滤纸壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶的研究

[目的]探索滤纸壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶(AChE)的最佳条件。[方法]以滤纸壳聚糖膜为载体,戊二醛为交联剂,牛血清白蛋白(BSA)为保护剂,进行AChE的固定。并对固定化酶的理化性质进行研究。[结果]固定AChE的最佳条件为将50μl 150 U/mlAChE液,50μl 5%(V/V)戊二醛溶液,100μl 1%(W/W)BSA,pH 8.0的0.2 mol/L的PBS缓冲液配制成1 ml酶液,滤纸壳聚糖膜浸于该酶液4℃固定8 h。固定化酶的最适反应温度为37℃,最适pH为8.0,能够重复利用4次以上。[结论]该研究为利用AChE快速检测蔬菜水果中有机磷农药残留提供了理论依据。     

麦麸中植物酯酶的提取及其在有机磷农药残留检测中的初探

本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法,波长确定为533纳米,酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为:酶液保存温度0～5℃;反应温度40℃,保温时间15分钟,pH7.5,酶量30μL,8毫克/毫升固兰B盐0.5毫升,3毫克/毫升底物(α-乙酸蔡酯)200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。     

麦麩中植物酯酶的提取及其在有机磷农药残留检测中的初探

本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法，波长确定为533纳米，酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为：酶液保存温度咿5℃：反应温度40℃，保温时间15分钟，pH7．5．酶量30μL，8毫克／毫升固兰B盐0．5毫升，3毫克／毫升底物（α-乙酸蔡酯）200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。     

酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留

利用酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留,以小麦为对照,比较了大豆、玉米、绿豆等10种植物中植物酯酶活性,优化了植物酯酶提取条件。同时系统地研究了酶促反应条件,建立了酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷农药残留的方法。研究结果表明,以绿豆中提取的粗酶酶活最高,提取条件为:以0.1 mol/L pH值6.2的磷酸缓冲液为提取剂,按固液比1∶5(W/V)加料,在40℃搅拌20 m in,过滤。最佳酶促反应条件为:反应体系0.1 mol/L pH值6.0磷酸缓冲液、反应时间15 m in、反应温度40℃、显色时间10 m in、测定波长520 nm处吸收峰值;样品提取用含10%乙醇的0.1 mol/L pH值6.4的磷酸缓冲液超声波振荡10 m in;方法的回收率为86.7%~97.1%,最小检出限为0.13~0.24μg/m l。     

有机相中测定酶PSL活性研究

[目的]为实现在有机相中用酶抑法分析有机磷农药残留。[方法]以2,6-二氯靛酚钠为底物和显色剂,制作标准曲线,在4ml的丙酮中分析微生物酯酶PSL的催化动力学和催化活性。[结果]标准曲线相关系数R2=0.9806。酶的用量为2.5mg,1IU=75.7mg/（min.μm）;酶活力为0.033IU;比活力为0.0132IU/mg。[结论]建立了有机相中测定酶活性的分析方法,为有机相中酶抑法分析农药残留提供理论依据。     

花生种子脂肪氧化酶的活性测定研究

[目的]为了研究花生种子脂肪氧化酶的适宜测定条件。[方法]采用紫外分光光度法测定花生种子脂肪氧化酶的活性。[结果]结果表明:花生种子脂肪氧化酶最适反应体系为浓度0.10 mol/L pH值5.8的磷酸缓冲液和浓度0.20 mol/L pH值8.0的磷酸缓冲液;最适反应温度为35℃;最适酶液添加量为30μl;最适测定时间为1 min。此外,酶液保存在4℃条件下,脂肪氧化酶的活性随时间的延长而逐渐下降。[结论]该研究为进一步探讨花生种子脂肪氧化酶的生理功能奠定了基础。     

