木瓜超氧化物歧化酶粗酶提取工艺初探

[目的]筛选木瓜超氧化物歧化酶(SOD)粗酶最佳提取工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为原料,以溶解SOD,去除杂蛋白,沉淀SOD为基本工艺程序,对SOD的4种提取工艺进行比较研究。同时对4种工艺提取的SOD单位蛋白、活性、比活的检测结果进行比较。[结果]磷酸缓冲液的用量对提取效果有直接影响,缓冲液与木瓜之比为3∶1,测得其比活最高,为54.55 U/mg。粗酶液加2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去除杂蛋白效果比较明显。粗酶液添加(NH4)2SO4到90%饱和度沉淀SOD效果较好,比活较提取液上升44.52 Umg。[结论]木瓜SOD粗酶最佳提取工艺条件:温度为25～30℃,pH值为7.8,0.05 mol/L磷酸缓冲液与木瓜比例为3∶1,用2.5倍体积的氯仿-乙醇混合液去杂蛋白,添加55%(NH4)2SO4至90%饱和度沉淀SOD。     

淋浆水中SOD提取工艺研究

[目的]研究从淋浆水中提取SOD酶的工艺条件。[方法]以陕西太白酒厂酿酒后的淋浆水为材料，比较甲苯、异丙醇和乙醇一氯仿3种有机溶剂从淋浆水中提取SOD粗酶液的效果，研究温度和pH对SOD酶活力的影响以及不同异丙醇浓度对SOD提取的影响，采用丙酮2次沉淀对SOD进行分离纯化，并采用H2O2，和乙醇一氯仿对样品SOD酶类型进行敏感性鉴定。[结果]试验确定以80％的异丙醇为最佳粗酶液提取条件。丙酮2次沉淀得到纯化的SOD产品，其酶比活为1026U／mg，酶回收率达65．2％。该酶经H：0：和乙醇一氯仿敏感性鉴定为Cu·Zn．SOD，对热和酸碱度具有一定稳定性，在50℃以下，酶相对活性保持在91．2％～100％，pH为3．0～10．0时SOD活性保持在74．1％一93．6％。[结论]该提取工艺过程简便，易操作，是较为理想的从淋浆水中提取SOD的工艺。     

猪血超氧化物歧化酶联合提取工艺及其活性检测研究

[目的]研究猪血超氧化物歧化酶（SOD）与其他生物活性物质的联合提取工艺,为充分利用猪血资源和规模化生产SOD提供技术基础。[方法]从猪血中分离纤维连接蛋白、免疫球蛋白和血红素后,提取SOD。通过优化邻苯三酚的用量、SOD样液用量、反应温度和缓冲液pH值,对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的条件进行了优化。按照优化后的条件测定联合提取的SOD的比活力。[结果]SOD活性测定的优化条件为50mmol／L邻苯三酚7μl,50mmol／L Tris—HCl（pH8．2）3ml,反应温度为25℃,SOD样液添加量为10μl。联合提取的SOD的比活力达到5056U／mg蛋白质。[结论]通过现代生物工程集成技术从猪血中分级提取了4种生物活性物质,所提取的SOD具有较好的活性。     

猕猴桃中SOD提取工艺研究

[目的]寻找一条从植物中提取出较纯净S01）的廉价工艺路线。[方法]利用超氧化物歧化酶（SOD）耐热等性质,对以猕猴桃为原料制备的SOD粗酶液分别进行热变性、等电点、丙酮沉淀处理,以得到纯度较高的SOD酶液。[结果]试验确定了热变性、等电点、丙酮沉淀处理猕猴桃中的SOD粗酶液的最佳提取参数分别为65℃下25min、pH5．0、V丙酮：VSOD酶液=1：1,并且依次用3种方法下的最佳参数进行提取,得到的蛋白样品经分析达到了电泳纯。[结论]研究可为植物中SOD的廉价提取提供参考依据。     

纯化黑加仑种子中超氧化物歧化酶(SOD)的研究

采用有机溶剂分级沉淀法、纤维素离子交换层析法及葡聚糖凝胶过滤法从黑加仑种子中提取SOD。实验证明 :粗酶液经上述方法纯化后SOD酶活性达692.95U,蛋白含量为0.72mg,比活达964540U·g-1,纯化倍数达253.16 ,回收率为31.41%。黑加仑种子中的SOD是Cu.Zn-SOD     

紫贻贝多糖脱除蛋白质方法的研究

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝（Mytilus edulis linnaeus）多糖蛋白。通过正交中心组合实验，应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明，酶法脱蛋白的最优工艺参数为：pH7．1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量0．5U／mg粗多糖，温度41℃，氯化钙加入量7．4mg／g，时间3h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白，适宜的工艺条件为：氯仿：正丁醇=5：1，料液比4：1，振摇时间20min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78．5％；与其它传统脱蛋白方法比较，该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想，为多糖的分离纯化研究提供了有益的参考。     

