不同染色条件对大麦酯酶同工酶显色的影响

用聚丙烯酰胺垂直平板电泳技术研究了不同底物（α－萘醋酸酯和β－萘醋酸脂）、不同偶联剂（固蓝ＲＲ盐和固蓝Ｂ盐）、ｐＨ及温度条件对大麦酯酶同工酶电泳显色的影响。结果为：（１）绝大多数酶带可用α－萘醋酸酯或β－萘醋酸酯显色，极少数酶带只能用α－萘醋酸酯显示，混合底物显色时，酶带数目与α－萘醋酸酯底物显色相同，只是酶带颜色有差异；（２）用固蓝ＲＲ盐作偶联剂染色与用固蓝Ｂ盐相比，多数酶带的相对染色强度提高；（３）ｐＨ６．４比较适合酯酶同工酶染色，且以３７℃１０ｍｉｎ为最佳。表明各电泳酶带染色强度的相对差异并不一定反映各同工酶本身含量、酶活性的相对高低。     

不同染色条件对大麦酯酶同工酶显色的影响

用聚丙烯酰胺垂直平板电泳技术研究了不同底物、不同偶联剂、ｐＨ及温度条件对大麦酯酶同工酶电泳显色的影响。结果为：（１）绝大多数酶带可用α－萘醋酸酯或β－萘醋酸酯显色，极少数酶带只能用α－萘醋酸酯显示，混合底物显色时，酶带数目与α＝萘醋酸酯底物呈色相同，只是酶带颜色有差异；（２）用固蓝ＲＲ盐作偶联剂染色与用固蓝Ｂ盐相比，多数酶带的相对染色强度提高；（３）ｐＨ６４．比较适合酯酶同工酶染色，且以３７℃１０     

大麦β—淀粉酶同工酶的电泳特性研究

大麦成熟籽粒中β-淀粉酶同工酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳中至多能分辨4～5条酶带,而在薄层等电聚焦电泳中,能分辨20～30条酶带.用3种提取液提取的大麦成熟籽粒β-淀粉酶同工酶在薄层等电聚焦电泳中显示不同的酶活性和酶带数.用水提取的游离形β-淀粉酶活性最低,而用0.1 mol/L 巯基乙醇提取的同工酶活性明显提高,酶带加粗,但两者的电泳模式不变.用木瓜蛋白酶溶液提取的同工酶,不仅酶活性提高,而且同工酶的电泳模式也发生了改变,酶带移向碱性端,单体酶之间并发生聚合.3种提取液提取的β-淀粉酶加样于阳极端电泳与加样于阴极端电泳具有不同的酶带活性.用水和巯基乙醇提取的β-淀粉酶,加样于阳极端电泳后,酶活性大大地降低,而用木瓜蛋白酶提取的β-淀粉酶同工酶活性不受影响,这可能是由于木瓜蛋白酶促使小分子β-淀粉酶相互聚合后,酶的稳定性增加之故.     

杂交粳稻“黎优57”及其亲本系同工酶谱分析

利用同工酶谱研究稻种起源、亲缘远近、优势测定、生态型划分等已有很多报道。种、亚种、品种间的同工酶谱一般说来均有明显差异。一个基因、一个酶的观点巳得到广泛的承认。为了给研究杂交粳稻黎优57杂种优势问题、区别杂交种真伪提供科学依据,北京市种子公司与武汉大学遗传研究室协作,于1982年11月对杂交粳稻黎优67的同工酶谱进行了分析。试验方法:将黎优57及其三系和一些常规品种培育成二叶期的幼苗;取叶片研磨、离心沉淀、冰冻保存;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对样品进行电泳,电泳完毕用醋酸α-萘酯与β-萘酯作染色底物,用坚牢兰 B 盐作显色剂     

酯酶同工酶的醋酸萘酯 -铁氰化钾染色法的研究

酯酶可将α-醋酸萘酯和β-醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚,利用萘酚能与铁氰化钾反应生成有色物质萘醌的性质可对电泳凝胶上的酯酶同工酶进行染色.     

