东湖水库的水化学

在2005年4月-2005年12月对东湖水库的理化因子进行了研究 ,结果如下:春,夏,秋,冬四季ALK分别为2.24mmol/L,2.15mmol/L,2.08mmol/L,2.29mmol/L.TH分别为2.19mmol/L,2.04mmol/L, 2.04mmol/L,2.25mmol/L.COD分别为23.23mg/L , 24.92mg/L, 24.92mg/L,15.50mg/L.NH4+-N分别为0.334mg/L,0.26mg/L,0.64mg/L,0.29mg/L.NO3--N分别为0.165mg/L,0.32mg/L,0.27mg/L,0.22mg/L,NO2--N分别0.070mg/L,0.03mg/L,0.051mg/L,0.08mg/L. ∑N分别为7.26mg/L,12.04mg/L,12.89mg/L,7.00mg/L.∑P分别为0.07mg/L,0.19mg/L,0.30mg/L,0.025mg/L.N:P(总质量比)分别为 134.75,63.25,43.25,284.     

紫晶蜡蘑的营养优化及生长模型

选出紫晶蜡蘑菌株(Laccaria amethystea-0704;简称L.a.-0704)适宜培养基,在L.a.-0704碳源及氮源营养选择的基础上,采用通用旋转回归设计进行培养基配方优化。得到L.a.-0704菌丝体培养的最佳配方为麦芽浸粉4.1 g/L,尿素1 g/L,蔗糖4.3 g/L,酵母浸膏3.5 g/L,CaCl20.05 g/L,(NH4)2HPO40.25 g/L,NaCl 0.025 g/L,MgSO4.7H2O 0.15 g/L,KH2PO40.5 g/L,FeCl3(w=1%)2 mL/L,VB1100μg/L,水1 000 mL,琼脂粉12 g/L。L.a.-0704营养利用范围广,不仅能利用单糖、低聚糖和无机氮等速效碳、氮源,而且能利用多糖、多元醇和有机氮等长效碳、氮源,L.a.菌丝生长符合Loginstic模型,其菌丝生长最适碳、氮源分别为麦芽浸粉和尿素。     

纹瓣兰无菌播种快繁技术研究

以纹瓣兰[Cymbidium aloifolium (L. ) Sw]的种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株的途径进行繁殖.结果表明:种子在MS+6-BA 0. 2 mg/L+AC 1.0 g/L+蔗糖30 g/L培养基培养30 d左右,可形成原球茎;原球茎在1/2MS+6-BA 4 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L的培养基上增殖效果最好;原球茎接种于1/2MS+6-BA 0.1 mg/L +NAA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L培养基上培养4周后,再转入1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AC 2.0 g/L+香蕉泥80 g/L的培养基上培养30 d,可诱导形成完整的植株.     

兴化龙香芋脱毒快繁组培技术体系的建立与优化

以兴化龙香芋茎尖为材料,通过设计L9(33)正交试验,以MS+30. 0 g/L蔗糖+6. 0 g/L琼脂为基本培养基,分别加入不同质量浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、萘乙酸(NAA)和活性炭,进行兴化龙香芋脱毒快繁组培技术体系的研究。结果表明,兴化龙香芋愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+0. 5 mg/L TDZ+1. 0 mg/L 2,4-D+0. 1 mg/L 6-BA+30. 0 g/L蔗糖,不定芽的最佳诱导培养基为MS+0. 5 mg/L TDZ+1. 0 mg/L 2,4-D+0. 1 mg/L 6-BA+30. 0 g/L蔗糖,不定芽增殖的最佳培养基为MS+1. 0 mg/L TDZ+1. 0 mg/L 2,4-D+0. 2 mg/L 6-BA+30. 0 g/L蔗糖,组培苗生根的最佳培养基为1/2 MS+0. 5 mg/L NAA+0. 1 mg/L 6-BA+0. 2 mg/L活性炭+30 g/L蔗糖。     

素花虎头兰×黄蝉兰F_1代原球茎再生体系的建立

以素花虎头兰×黄蝉兰F_1代的原球茎、茎尖和叶片基部为材料,在无菌条件下研究不同激素配比对原球茎受体系统建立的影响。结果发现,以原球茎为材料诱导增殖原球茎的效果明显优于以茎尖和叶片基部为材料诱导增殖原球茎的效果,最佳培养基为1/2MS+1. 0 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L NAA+1. 5 g/L花宝1号+0. 5 g/L炭粉+80 g/L香蕉泥,增殖倍数为4. 5倍,最佳分化培养基为1/2MS+2. 0 mg/L 6-BA+0. 1 mg/L NAA+0. 1 mg/L KT+1. 5 g/L花宝1号+0. 5 g/L炭粉+80 g/L香蕉泥,分化率为38. 80%,且原球茎浓绿色和长势健壮;最佳生根培养基为1/2MS+0. 3 mg/L 6-BA+1. 5 mg/L NAA+1. 5 g/L花宝1号+0. 5 g/L炭粉+80 g/L香蕉泥,生根率达到100%,平均株根数为4. 69条,平均根长为7. 31 cm,植株长势健壮,叶片浓绿。     