仔猪血清大豆抗原蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】研究并建立大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法。【方法】首先用大豆抗原蛋白对仔猪进行致敏,然后采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度及血清稀释倍数,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白11S、7S抗体的间接ELISA方法,确立待测血清判定标准,并对建立的ELISA方法进行重复性、准确性和敏感性检测。【结果】建立的ELISA方法的最佳反应条件为:11S抗原蛋白最适包被质量浓度为2.0μg/mL,包被作用时间37℃下2h;将10g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间15min。7S抗原蛋白的最适包被质量浓度为2.5μg/mL,包被作用时间37℃下2h;将10g/L BSA作为封闭液,37℃封闭1h;待测血清37℃作用1h;酶标二抗最适稀释度为1∶1 500,37℃作用1h;显色剂最佳显色时间25min。11S和7S抗原蛋白间接ELISA检测方法的批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好,灵敏度较高。【结论】建立了仔猪血清大豆抗原蛋白抗体间接ELISA检测方法,该法具有很强的特异性和敏感性,可用于大豆抗原蛋白11S、7S过敏反应的临床诊断。     

植物酯酶检测有机磷农药残留影响因素的研究

分析了固定方式、pH值、温度、农药浓度和显色剂类型对植物酯酶检测有机磷农药残留的影响,比较了两种固定方式检测农残的灵敏度,结果表明:离子交换法比微乳板法敏感性略高;固化酯酶的最适合pH值约为5.6,游离酯酶的最适合pH值约为4.8;固化酯酶与游离酯酶的最适温度相同,但固化酶活力对温度响应的峰型较游离酶略陡,不同农药对植物酯酶的抑制效果差异较大,其中敌敌畏最灵敏,对硫磷的灵敏度最差,且随着农药稀释浓度的增加,检测灵敏度逐渐下降。实验还发现,液体显色剂在室温40 min后显色能力显著下降,因此固体显色剂更适用于农残的快速检测。     

蔬菜中农药残留的快速检测条件优化

蔬菜中农药残留的快速检测的准确性与试验条件密切相关。试验结果表明，以超声波方式提取，当提取液pH8、酶加入量为50μL、显色剂加入量50μL、底物加入量50μL、样品粒度1～5mm、酶反应时间30min时，试验效果最佳。     

马齿苋ISSR-PCR反应体系与反应条件的优化

[目的]优化马齿苋ISSR-PCR反应体系与反应条件。[方法]以马齿苋为试验材料,采用改良的CTAB法提取总DNA,对ISSRPCR引物进行筛选,同时进行ISSR-PCR反应体系和反应条件的优化,电泳检测ISSR-PCR产物。[结果]8个ISSR引物适合马齿苋的ISSR-PCR分析;最适反应体系为总体系25.0μL,其中2×Taq Platinum PCR Master Mix 12.5μL,10μmol/L引物2.0μL,40 mg/L DNA模板1.0μL,dd H_2O 9.5μL;最适反应条件为94℃预变性360 s;94℃变性60 s,54℃退火60 s,72℃延伸90 s,30次循环;72℃再延伸300 s。[结论]建立了马齿苋ISSR-PCR扩增的最佳反应体系和扩增程序,为进一步研究马齿苋提供基础资料。     

1-MCP·Me-JA及壳聚糖涂膜保鲜菜用大豆效果研究

[目的]研究1-甲基环丙烯（I-MCP）、茉莉酸甲酯（Me-JA）和壳聚糖3种保鲜剂在低温条件下对菜用大豆的保鲜效应。[方法]配制不同浓度的1-甲基环丙烯、茉莉酸甲酯和壳聚糖溶液对菜用大豆荚进行处理,在（1±1）℃条件下,定期测定其主要生理生化指标变化。[结果]1.5%壳聚糖处理的豆荚保水性最好,失重率和腐烂率最小;1μmol/L 1-MCP处理的豆荚叶绿素含量在贮藏期间损失是最小的;10μmol/L Me-JA处理的大豆在VC和蛋白质含量变化方面表现出最佳效果。[结论]菜用大豆保鲜为一项综合性的工作,需要进行更深入研究。     