转基因玉米中植酸酶蛋白沉淀条件探索

为了对玉米中表达的植酸酶蛋白的酶学性质进行深入研究,以转基因玉米籽粒中提取的植酸酶粗提液为研究材料,探索了植酸酶和总蛋白的溶解度与硫酸铵饱和度之间的关系,结果显示在0~60%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶仅占初提液中总植酸酶含量的1.85%,而在此范围内沉淀的总蛋白却占初提液的总蛋白含量的57%,植酸酶比活为0.44 U/mg;在60%～80%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶和总蛋白分别占初提液中各自含量的58%和10%,植酸酶比活为84.4 U/mg;在80%～90%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶收率占初提液中含量的1.9%。因此选用60%～80%硫酸铵饱和度分级沉淀植酸酶,在此条件得到的植酸酶比活比粗提液的植酸酶比活（13.8 U/mg）高6.1倍。     

紫贻贝多糖脱除蛋白质方法的研究

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝（Mytilus edulis linnaeus）多糖蛋白。通过正交中心组合实验，应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明，酶法脱蛋白的最优工艺参数为：pH7．1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量0．5U／mg粗多糖，温度41℃，氯化钙加入量7．4mg／g，时间3h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白，适宜的工艺条件为：氯仿：正丁醇=5：1，料液比4：1，振摇时间20min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78．5％；与其它传统脱蛋白方法比较，该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想，为多糖的分离纯化研究提供了有益的参考。     

响应面法优化提取羊血SOD除血红蛋白工艺研究

对沉淀剂的体积比、沉淀剂与溶血液的体积比和沉淀时间对羊血红蛋白去除效果的影响进行了研究,确定了最优工艺参数．采用中心试验组合设计和响应面分析法,得出的最优组合为A2B2C2,即沉淀剂为95％的乙醇与丙酮、沉淀剂与溶血液,体积比均为1：1,沉淀时间为30min．除血红蛋白是羊血超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）提取的关键,用响应面法工艺除羊血红蛋白后得到的SOD粗酶液,活性为302．59U／mg．     

番茄中超氧化物歧化酶提取工艺的优化

[目的]对番茄中超氧化物歧化酶(SOD酶)的提取工艺进行优化,旨在进一步开发植物SOD酶源。[方法]以富含SOD酶的番茄为试验材料,选取浸提缓冲液的pH值、浸提时间、热处理温度、热处理时间4个因素进行正交试验设计,优化提取工艺。[结果]番茄中SOD酶最佳提取工艺为缓冲液pH7.8、浸提时间2 h、热处理温度50℃、热处理时间30 min。[结论]该工艺简便高效地从番茄中提纯了超氧化物歧化酶,可用于实际生产,为后续进一步纯化研究该酶奠定了基础。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

高速逆流色谱法分离制备抱茎獐牙菜中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷

[目的]建立抱茎獐牙菜（Swertia franchetiana H.Smith）中分离制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的高速逆流色谱法。[方法]采用溶剂系统为氯仿∶甲醇∶水=4∶4∶2（V/V/V）;上相为固定相,下相为流动相;上下相超声波脱气20min;转速850r/min;流动相流速2ml/min;检测波长254nm。所得产物用旋光仪测定其旋光度,计算其比旋光度,进行纯度鉴定。[结果]从100mg抱茎獐牙菜粗提物中得到龙胆苦苷14mg,獐牙菜苦苷27mg。测得龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的比旋光度[a]Dt分别为-196.3°和-126.6°,纯度较高。[结论]该研究可为用高速逆流色谱法大量制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷提供可行的方法。     

北冬虫夏草固体发酵产胞外多糖条件的研究

[目的]研究北冬虫夏草固体发酵产胞外多糖的条件。[方法]采用固体发酵法培养北冬虫夏草,研究碳源和氮源种类、酵母粉含量、KH2PO4含量、初始pH值、接种量、种龄及发酵时间对北冬虫夏草发酵产胞外多糖的影响。[结果]单因素试验和正交试验表明,最佳的发酵条件为:大米∶米糠=90∶10,酵母粉1.0%、KH2PO40.25%、初始pH 6.0、种龄4 d、接种量8%(V/W)、温度28℃、固水比1∶1(W/V)、发酵时间6 d。在此发酵条件下,北冬虫夏草胞外多糖产量达38.625 mg/g.干基。[结论]该研究为开发新型动物保健饲料提供了理论支持。     

响应面法优化费菜SOD提取条件的研究

[目的]利用响应面法优化费菜SOD的提取条件。[方法]首先进行单因素优化试验,单因素分别为时间、p H、液料比。经过单因素优化试验,得出最优时间、最优p H、最优料液比。通过Design expert8.0.5软件设计出17种试验方案。通过试验,得出每种方案的蛋白得率,利用Design expert8.0.5软件进行了方差分析,各因素之间的交互作用分析,并得出了相应的数学模型。[结果]单因素试验中,最优时间为1 h,最优p H为7.8、最优料液比为1∶15 g/m L。各因素交互作用分析表明,提取费菜SOD的最佳方案为提取时间0.98 h、p H7.79、料液比1∶13.71 g/m L。利用邻苯三酚自氧法测得提取的SOD酶活为12 U/g。[结论]该研究结果可为费菜资源的进一步利用与研究提供参考。     