三角紫叶酢浆草离体培养植株的再生研究

以三角紫叶酢浆草的叶片、叶柄为外植体进行了组织培养试验研究。结果表明 :MS +BA 1.0mg/L +KT 0 .5mg/L +NAA 0 .5mg/L+IBA 0 .0 5mg/L为诱导叶片不定芽分化的最佳培养基配方 ;MS +KT 1.0mg/L +NAA 0 .5mg/L +IBA 0 .5mg/L为诱导叶柄不定芽分化的最佳培养基配方 ;MS + 6 BA 1.5mg/L +NAA 0 .2mg/L有利于试管苗的增殖 ,在 1/2MS +NAA 0 .2mg/L的培养基中生根效果最好。     

桔梗外植体的离体培养和植株再生

对桔梗的茎尖、茎段、叶片进行离体培养和植株再生试验研究 ,结果表明 :诱导茎尖、茎段和叶片分化的最佳培养基分别为MS +6 BA 0 .8mg/L +NAA0 .2mg/L、MS +6 BA3 .0mg/L +NAA0 .1mg/L和MS +6 BA0 .1mg/L +NAA0 .0 5mg/L ,生根成苗的最佳培养基为 1/ 2MS +NAA0 .2mg/L     

响应面法优化突变株L.plantarumP1881的发酵培养基

通过Box-Behnken试验设计方法,对产苯乳酸突变菌株Lactobacillus plantarumP1881的发酵培养基进行优化.优化后的发酵培养基组成为:葡萄糖25 g/L,酵母浸粉35 g/L,K2HP04 2.2 g/L,MgS04 1 g/L,MnS04 0.3g/L,吐温-80 3 ml/L.此时苯乳酸产量为0.588g/L.     

锑胁迫下不同改良剂对水稻种子萌发的影响

通过种子萌发试验,探究了锑(Sb)胁迫下不同浓度硅酸钠(1 mmol/L、2 mmol/L、4 mmol/L)和氯化钙(5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L)对水稻种子萌发的影响.结果表明:在Sb(5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L)胁迫下,水稻种子发芽势、发芽率、活力指数及根、芽干质量均受到抑制.2 mmol/L硅酸钠单独处理使水稻种子发芽势、发芽率、活力指数、根、芽长及根、芽干质量均显著高于空白对照.氯化钙单独处理时,水稻种子发芽势、发芽率、活力指数随着氯化钙浓度的增加逐渐降低,20 mmol/L氯化钙单独处理对水稻种子发芽势、发芽率、活力指数、根长及根、芽干质量均产生显著抑制作用.Sb质量浓度为5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L时,1 mmol/L硅酸钠使水稻种子发芽势、发芽率、活力指数、根、芽长及根、芽干质量显著增加.添加5 mmol/L氯化钙能显著减轻Sb对水稻种子发芽势、发芽率、活力指数及根、芽干质量的抑制,20 mmol/L氯化钙对水稻种子发芽势、发芽率和活力指数及根、芽干质量的影响随Sb质量浓度增加呈先增后减的趋势,且并未缓解5 mg/L Sb对水稻种子萌发的毒害作用.因此,Sb胁迫对水稻种子萌发产生严重抑制.Sb胁迫下,添加1 mmol/L硅酸钠和5 mmol/L氯化钙可显著增加水稻种子发芽势、发芽率、活力指数及根、芽干质量,有效缓解Sb对水稻的毒害作用.     

淡水鱼肺炎克雷伯氏菌的药物敏感性研究

采用体外抑菌试验,研究了五倍子等8味单方中药和单方组合而成的12味复方中药以及16种西药对肺炎克雷伯氏菌的药物敏感性.结果表明：该菌对五倍子、鱼腥草、黄芩、金银花较为敏感,其抑菌圈直径分别为2.12 cm、1.68 cm、1.62 cm、1.51 cm.以五倍子组合的复方中药抑菌圈直径达2.97 cm.对SMZ.TMZ合剂（100 mg/L）、氧氟沙星（200 mg/L）、盐酸环丙沙星（50 mg/L）抑菌圈直径分别为2.2 cm、3.6 cm、2.2 cm.SMZ.TMZ合剂（100 mg/L）的最小抑菌浓度（MIC）为25 mg/L,最小杀菌浓度（MBC）为1 600 mg/L;氧氟沙星（200 mg/L）MIC为50 mg/L,MBC为100 mg/L;盐酸环丙沙星（50 mg/L）MIC为25 mg/L,MBC为200 mg/L.     

