禽用乳酸菌的筛选与功能鉴定

【目的】从健康鸡肠道中分离筛选优质乳酸菌,为制备禽用微生态制剂提供技术支持。【方法】选用30日龄健康青年鸡,取其盲肠内容物,通过选择性培养基筛选出具有产酸能力的乳酸菌,对其进行耐pH 3.0胃酸和3g/L牛胆盐筛选试验及菌株生长曲线、产酸能力测定,并通过平板抑菌试验筛选出具有较强抑菌效果的菌株。最后对此菌株16SrRNA进行克隆测序,经Blast比对和系统进化树分析,对菌株进行鉴定。【结果】从所取鸡盲肠内容物中分离得到L1~L9 9株乳酸菌,其中L2、L4和L9株耐pH 3.0和3g/L牛胆盐的综合能力较强。经过比较3株菌的生长曲线和产酸曲线,发现L2菌株耐酸耐牛胆盐、生长迅速、产酸能力强,且具有较强的抑制致病性大肠埃希菌的活性。经16SrRNA序列比对和系统进化树鉴定,确定L2为唾液乳酸杆菌。【结论】成功筛选出了1株可用以研制禽用微生态制剂的乳酸菌菌株。     

凡纳滨对虾肠道益生菌的分离· 筛选· 鉴定

[目的]获得具有拮抗常见病原菌活性、消化酶活性且具有安全性的凡纳滨对虾肠道内源性益生菌。[方法]从健康凡纳滨对虾肠道中经过初步分离与纯化得到1 220株细菌,对分离的菌株进行拮抗试验,并对产蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶能力进行定量和定性研究。对筛选的13株细菌进行了溶血试验和药敏试验,以评价其生物安全性。[结果]共筛选出13株抑菌活性强、产酶能力强且产酶种类多的菌株,最终确定了2株候选益生菌。菌株的16 S rDNA分子鉴定及Biolog系统鉴定结果表明,细菌3号与霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei strain WW2,JN993998.1)相似性达到98%,细菌6号与乳酸菌(Lactic acid bacterium ZJGS0109,KC748440.1)相似性达100%。[结论]研究结果为今后益生菌制剂的开发和应用奠定了基础。     

产苯乳酸乳酸菌的筛选及鉴定

[目的]研究产苯乳酸乳酸菌的筛选与鉴定。[方法]用双层培养基法从传统发酵制品中分离出115株乳酸菌,用双层平板法从中筛选出24株对啤酒酵母具有明显抑菌效果的菌株,然后通过高效液相色谱分析筛选产苯乳酸量最高的菌株,并对筛选的菌株进行形态学观察、生理生化鉴定以及菌株16S rDNA序列的测定与分析。[结果]对初筛的24株菌株发酵液进行高效液相色谱分析得到7株苯乳酸的产量〉60 mg/L的菌株,其中菌株P421乳酸菌显示出最高的苯乳酸生产能力,苯乳酸产量可达80.5 mg/L。根据菌株P421的形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。[结论]从传统发酵制品中分离筛选得到1株产苯乳酸的菌株,建立了1种准确筛选苯乳酸生产菌的方法。     

一株产细菌素乳酸菌的筛选及细菌素特性研究

[目的]研究从酸马奶酒中筛选出的1株产细菌素的乳酸菌的细菌素特性.[方法]从内蒙古地区酸马奶酒中分离到19株乳酸菌,采用牛津杯双层平板扩散法,排除有机酸、过氧化氢的干扰后,经蛋白酶敏感性试验,筛选出1株产细菌素的乳酸菌菌株XMD6.[结果]通过形态学特征、生理生化试验及16S rRNA基因序列分析,鉴定为坚强肠球菌(E.durans).其所产细菌素在80℃对热稳定,显示抑菌活性pH范围为2～7.抑菌谱试验表明,该菌能抑制食品中常见的革兰氏阳性、革兰氏阴性的致病菌及腐败菌,具有较广的抑菌谱.[结论]研究可为今后开发利用新型细菌素防腐剂提供理论依据.     

鸡源乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性分析

从健康鸡肠道中自行分离筛选出9株乳酸菌株为试验菌株,通过考察菌种的生长速度、耐酸、耐胆碱、耐肠胃液,并以抑菌性能作为主要指标。通过产酸能力测定、耐酸能力测定、耐受肠胃极端环境性能测定得到2株乳酸菌,2株乳酸菌上清液经牛津杯双层平板法对金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、无乳链球菌等5株指示菌株进行抑菌试验,发现2株乳酸菌对5株指示菌株都具有非常明显的抑菌作用。采用16s rDNA分子标记对乳酸菌进行鉴定,并构建系统发育树。经分子生物学鉴定,L2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、L4为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。     

鱼源乳酸菌的抑菌特性研究

采用体外试验研究了3株从斜带石斑鱼仔鱼体内分离的乳酸菌其产酸能力及抑菌特性.结果表明:菌株EA-1和Y1B-3产乳酸的速度和pH值下降速度较快,培养后期乳酸含量显著高于Y4-2(P<0.05).3株乳酸菌对致病性哈维氏弧菌和溶藻弧菌均有不同程度的抑制作用,但乳酸对三株乳酸菌的抑菌活性没有影响,提示3株乳酸菌均能产生乳酸以外的抑菌物质.三株乳酸菌的抑菌物质具有一定的热稳定性,经60℃和80℃热处理后保留70%以上的抑菌活性,但经100℃高温处理失去抑菌活性.3株乳酸菌产生的抑菌物质对胰蛋白酶敏感,在偏中性条件下抑菌活性较高.     