油菜花药中酯酶和柱头中角质酶的提纯

油菜授粉时期花粉药和柱头总蛋白质提取液经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,花药中酯酶用α－乙酸蔡酯和β－乙酸萘酯染色,柱头中角度质酶用４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｕｌ ｂｕｔｙｒａｔｅ染色。切下的酶带纯化后,经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,酯酶分子量约为３１ＫＤ,角质酶分子量约为３７ＫＤ。     

酶抑制法测定有机磷农药含量

通过测定乙酸-1-萘酯在酯酶(蚕蛹酶、鸡肝酶和面粉酶)催化下水解生成的乙酸被有机磷农药抑制前后pH值的变化,推算出有机磷农药对酯酶的抑制率,从而检测出有机磷农药的含量.以ΔpH值为指标,经由单因素试验得出最佳酶促反应条件:反应时间30 min、反应温度35 ℃、固蓝B盐1 mL、乙酸-1-萘酯3 mL.结果发现蚕蛹酶活性最高,且农药对酶的抑制具有选择性,混合酶液未出现特异性提高.     

果蔬农药残留快速检测固定化酶片的制作研究

[目的]对胆碱酯酶的保藏性进行研究分析,以期得到保障农药残留检测的最佳酶活力。[方法]试验选定高酶活力的大豆酯酶为酶原,通过筛选最适反应温度、反应时间、离子浓度和最适pH,及最佳的反应显色体系来确定反应最适的条件,采用不同的显色体系酶抑制法,研究酶片的制作方法。[结果]酶片载体材料采用硝酸纤维膜,制作每张酶片取20μL大豆酶液,15μL 0.5%的BSA溶液,2μL 0.05%戊二醛于平底试管中。添加0.03 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液至总体积100μL,4℃固定10 h;制作每张显色片,需在1 cm×1 cm大小的滤纸片上加入50μL显色剂,30μL底物,4℃冷风吹干,封膜真空保存。[结论]固兰B盐和α-乙酸奈酯组合,适合作为酶抑制法检测有机磷农药残留的显色剂,且效果明显。     

菠萝蜜果实糖苷酶和多聚半乳糖醛酸酶的活性变化

【目的】研究菠萝蜜果实成熟软化的机制和干、湿苞菠萝蜜质地差异形成的机理,为菠萝蜜育种提供理论基础。【方法】以不同基因型的干苞和湿苞菠萝蜜为材料,以对硝基苯β-D-吡喃半乳糖苷和对硝基苯α-D-吡喃甘露糖苷为底物测定果实成熟软化过程中β-半乳糖苷酶（β-Gal）、α-甘露糖苷酶（α-Man）,以多聚半乳糖醛酸为底物测定多聚半乳糖醛酸酶（PG）的活性变化。【结果】水溶性和盐溶性的β-半乳糖苷酶活性在两个湿苞菠萝蜜基因型中均表现先上升后下降的趋势,分别在采后2d和采后当天达到最高值,其中,水溶性酶的活性水平分别先上升42.3%、52.8%随后下降22.8%、52.6%,盐溶性酶的活性先上升27.6%、67.7%后下降10.5%、35.4%;水溶性多聚半乳糖醛酸酶活性在两个湿苞菠萝蜜基因型中均表现出直线上升的趋势,酶活性水平增加75.0%、147.3%,而在两个干苞菠萝蜜基因型中则略有增加（增加40.9%）或变化不大;盐溶性的多聚半乳糖醛酸酶和水溶及盐溶性α-甘露糖苷酶在不同基因型的干苞和湿苞菠萝蜜果实中呈现不同的变化趋势。【结论】水溶性和盐溶性β-半乳糖苷酶、水溶性多聚半乳糖醛酸酶在湿苞和干苞菠萝蜜类型间表现出完全不同的变化趋势,而在湿苞或干苞基因型内表现出相同的变化趋势,它们与干湿苞菠萝蜜果实的质地差异形成有关。     

麦麸中植物酯酶的提取及其在有机磷农药残留检测中的初探

本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法,波长确定为533纳米,酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为:酶液保存温度0～5℃;反应温度40℃,保温时间15分钟,pH7.5,酶量30μL,8毫克/毫升固兰B盐0.5毫升,3毫克/毫升底物(α-乙酸蔡酯)200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。     

Staining of skin with dihydroxyacetone

The reaction of skin with dihydroxyacetone to produce a brown "artificial tan" appears to proceed through combination with free amino groups in skin proteins, and particularly by combination of dihydroxyacetone with the free guanido group in arginine.     