西瓜SRAP-PCR程序和体系优化

建立适宜西瓜DNA的SRAP-PCR扩增体系,为西瓜基因图谱的构建和分子标记打下基础。以西瓜中华拳王品种为试验材料,探索了西瓜SRAP-PCR反应程序,并对西瓜SRAP-PCR反应体系的各影响因子进行梯度实验,筛选和建立可扩增多态性高、重复性好、带型清晰的最佳SRAP-PCR反应程序和体系。最佳SRAP-PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1min,共5个循环;94℃变性1 min,50℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸5 min;4℃保存。最佳SRAP-PCR反应体系(15μl)为:DNA 100 ng,dNTPs 0.3 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,primer 7.5 pmol/L,Taq polymerase 0.75 U。该程序和体系能很好地满足西瓜基因组SRAP扩增的要求,SRAP标记应用于西瓜遗传研究是可行的。     

Establishment and Optimization of SRAP Amplification System in Lonicara caerulea L.

A single factor design was applied to optimize five factors influencing SRAP system, including Taq DNA polymerase, template DNA concentration, dNTPs, primer and Mg2＋, each at four levels. The optimal SRAP-PCR system for Lonicera caerulea L. was 20 ktL SRAP-PCR amplification reaction solution containing 2.0 μL 10×PCR buffer, 1.0 U Taq DNA polymerase, 30 ng template DNA, 0.2 mmol·L-1 dNTPs, 2.0 mmol·L-1 Mg2＋ and 0.2μmol·L-1 primer. The suitable amplification procedure consisted of an initial denaturation at 94℃ for 5 min; denaturation at 94℃ for 1 min, annealing at 35℃ for 1 rain, extension at 72℃ for 90 s and in total five cycles; denaturation at 94℃ for 1 min, annealing at 50℃ for 1 min, extension at 72℃ for 90 s and in total 35 cycles; extension at 72℃ for 8 rain; preservation at 4℃. The procedures and systems could meet the demand for SRAP amplification of Lonicera caerulea L. and would play an important role in Lonicera caerulea L. germplasm identification and genetic diversity analysis.     

人参SRAP-PCR体系优化条件的建立

[目的]研究人参基因组SRAP-PCR的扩增条件,建立其优化扩增体系。[方法]采用单因子实验方法探讨模板DNA、引物浓度、dNTPs浓度、Mg^2＋浓度等因素对PCR结果的影响。[结果]优化后的扩增程序为：94℃预变性2 min;94℃变性30 s,48℃复性30 s,72℃延伸1 min,共40次循环;72℃延伸7 min。最佳反应体系为：DNA模板30 ng,上下游引物浓度2.0μmol/L,dNTPs浓度0.3 mmol/L,Mg^2＋2.5 mmol/L,总体积25μl。[结论]建立了满足人参SRAP-PCR的优化扩增体系,为人参亲缘关系和遗传多样性SRAP分析提供快速、简便、重复性好的实验方法。     

南瓜SRAP反应体系的建立与优化

以‘密本’南瓜作为筛选体系的材料,通过单因素试验对南瓜20μL SRAP-PCR扩增体系的Mg^2＋、dNTP、 Taq酶、引物及DNA浓度和扩增程序的退火温度与循环次数进行优化,筛选出各组分的最佳浓度、最佳的退火温度和最佳循环次数。试验结果确立南瓜最佳的20μL SRAP体系为：0.2 mmol · L ^-1 dNTP ,1.5 U Taq酶,80 ng DNA ,0.16μmol·L^ -1的单条引物,Mg^2＋1.5 mmol·L^ -1,2μL 10＆#215;Buffer ;最佳扩增程序为：94℃预变性5min;94℃1 min ,35℃1 min ,72℃1 min ,5个循环;94℃1 min ,52℃1 min ,72℃1 min 35个循环;最后72℃延伸10 min。选用17个南瓜品种对确立扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富、特异性强、重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于南瓜的SRAP分子标记。     