鱼源乳酸菌的抑菌特性研究

采用体外试验研究了3株从斜带石斑鱼仔鱼体内分离的乳酸菌其产酸能力及抑菌特性.结果表明:菌株EA-1和Y1B-3产乳酸的速度和pH值下降速度较快,培养后期乳酸含量显著高于Y4-2(P<0.05).3株乳酸菌对致病性哈维氏弧菌和溶藻弧菌均有不同程度的抑制作用,但乳酸对三株乳酸菌的抑菌活性没有影响,提示3株乳酸菌均能产生乳酸以外的抑菌物质.三株乳酸菌的抑菌物质具有一定的热稳定性,经60℃和80℃热处理后保留70%以上的抑菌活性,但经100℃高温处理失去抑菌活性.3株乳酸菌产生的抑菌物质对胰蛋白酶敏感,在偏中性条件下抑菌活性较高.     

鸡源益生菌对肠道病原菌的体外拮抗作用

为探究鸡源益生菌对鸡肠道病原菌的影响,从健康的土鸡肠道内分离并鉴定出6株乳酸菌(Lactobacillus plantarum)和1株丁酸梭菌(Clostridium butyricum)。以从腹泻病鸡肠道内分离并鉴定的3株病原菌——大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella enterica)和志贺氏菌(Shigella sonnei)为指示菌,采用平板抑菌法挑选出1株抑菌活性强的乳酸菌;将这株乳酸菌和丁酸梭菌用比浊法测定48 h内的生长曲线和pH值变化曲线;采用体外模拟肠道的方式,将2株益生菌分别与3株致病菌做体外拮抗试验。结果显示,乳酸菌R5和R6的抑菌能力最强,选取R5与丁酸梭菌D2研究其体外对致病菌的拮抗性能。体外拮抗研究表明,在72 h内乳酸菌R5可将病原菌完全杀灭,而丁酸梭菌对3种致病菌也均有显著抑菌作用。发现乳酸菌和丁酸梭菌在体外拮抗作用中均有显著的抑菌作用,而乳酸菌R5的抑菌效果更好。本研究结果可为益生菌的应用提供理论依据。     

凝结芽孢杆菌的筛选、鉴定及抑菌特性的初步研究

从断奶仔猪肠道、菜园土壤、泡菜等不同来源样品中分离获得乳酸菌,结合形态特征、生理生化指标、16S rRNA分子鉴定等方法,对其进行菌种鉴定和抑菌活性初步分析。结果表明,上述不同来源样品中共分离得到乳酸菌35株,经产酸试验和耐酸、耐胆盐试验的初步筛选后,确定1株优良乳酸菌株BFS-2。抑菌试验表明,菌株BFS-2对芽孢杆菌的抑制效果较差,对大肠杆菌等肠道条件致病菌的有较好的抑制效果,经生理生化试验和分子鉴定,菌株BFS-2为凝结芽孢杆菌。     

猪源生物被膜乳酸菌的筛选、鉴定与体外益生特性评价

将分离自健康猪新鲜粪便的乳酸菌进行功能性和安全性评价,旨在筛选出有利于猪健康生长的优良乳酸菌菌株。结果显示,共分离到2株对猪源大肠杆菌等病原菌具有抑制作用的乳酸菌菌株,并从中成功筛选出1株生物被膜形成能力较强的分离菌株L-8。经鉴定,分离菌株L-8为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),具有一定的产酸能力,能够耐受胃内pH值4.0～10.0和肠道1%胰蛋白酶环境,对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)具有一定的黏附性,其生存能力和生长性能均较好。此外,分离菌株L-8对小鼠无致病性,具有安全性。综上,分离菌株L-8具有作为猪用益生菌的潜在益生特性和开发前景。     

产细菌素乳酸菌的筛选

[目的]开发出更加高效、抑菌谱更广、可做天然防腐剂的细菌素。[方法]以泡菜、酸奶为原料,利用MRS选择培养基从试材中筛选出能够抑制指示菌的细菌,通过排除酸抑制作用、过氧化氢抑制作用和蛋白酶敏感性试验证明该菌株是否产生有抑菌作用的细菌素。[结果]筛选得到的菌株经鉴定证明是乳酸菌,其产生的细菌素对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都有抑制作用,是一株产广谱细菌素的乳酸菌。[结论]筛选得出的乳酸菌细菌素在抑制各种病原菌和食品腐败等方面具有重要作用。     