用银染方法分析RAPD产物

本文介绍了采用聚丙烯酰胺凝胶分离ＲＡＰＤ产物，以及凝胶银染技术。与传统的溴化乙锭染色法相比，银染法染色灵敏而清晰，具有广泛的推广应用价值。     

Unna氏多色性美蓝染液用于兔脑尼氏体染色

将Unna氏多色性美蓝染液用于兔脑尼氏体染色,摸索出一套合适的兔脑石蜡切片制作及尼氏体染色程序。所染切片尼氏体清晰,核仁明显,胞体轮廓分明,背景色浅,切片经久不褪色。较传统尼氏体染色方法具有易着色、不会过染、价廉易得和操作简便等优点。     

免疫荧光染色质量影响因素分析

免疫荧光技术是标记免疫技术中应用最为广泛的一项技术,具有特异性强、灵敏度高、速度快和便于观察等特点。影响免疫荧光染色质量的因素多种多样,从荧光染料、抗体、样品前处理、染色过程等几个重要的方面入手,就如何提高免疫荧光染色质量,以获得一张高分辨率的图片做了详细的介绍。该研究有利于提高免疫荧光染色质量,为生命科学研究提供了有力帮助。     

标记抗体染色法检查布氏杆菌的研究

为了建立一种快速、简便、敏感、特异地检测动物病理材料中布氏杆菌的方法,选用四种标记抗体法,对5种共15个生物型的布氏杆菌,以及大量与流产有关或常常污染病理材料的对照细菌,分别进行了纯菌、感染实验动物及牦牛组织材料的染色检查,并与柯氏染色法及细菌分离培养法进行了比较。结果表明,四种方法对于各种材料中的布氏杆菌(粗糙型犬布氏菌除外)均呈阳性反应,而绝大多数对照菌均呈阴性反应。其中尤以SPA法染色背景更为清晰,非特异性反应更少。这些方法既简便、快速,检出率也较高。对于布氏杆菌病的诊断和疫情监测,是很有价值的。     

几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法的比较

[目的]对几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法进行比较。[方法]从凝胶背景颜色、染色时间及灵敏度的角度对6种SDS-PAGE凝胶电泳快速染脱色方法进行比较研究,并对适用于椰子和油棕总蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳的实用方法进行总结。[结果]方法 F最快速,条带清晰,染料及试剂都较少,是一种经济、快速、安全、实用的染色方法,整个过程仅需1 h左右。[结论]试验比较了几种SDSPAGE凝胶电泳染色方法,对进一步开展椰子和油棕蛋白质组学研究具有重要意义。     

银染聚丙烯酰胺凝胶电泳技术体系的优化

【目的】针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法。【方法】以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系。【结果】甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果。甲醛浓度过高(1.25%)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.001 25%)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875%~1.375%,染色结果无明显差异。【结论】甲醛用量4 mL(1%)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果。     

中国沙棘染色体的染色和制片技术

以中国沙棘的茎尖为材料,进行不同的取样时间、预处理、固定、解离时间处理后,压片观察染色体。结果表明:早上09:00～10:00取生长旺盛的茎尖组织,用8-羟基喹啉预处理材料1.5～2.5h,卡诺固定液固定2～3h置于60℃恒温水浴酸化15～20min,用改良的卡宝品红染色15min,制出的玻片染色体清楚,效果极佳。     

不同染色剂对SDS-PAGE染色体系的影响

[目的]研究不同染色剂对SDS-PAGE染色体系的影响.[方法]通过SDS-PAGE染色体系中不同考马斯亮蓝染料、染色方法和染色时间的比较,探讨适合油棕和椰子的最佳染色体系.[结果]改进后的方法染色效果好,较好脱色,凝胶背景清晰,容易分析蛋白含量较低的条带.染色时间短（2 h）,条带较少,一些低丰度的蛋白条带未能清晰地显示出来,适当延长染色时间（6h或过夜）效果较好.3种不同染料均能较好地对蛋白质条带染色,R350和R250相比G250效果稍好些,条带着色深,蛋白质含量低的细小条带也能较好的染色.[结论]SDS-PAGE是开展蛋白质组学研究的关键技术,建立简易、稳定的染色方法具有重要意义.