羟基化酶产生菌Stenorophomonas maltophilia CGMCC1.1788对农药氯噻啉生物转化的条件研究

[目的]探究羟基化酶产生菌Stenorophomonas maltophilia CGMCC 1.1788菌株中羟基化酶的转化活性.[方法]采用摇瓶发酵转化方法对羟基化酶产生菌S.maltophilia CGMCC 1.1788对农药氯噻啉的生物转化条件(不同生长时期的细胞、温度、pH等影响因子)进行了优化.[结果]确立了转化条件:100 ml锥形瓶最佳装液量10 ml,最佳反应温度25℃,最适pH 6.5,最佳反应底物起始浓度0.2 g/L,最佳反应时间48 h.[结论]为较好地发挥该菌的微生物转化功能及了解羟基化酶的生物学特性提供了理论依据.     

新鲜蔬菜中有机磷农药残留快速检测技术的研究

[目的]开发新鲜蔬菜中有机磷农药残留的快速检测技术。[方法]根据有机磷农药抑制胆碱酯酶活性的原理,开发了一种快速检测新鲜蔬菜中有机磷农药残留的技术,由复合指示剂颜色变化和反应液△pH值进行定量,通过单因素试验和正交试验确定最佳反应条件。[结果]复合指示剂的配比为溴百里香酚蓝钠盐∶石蕊指示剂=2∶3。马血清的添加量对△pH值的影响最大,其次为氯化乙酰胆碱浓度,温度的影响最小。最佳反应条件为:马血清0.8 ml,1.0%氯化乙酰胆碱,温度33℃,该条件下,敌敌畏、辛硫磷、敌百虫的最低检出限分别为0.06、1.00、0.50 mg/kg。[结论]该农药残留检测技术方便、快速,在有机磷农药残留的快速测定中有广泛的应用价值。     

比色法测定β-苯丙氨酸含量的研究

[目的]建立快速、准确的β-苯丙氨酸含量定量方法。[方法]依据α-氨基酸与茚三酮显色反应的原理,对比色法定量检测β-苯丙氨酸进行研究,探讨β-苯丙氨酸浓度、pH值、反应温度和时间对显色反应的影响。[结果]当β-苯丙氨酸浓度在480~620μg/ml时,显色反应颜色变化明显且显色较稳定,吸光值控制在0.05~1.00;当pH值在6~10时,显色反应颜色变化明显;当温度为90℃时,加热20 min左右即有明显的颜色变化。α-氨基酸与茚三酮显色反应最适的反应条件为pH值6.0、温度90℃、反应时间25 min。在480~620μg/ml范围内,β-苯丙氨酸含量与吸光值呈良好的线性相关关系。[结论]该方法具有操作简便、快速等特点,适用于一般实验室的样品分析及β-苯丙氨酸转化过程中的产品检测。     

萱草ISSR-PCR最佳反应体系的建立

[目的]为利用ISSR标记研究萱草的遗传多样性和和辅助育种奠定基础。[方法]从萱草中提取基因组DNA,建立萱草的ISSR-PCR反应体系,并通过正交试验对其进行优化。[结果]萱草的最佳ISSR-PCR反应体系为:ddH2O16.8μl、2.5 mmol/LdNTP2.0μl、10×buffer 2.5μl、10μmol/LPrimer0.3μl、50 ng/LDNA3μl、Taq酶1 U,总体积25μl。萱草的最佳ISSR扩增反应程序为:94℃变性5 min,94℃变性45 s、48.3℃退火1 min、72℃延伸2 min,共38个循环,最后72℃延伸7 min。该反应程序下进行的ISSR扩增,扩增产物最多,银染的效果最好。[结论]该研究建立了萱草ISSR-PCR的最佳反应体系和反应程序,通过ISSR扩增可获得清晰、稳定的条带。     