乳酸发酵仙人掌果冻工艺研究

研究了乳酸发酵仙人掌果冻的工艺条件。仙人掌热烫取汁后,与还原乳按3∶2混合,乳酸菌接种量为2%,制成发酵仙人掌乳。然后将发酵乳与海藻酸钠、磷酸钙、柠檬酸等制成仙人掌果冻。试验确定的最佳工艺配方为:发酵乳20%,海藻酸钠2.0%,磷酸钙3.0%,柠檬酸0.5%。     

猪饲料用乳酸菌增菌培养基的优化研究

[目的]通过对培养基成分及pH值的研究,得到最佳乳酸菌增菌培养基。[方法]采用pH值梯度培养确定培养基的最适pH值;采用PB试验确定培养基主要影响因子;采用响应面试验对乳酸菌培养基进行优化,得出影响因子间的相互关系,并得到最佳培养基。[结果]适于乳酸菌培养的最适起始pH值为6.8;牛肉膏、葡萄糖和NaAc为乳酸菌增殖的主要影响因子,牛肉膏是最重要的影响因子;优化后的最佳培养基:牛肉膏23.70 g/L、葡萄糖47.53 g/L、NaAc4.87 g/L、蛋白胨10.0 g/L、酵母膏10.0 g/L、柠檬酸二胺2.0 g/L、Mn-SO4 0.2 g/L、吐温80 0.5 g/L。[结论]优化后的乳酸菌增菌培养基使活菌密度显著提高,达到制备乳酸菌菌剂需求。     

蓝莓乳酸益生菌饮料的研制

以蓝莓鲜果为原料,通过软化酶解过滤,接种乳酸菌—保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌进行发酵,采用正交设计试验,筛选出用果胶酶酶解蓝莓果汁的最佳条件是:果胶酶添加量为2%,酶解的温度为45℃,酶解的时间为1 h;蓝莓乳酸益生菌果汁发酵饮料的最佳条件是:蓝莓果汁的糖度为20%,PH值为4.0,接种量为5%,发酵温度为43℃,发酵时间48 h。     

香橙乳酸菌饮料的研制

实验对香橙乳酸菌饮料的最佳工艺配方进行了研究。在发酵乳30%的条件下,以鲜橙汁、白砂糖、柠檬酸、稳定剂(稳定剂是由海藻酸钠、单甘脂、蔗糖酯组成的B-1型乳化稳定剂)为因素,以果汁添加量10%、20%、30%,白砂糖添加量6%、8%、10%,柠檬酸添加量0.05%、0.10%、0.15%,稳定剂添加量0.03%、0.04%、0.05%为水平,采用四因素三水平的正交试验设计,筛选最佳配方。结果表明:最佳配方为鲜橙汁20%,白砂糖8%、柠檬酸0.05%,稳定剂0.04%。     

产淀粉酶乳酸菌及其产酸特性的研究进展

乳酸是一种重要的生物基原料,由于成本的限制,采用淀粉质原料一步法发酵生产乳酸成为乳酸发展的重要方向。本文从产淀粉酶乳酸菌的筛选,底物,产生的淀粉酶,液、固态发酵等多方面对这一领域进行了概述。     

产胞外多糖乳酸菌的选育

为了筛选高产胞外多糖的乳酸菌,从酸奶、奶酪中通过富集和分离得到7株乳酸菌,以菌落拉丝实验为初筛指标和苯酚-硫酸法测胞外多糖产量的复筛方法得到1株高产胞外多糖乳酸菌的优良菌株YL2。并且对YL2菌株进行培养特征、个体形态特征和生理生化鉴定试验,初步确定YL2为乳杆菌属(Lactobacillus),其胞外多糖的产量为430.0mg/L。     

重组基因工程乳酸菌的研究进展

乳酸菌作为人和动物体内的正常菌群,具有诸多益生功能.随着分子生物学研究的不断深入,重组基因工程乳酸菌研究取得了较快进展.在构建表达外源功能性基因的重组基因工程乳酸菌、表达保护性抗原蛋白质用以递呈黏膜免疫抗原的过程中,乳酸菌质粒载体起到了至关重要的作用.电转化技术的应用,简化了操作过程,推动了重组基因工程乳酸菌的研究与应用.     

活性乳酸菌饮料的研究

保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌联合发酵的番茄汁和胡萝卜汁随发酵时间延长，ｐＨ值降低，菌数增加。番茄汁和胡萝卜汁经发酵后核黄素、硫胺素、吡哆醇的含量增加而抗坏血酸的数量却减少了。发酵番茄汁和胡萝卜汁中谷氨酸含量较高，而一些含硫氨基酸的数量较少。本实验确定了适宜的发酵温度和接种量，并给出了蔬菜汁活性乳酸菌饮料的生产工艺流程，证明调制后的活性乳酸菌饮料具有良好的工艺学性状。