金属螯合亲和柱层析,并对其部分性质做了研究。从树莓中纯化得到3种Mn-SOD同工酶:SODⅠ、SODⅡ、SODⅢ。结果表明经金属螯合亲和柱层析的回收率和纯化倍数远高于DEAE-52柱层析。3种SOD对KCN和H2O2均不敏感,最大紫外吸收峰均为280 nm,SODⅠ和SODⅡ受温度影响较小,SODⅢ受温度影响稍大,pH值在7~9范围内3种SOD的相对酶活力较高。     

意大利蜜蜂蛹超氧化物歧化酶提取技术研究

以意大利蜜蜂蛹冻干粉为研究材料,经提取、盐析、浓缩、透析和DEAE纤维素离子交换柱层析等纯化步骤,获得了一种超氧化物歧化酶(SOD)。该酶蛋白结晶呈菱形,PAGE法显示为均一的蛋白谱带。在相同时间内,测定了pH值、温度对该酶活力的影响。结果表明:意大利蜜蜂蛹中SOD在pH值为8.3时,酶活力最高,pH值高于或低于8.3时,酶活力均有明显下降;温度在25℃左右时,该酶活力最高,40℃时保持活力在80%以上,到90℃时没有活力,说明意大利蜜蜂蛹SOD是一种比较耐热的酶,这为SOD的提取提供了新酶源。     

干酪乳杆菌蛋白酶纯化与动力学性质

干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)6033经增菌培养、超声波破碎、冷冻离心后获得粗酶液。粗酶液经硫酸铵分级沉淀后,分别进行阴离子交换层析、疏水层析、分子筛层析,最终获得1种纯蛋白酶。该酶分子量为61 2kD,可被苯甲基磺酰氟(PMSF)和乙二胺四乙酸(EDTA)强烈抑制,Co2 和Ca2 能增强该酶活力,Fe3 、Zn2 和Cu2 对其活性则有抑制作用。该酶在37℃时,最大酶活力出现在pH值7 0附近,pH4 0时相对酶活力下降到39 0%,而pH9 0时相对酶活力仅维持在8 0%左右。pH7 0时该酶的最适温度为37℃左右,20℃时相对酶活力下降到54 0%,而60℃时相对酶活力仅为34 0%。以酪蛋白作为底物时测得该酶Km值为1 5mg/ml、Vmax为32 0。     

来源于铜绿假单胞菌GF31的氯氰菊酯降解酶的提取及其降解动力学研究

从实验室自行筛选并保藏的氯氰菊酯高效降解菌——铜绿假单胞菌GF31中提取胞外粗酶液,研究其降解氯氰菊酯的动力学特性.结果表明,在温度20～60℃,pH值5.0 ～9.0范围内,胞外粗酶液都能保持较好的降解活力,最适温度为60℃左右,最适pH为7.0左右.不同pH值和不同温度条件下,氯氰菊酯的酶促降解进程模拟都符合一级动力学模型,相关系数大于0.9.     

大蒜中超氧化物歧化酶提取方法研究

以大蒜为试验材料,分别采用磷酸缓冲液提取法、热变性法对其细胞溶质中的超氧化物歧化酶进行提取分离,然后再利用硫酸铵分级盐析法对经热变性和缓冲液抽提所获得的SOD粗提液进行纯化,配合透析除去残留的小分子物质,最后通过测得的SOD酶活力的大小判断提取大蒜SOD的最佳方法,并通过对2种方法中不同参数的优化,找出最佳提取条件.结果表明:热变性法粗提大蒜SOD,透析法配合硫酸铵分级盐析法纯化SOD为最理想的提纯方法.其中热变性法最适温度为60℃,磷酸缓冲液浸提法合适的缓冲液pH值为7.8.     

pH值对百合叶片粗提液酶活性的影响

设计5种水平pH值的磷酸缓冲液,研究pH值对百合叶片粗提液保护酶SOD、POD、CAT活性的影响。试验结果表明,SOD、POD和CAT 3种酶活性较高的提取液最适pH值分别为7.5、6.0、7.0。选用pH值7.0磷酸盐缓冲液作为百合叶片粗提液,基本可达到同时提取3种保护酶的目的。     