茶薪菇基因组DNA的RAPD反应体系优化

[目的]旨在筛选出茶薪菇RAPD反应体系的最佳条件。[方法]采用单因素试验,对RAPD反应体系所需的Mg2+浓度、模板DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶浓度以及退火温度进行初步筛选。[结果]茶薪菇RAPD扩增的最佳反应体系为:2.5μl Buffer,2.0mmol/L Mg2+,75 ng DNA,0.5μmol/LPrimer,150μmol/LdNTPs,2.0 UTaq酶。反应程序为:92℃预变性5 min,(92℃1 min,35.5℃1 min,72℃延伸2 min)35个循环,72℃10 min。[结论]为茶薪菇RAPD分析及其亲缘关系、遗传多样性研究提供了参考依据。     

建兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化（摘要）（英文）

[目的]研究建兰[Cymbidium ensifolium（Linn.） Sw]总基因组DNA的提取方法,并对建兰ISSR-PCR反应体系进行优化,建立更为完善的反应体系。[方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,用1.0%琼脂糖电泳检测DNA质量;用分光光度计测定其纯度和浓度,DNA纯度以OD260/OD280的比值来估算,浓度估算法为：DNA浓度（ng/μl） =OD260×50×稀释倍数。计算DNA获得率（DNA量/所用叶片量×100%）。对建兰ISSR-PCR反应的4项影响因素（DNA模板、TaqDNA聚合酶、Mg2 ＋和dNTPs）逐个作5水平进行研究,以筛选最优的建兰ISSR-PCR反应体系。[结果]获得高质量的建兰基因组DNA,以及优化了的建兰ISSR-PCR反应体系,即25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.5 mmol/LMgCl2,240 ng模板DNA,160μmol/LdNTPs,1.25 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,双蒸水15.78μl。最佳扩增程序为：94℃预变性5min,然后进行40个循环：94℃变性30 s,50 ～60℃退火（退火温度随引物不同而定） 30 s,72℃延伸50 s,72℃延伸7 min。[结论]建立了建兰ISSR-PCR反应体系最适合的条件,为进一步利用ISSR分子标记技术进行建兰遗传多样性研究提供了基础。     

胞壁质酶的性质研究

[目的]以提取的胞壁质酶为材料,研究胞壁质酶的性质。[方法]通过测定胞壁质酶在595nm处光吸收值的增量,测定该酶活力和蛋白质浓度。通过测定米氏常数Km,研究酶促反应的速度及影响速度的因素。在不同pH值缓冲液中测定胞壁质酶活力,同时测定该酶的最适pH值。酶促反应的速度在酶的最适温度时达到最大。利用SDS-PAGE电泳法,测定胞壁质酶的分子量及纯度。[结果]胞壁质酶在219.00g/L光吸收下降最快,活力最高。Km为0.57。脲对胞壁质酶为抑制作用,其抑制类型为竞争性抑制。胞壁质酶在pH值为8.0时酶活力最高,属于弱碱性,在40℃时酶活力最高,其Kd为13。[结论]该研究可为今后采用生物工程技术对胞壁质酶进行克隆、提取以及制取提供参考。     

高温纤维素分解菌筛选及JSU-5产纤维素酶特性研究

[目的]为产纤维素酶菌株的选育和产酶研究提供参考依据。[方法]从牛粪和麦秸秆堆肥中筛选出高温纤维素分解菌,对其产纤维素酶的条件：碳源、氮源、pH值、NaCl浓度、装液量等进行研究,并用正交试验确定最佳发酵条件。[结果]从筛选出的分解纤维素的11株高温菌种中选出产酶活性较高的JSU-5。其高温产酶条件优化结果表明,当pH值在6左右时,产酶活性最高;培养时间为5 d时,产酶活性最高;以麦草为碳源,产酶活性最高;以黄豆饼粉为氮源,产酶活性最高;较为适合的钠盐浓度为0.2%。培养基组分中影响纤维素酶活性的主要因素为碳源、水分和氮源。[结论]菌株JSU-5产纤维素酶培养基的最佳营养组成为麦草装量50 g/L,黄豆饼粉30 g/L,NaCl2 g/L,装液量60 ml,pH值为6.0,发酵温度为50℃。该条件下所产酶活力为113.4 U/ml。