β-葡萄糖苷酶产生菌的选育及其性质研究

[目的]筛选β-葡萄糖苷酶高产菌株,确定产酶的最佳工艺条件。[方法]利用几种黑曲霉进行产β-葡萄糖苷酶的筛选,得到1株β-葡萄糖苷酶高产菌株黑曲霉3.316。通过单因素和正交试验,确定产酶的最佳工艺条件,研究不同碳源(麸皮、可溶性淀粉、豆粕和米糠)在相同碳源浓度(2%)及相同发酵条件下对β-葡萄糖苷酶活力的影响。[结果]β-葡萄糖苷酶高产菌株的最佳产酶工艺条件为:麸皮2%,蛋白胨0.1%,KH2PO40.1%,初始pH值6.0。测得酶活力为152.20 U/mg。β-葡萄糖苷酶酶学性质的测定结果表明,反应液浓度为0.1 mol/L醋酸缓冲液时酶活力最高,最佳反应温度为55℃,pH为5.0。[结论]不同碳源对产酶有较大影响,麸皮做碳源时产酶最高。     

赭绿青霉 Sp1菌株木聚糖酶最佳产酶条件及部分酶学特性研究

[目的]从土壤中分离筛选获得了一株具有高产木聚糖酶能力的真菌Sp1.[方法]经过28S rDNA测序鉴定为赭绿青霉(Penicillium ochro-chloron ).通过对摇瓶发酵条件优化试验及酶特性研究.[结果]该菌株的最适产酶条件为:2;(W/V)粗制木聚糖+0.5;葡萄糖为碳源,0.44; KNO3+0.06;蛋白胨为氮源,发酵起始pH为5.0,150 mL三角瓶装液量为40 mL,转速为220 r/min,28 ℃下培养72 h木聚糖酶酶活可达387 U/mL.将菌株Sp1发酵所得粗酶液经过纯化后研究其酶学特性,酶最适反应pH为4.0,最适反应温度为55 ℃,在40 ℃,pH 2.2～6.0,酶活性稳定.终浓度为0.01 mol/L的Na+ 、K+ 和Zn2+ 对酶活有促进作用.[结论]所筛选的Sp1菌株具有较好的应用前景.     

渝西地区3种种草模式下牧草生物产量和粗蛋白产量的比较

[目的]筛选出适合渝西地区的最佳种草模式。[方法]测定皇竹草、甜高粱、扁穗牛鞭草的株高、干物质含量、粗蛋白含量、鲜草产量、干草产量、粗蛋白产量,并计算不同种植面积比例下各组合的鲜草产量、干草产量、干鲜比和粗蛋白产量。[结果]当3种牧草种植面积比例为3∶1∶1时,牧草鲜草总产量、干草总产量和粗蛋白产量较高,分别达到100 302.642、20 366.092和1 677.739 kg/hm2。[结论]当皇竹草∶甜高粱∶扁穗牛鞭草种植面积比例为3∶1∶1时,能获得较高的牧草总产量和粗蛋白产量。由此提出了"31110"草畜配套模式。     

红掌切花的瓶插保鲜液研究（摘要）（英文）

[目的]研究红掌切花的瓶插保鲜液,为红掌种植及筛选保鲜方法提供参考。[方法]以红掌（Anthurium seherzerianum）中的常用切花品种‘热情’为试验材料,采用3种不同的瓶插液配方,处理①：2%二甲基琥珀酰肼＋1%8-羟基喹啉硫酸盐（HQS） ＋0.1%Ca（NO3）2＋5%蔗糖;处理②：5%蔗糖＋0.1 g/L明矾＋10 mg/L6-BA;处理③：4%蔗糖＋0.08% NaCl＋0.01%过磷酸钙＋0.01%中药杀菌剂（黄连的乙醇提取液） ＋0.1 mmol/LNaOH＋0.1 mmol/L柠檬酸＋10 mg/L6-BA。并与常用红掌保鲜配方（4%蔗糖＋50 mg/LAgNO3＋0.05 g/LNaPO4）进行对比,筛选最佳的红掌瓶插保鲜液。[结果]试验中处理①的配方比较简单,不能很好地杀菌,处理②虽然含有一定的碳源和营养,也有杀菌剂,但组成较简单,仍不能很好地满足红掌切花采后各方面生理的需要,以配方③为最佳的瓶插保鲜液,保鲜期为23 d,比对照延长了13 d,观赏期达31 d,比对照延长了18 d,效果显著;且配方③明显地减少了红掌佛焰苞的水分丧失,有利于维持组织的含水量,降低细胞膜透性,抑制膜脂的过氧化作用,减少丙二醛含量的积累,提高了SOD的活性,提高了细胞保护酶的活性,增加了脯氨酸和可溶性糖的含量,降低了呼吸速率。[结论]4%蔗糖＋0.08% NaCl ＋0.01%过磷酸钙＋0.01%中药杀菌剂（黄连的乙醇提取液） ＋0.1 mmol/L NaOH＋0.1 mmol/L柠檬酸＋10mg/L6-BA配方达到了延长红掌佛焰苞保鲜期的目的。