一株黑曲霉产纤维素酶的性质研究

[目的]为黑曲霉的实际应用提供依据。[方法]摇瓶培养黑曲霉得到纤维素酶粗酶液,测定C1酶、Cx酶、BG酶的活力,研究温度、pH值、底物浓度、金属离子对不同酶组分活力的影响。[结果]黑曲霉分泌的纤维素酶较全,但不同酶组分的分泌高峰并不一致。C1酶、BG酶的最适温度为60℃,Cx酶的最适温度为70℃。Cx酶、BG酶最适pH值4～5,C1酶最适pH值在4左右。C1酶、BG酶随底物浓度升高,活力升高,底物浓度为1.000%时活力最高。Cx酶在底物浓度为0.500%～0.625%时活力最高。Ca2+、Fe2+对酶有强烈的抑制作用,Ba2+、Mn2+对酶有一定的激活作用,Zn2+、Cu2+对Cx酶、C1酶活力有抑制作用,对BG酶有激活作用。[结论]不同反应条件对不同酶组分的活力影响各异。黑曲霉纤维素酶系在60～70℃、pH值4～5时最稳定。     

淋浆水中SOD提取工艺研究

[目的]研究从淋浆水中提取SOD酶的工艺条件。[方法]以陕西太白酒厂酿酒后的淋浆水为材料，比较甲苯、异丙醇和乙醇一氯仿3种有机溶剂从淋浆水中提取SOD粗酶液的效果，研究温度和pH对SOD酶活力的影响以及不同异丙醇浓度对SOD提取的影响，采用丙酮2次沉淀对SOD进行分离纯化，并采用H2O2，和乙醇一氯仿对样品SOD酶类型进行敏感性鉴定。[结果]试验确定以80％的异丙醇为最佳粗酶液提取条件。丙酮2次沉淀得到纯化的SOD产品，其酶比活为1026U／mg，酶回收率达65．2％。该酶经H：0：和乙醇一氯仿敏感性鉴定为Cu·Zn．SOD，对热和酸碱度具有一定稳定性，在50℃以下，酶相对活性保持在91．2％～100％，pH为3．0～10．0时SOD活性保持在74．1％一93．6％。[结论]该提取工艺过程简便，易操作，是较为理想的从淋浆水中提取SOD的工艺。     

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.     

啤酒废酵母自溶过程强化研究

[目的]研究啤酒废酵母强化自溶过程,优化强化作用因素。[方法]对影响啤酒废酵母自溶后释放的超氧化物歧化酶(SOD)、氨基酸、葡萄糖内容物含量及SOD的活性提取的各因素进行单因素试验,并设计物理因素正交试验进行各因素参数优化;同时对啤酒酵母自溶后释放的上述活性物质进行添加葡聚糖酶、木瓜蛋白酶促进自溶过程的单因素影响研究,并设计化学因素正交试验进行各因素参数优化。[结果]物化因素影响的正交试验表明,啤酒废酵母自溶过程氨基酸含量提取的最优组合为pH 5.0、加水量300%、加盐量3%,葡萄糖含量提取的最优组合为pH 5.0、加水量250%、加盐量1%,SOD含量提取的最优组合为pH 5.5、加水量300%、加盐量2%,SOD活性提取的最优组合为pH 5.5、加水量250%,加盐量1%。生化因素影响的正交试验表明,氨基酸含量提取的最优组合为pH 6.0、温度60℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+4 g/kg木瓜蛋白酶,葡萄糖含量提取的最优组合为pH 6.0、温度55℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+4g/kg木瓜蛋白酶,SOD含量提取的最优组合为pH 6.0、温度55℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+2 g/kg木瓜蛋白酶,SOD活性提取的最优组合为pH 6.5、温度60℃、酶用量6 g/kg葡聚糖酶+4 g/kg木瓜蛋白酶。[结论]在优化的啤酒废酵母自溶过程强化作用各提取物的最优组合条件下,可简化操作过程、降低操作难度,提高酵母菌成分的利用率及其得率。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