玉米SRAP反应体系的建立与优化

SRAP标记(Sequence-related Amplified Polymorphism,序列相关扩增多态性)是一种新的分子标记技术,具有简便、稳定、中等产率、在基因组中分布均匀的特点,是开展遗传图谱构建、基因定位与克隆、比较基因组学c、DNA指纹图谱、生物多样性、预测杂种优势等研究的一个很实用的工具。对玉米SRAP反应体系的程序、模板、Mg2+等参数进行优化研究,结果表明玉米的PCR程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸1 min,35个循环,最后72℃延伸10min;25μl反应体系中,模板量为20 ng,Mg2+浓度为2.0 mmo1/L。该研究建立的玉米SRAP体系重复性好,稳定性强。     

人参SRAP-PCR体系优化条件的建立（摘要）

[目的]研究人参基因组SRAP-PCR的扩增条件,建立其优化扩增体系。[方法]采用单因子实验方法探讨模板DNA、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2＋浓度等因素对PCR结果的影响。[结果]优化后的扩增程序为：94℃预变性2min;94℃变性30s,48℃复性30s,72℃延伸1min,共40次循环;72℃延伸7min。最佳反应体系为：DNA模板30ng,上下游引物浓度2.0μmol/L,dNTP浓度0.3mmol/L,Mg^2＋2.5mmol/L,总体积25μl。[结论]建立了满足人参SRAP-PCR的优化扩增体系,为人参亲缘关系和遗传多样性SRAP分析提供快速、简便、重复性好的实验方法。     

利用正交设计优化桃SRAP-PCR反应体系

以桃基因组DNA为模板,通过正交试验设计,从Mg2+、Taq酶、dNTP、引物、模板5种因素4个水平对桃SRAP反应体系进行优化,建立了适合于桃的SRAP-PCR优化反应体系,该25μL反应体系:模板DNA50 ng,MgCl22.5 mmol/L,dNTP200μmol/L,上下引物各0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U,以灭菌双蒸水补齐至25μL。PCR反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸1 min,35个循环,72℃延伸10 min。     

基于毛细管电泳技术的牡丹SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

以牡丹叶片DNA为模板,对SRAP-PCR反应程序进行研究,确定适合的反应程序,即94℃预变性5 min;94℃变性1 min,33℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环;随后94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环;最后72℃延伸10 min。基于毛细管电泳技术,采用正交设计L18(37)对牡丹SRAP-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)3个水平进行了优化,构建了牡丹SRAP最佳反应体系:模板DNA 50 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Mg2+浓度2.5 mmol/L,引物浓度0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5 U,总体积为25μL。各因素对扩增结果影响程度均不同:dNTPs>引物>DNA模板>Mg2+>Taq酶。运用该体系从756个SRAP引物组合中筛选出多态性好、条带清晰的26个引物组合,并证明了该体系稳定可靠。该体系的建立以及引物组合的确定为今后利用SRAP分子技术进行牡丹的相关研究奠定了科学基础。     

山核桃SRAP体系的建立及与RAPD和ISSR标记的比较

以山核桃Carya cathayensis基因组DNA为模板,对聚合酶链式反应（PCR）体系各组分进行了梯度实验,优化出条带清晰、重复性好的相关序列扩增多态性聚合酶链式反应（SRAP-PCR）扩增体系,并筛选了引物。该体系（25.00 μL）为：1 × 缓冲液0.20 mmol·L^－1,脱氧核糖核苷酸（dNTPs）,0.20 μmol·L^－1 引物,2.00 mmol·L^－1镁离子（Mg²⁺）,33.34 nkat Taq DNA 聚合酶,0.80 mg·L^－1基因组DNA（以上均为终浓度）。反应条件为94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s,35 ℃退火30 s,72 ℃延伸2 min,5个循环;94 ℃变性30 s,50 ℃退火30 s,72 ℃延伸2 min,30个循环;72 ℃延伸8 min,4 ℃保存,反应时间比其他体系缩短了一半。从100对引物中筛选出了适用于山核桃的引物15对。在山核桃中,随机扩增多态性DNA（RAPD）,简单序列重复区间（ISSR）,SRAP等3种标记,以SRAP标记每对引物扩增的位点数及每对引物扩增的多态性位点数为多,但SRAP多态性引物的比例、多态性位点比例居于另2种标记之间。在山核桃研究中可以考虑使用SRAP及RAPD标记。图6表4参28     

玉米大斑病菌RAPD分析最佳反应体系的建立

通过对玉米大斑病菌RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立了一套适合玉米大斑病菌的扩增反应体系及反应程序:25μL体系中,加入Taq DNA聚合酶2 0 U、25 mmol L的MgCl2 2 0 mmol L、dNTP 200μmol L、随机引物30 ng、10×PCR buffer 1μL、DNA模板30 ng、用重蒸水补足25μL。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性1 min, 37℃退火1 min,72℃延伸2 min,40循环; 72℃延伸6 min。