沙棘超氧化物岐化酶(SOD)的提取与化学修饰

新鲜沙棘果经匀浆超速离心，用两酮进行分级分离，得到SOD经抗坏血酸－Fe^3 修饰，发现被修饰后的SOD活性、在不同pH值下的活性、抗蛋白酶水解能力均有很大变化。     

茎瘤芥超氧化物歧化酶活性的研究

[目的]揭示茎瘤芥超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及pH、底物浓度、温度对SOD活性的影响。[方法]以茎瘤芥的瘤茎及叶片为试验材料,用邻苯三酚自氧化法分别测得它们中SOD的活性,以及pH、底物浓度、温度对其活性的影响,从而比较茎瘤芥瘤茎及叶片中SOD的含量,以及是否具有开发利用的价值。[结果]茎瘤芥瘤茎SOD的活性在200～300 U/g;茎瘤芥叶片SOD的活性在250～400U/g。说明茎瘤芥叶片SOD活性高于茎瘤芥瘤茎SOD活性。茎瘤芥SOD在pH为8.3～8.6有最大酶活性;最适温度为50℃;最适底物浓度为7 mmol/L左右。[结论]茎瘤芥叶片SOD活性高于茎瘤芥瘤茎SOD活性。研究结果为开发茎瘤芥资源提供了参考。     

铝胁迫下DL-异柠檬酸-γ-内酯对杉木幼苗SOD活性的影响

采用正交回归旋转试验设计,通过苗木水培试验,应用数学建模分析活性铝、DL-异柠檬酸-γ-内酯、营养液浓度以及pH值对杉木幼苗超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果表明,在不同胁迫阶段,杉木幼苗SOD活性均与不同试验因素的线性作用紧密相关;随着胁迫时间的延长,幼苗SOD活性与不同试验因素的非线性作用下降。当活性铝、DL-异柠檬酸-γ-内酯以及培养液浓度一定时,随着胁迫时间的延长,SOD活性随着pH值的增大总体表现为一定程度的下降;当pH值、DL-异柠檬酸-γ-内酯以及培养液浓度一定时,随着胁迫时间的延长,SOD活性随着活性铝浓度的增大而显著下降;当pH值、活性铝以及培养液浓度一定时,随着胁迫时间的延长,在胁迫前期及中期(1-30d),SOD活性随着DL-异柠檬酸-γ-内酯浓度的增大总体表现为一定程度的下降,但在胁迫后期(31-45d),DL-异柠檬酸-γ-内酯浓度对SOD活性影响较小。     

水培条件下pH对大蒜生长趋势的影响

[目的]研究水培大蒜在不同pH条件下的生长发育及SOD活性变化。[方法]土壤溶液的pH对植物的生长发育有重要的影响,试验以不同梯度的pH水溶液水培大蒜,在不同生长阶段对其SOD活性进行测定。试验采用丙酮沉淀法分离纯化SOD沉淀,用NBT光还原法测定其活性。[结果]水培大蒜在pH为6.0时长势最好。在pH 4.55.5的生长环境下,大蒜的SOD活性相对稳定,但伴随着逐渐生长,SOD活性呈现上升趋势。酸性环境下,SOD活性相对较高。[结论]该研究可为大蒜的水培提供指导。     

猪血超氧化物歧化酶联合提取工艺及其活性检测研究

[目的]研究猪血超氧化物歧化酶（SOD）与其他生物活性物质的联合提取工艺,为充分利用猪血资源和规模化生产SOD提供技术基础。[方法]从猪血中分离纤维连接蛋白、免疫球蛋白和血红素后,提取SOD。通过优化邻苯三酚的用量、SOD样液用量、反应温度和缓冲液pH值,对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的条件进行了优化。按照优化后的条件测定联合提取的SOD的比活力。[结果]SOD活性测定的优化条件为50mmol／L邻苯三酚7μl,50mmol／L Tris—HCl（pH8．2）3ml,反应温度为25℃,SOD样液添加量为10μl。联合提取的SOD的比活力达到5056U／mg蛋白质。[结论]通过现代生物工程集成技术从猪血中分级提取了4种生物活性物质,所提取的SOD具有较好的活性。