酯酶同工酶的一种新染色法的初步研究

酯酶可将α -醋酸萘酯和 β -醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚 ,利用KMnO4可与萘酚反应生成有色物质的性质可对酯酶同工酶进行染色。     

酯酶同工酶的醋酸萘酯-铁氰化钾染色法的研究

酯酶可将α-醋酸萘酯和β-醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚，利用萘酚能与铁氰化钾反应生成有色物质萘醌的性质可对电泳凝胶上的酯酶同工酶进行染色。     

大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析

【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE（GenBank登录号：JF970181）全长1 946 bp,编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点（pI）为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族（EC: 3.1.1.-）。将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能。     

酶抑制法测定有机磷农药含量

通过测定乙酸-1-萘酯在酯酶(蚕蛹酶、鸡肝酶和面粉酶)催化下水解生成的乙酸被有机磷农药抑制前后pH值的变化,推算出有机磷农药对酯酶的抑制率,从而检测出有机磷农药的含量.以ΔpH值为指标,经由单因素试验得出最佳酶促反应条件:反应时间30 min、反应温度35 ℃、固蓝B盐1 mL、乙酸-1-萘酯3 mL.结果发现蚕蛹酶活性最高,且农药对酶的抑制具有选择性,混合酶液未出现特异性提高.     

草鱼不同类群淋巴细胞的分离及鉴定

用白细胞分离分质Histoque-1077将草鱼外周血液中淋巴细胞分离后，依据它们对尼龙毛的粘附特性分为粘附性细胞和非粘附性细胞两个类群。分别检测分离前、后的淋巴细胞的细胞表现超微结构、α-醋酸萘酯酶活性及膜表面球蛋白。结果表明：表面粗糙细胞、α-醋酸萘酯酶阳性细胞和膜表面球蛋白阳性（SIg)细胞在外周血液总淋巴细胞中的比例分别为47．8％、15．2％和53．8％，在粘附性淋巴细胞中的比例分别为82．3％、0．1％和76．2％，在非粘附性淋巴细胞中的比例为18．3％、24．2％和25．5％。     

DNA的酯酶催化活性研究

应用萘酯坚固蓝反应显色法对ＤＮＡ的酯酶催化活性进行了研究。结果表明，辣椒ＤＮＡ、鲱鱼精ＤＮＡ具有分解萘酯的活性；反应混合物中鲱鱼精ＤＮＡ浓度为０．００３４ｍｇ／ｍＬ时，ＤＮＡ仍有分解萘酯的活性；随着ＤＮＡ浓度增加，ＤＮＡ的催化活性增强。６种寡聚核苷酸均具有催化萘酯水解的能力，但活性强弱不同；４种ｄＮＴＰ均不能催化萘酯水解。双链ＤＮＡ、单链ＤＮＡ的显色反应完全来自ＤＮＡ的催化萘酯水解反应     

云南烟蚜羧酸酯酶活力测定条件的研究

 比较5种α-乙酸萘酯羧酸酯酶活力测定方法,发现唐振华等（1988）方法较好。进一步以底物浓度、反应温度、温浴时间、pH作因子,采用正交设计的方法来确定α-乙酸萘酯羧酸酯酶活力测定的最佳条件,结果表明,除pH影响不显著外,其余3个因子均影响显著吸光值,其中底物浓度影响极显著。4因子的主次关系为:底物浓度＞反应温度＞温浴时间＞pH。测定云南烟蚜的羧酸酯酶活力时,以底物浓度6.0×10^-4 mol/L,缓冲液pH 8.0,37 ℃保温30 min组合较好。     

不同寄主植物对棉蚜酯酶活性及杀虫剂敏感性的影响

通过分析研究取食5种寄主植物的棉蚜对杀虫剂的抗药性及其α-乙酸萘酯酯酶对杀虫剂不敏感性的频率分布,为棉蚜抗药性的治理提供理论依据。结果表明,取食不同寄主植物的棉蚜对杀虫剂的敏感性存在一定的差异。取食不同寄主植物棉蚜的酯酶活力及杀虫剂对棉蚜酯酶的抑制作用均不相同。其中,棉花棉蚜种群中具有高酯酶活力的个体多于其它4种寄主植物棉蚜,杀虫剂对棉花棉蚜酯酶的抑制率也小于其它寄主植物棉蚜。表明取食寄主植物不同,可影响棉蚜解毒酶活力及其对杀虫剂的耐药性。     

有机磷农药与小麦酯酶作用关系研究

本研究以小麦为植物酯酶的酶源,α-乙酸萘酯为底物,考察了小麦酯酶与有机磷农药之间作用的关系,建立了10个以吸光值变化表示的酶活性与有机磷农药浓度对数之间的线性方程,并确定了函数的单调区间和极值。     

DNA的酯酶催化剂活性研究

应用萘酯坚固蓝反应显色法对ＤＮＡ的酯酶催化活性进行了研究。结果表明，辣椒ＤＮＡ、鲱鱼精ＤＮＡ具有分解萘酯的活性；反应混合物中鲱鱼精ＤＮＡ浓度为０．００３４ｍｇ／ｍＬ时，ＤＮＡ仍有分解萘酯的活性；随着ＤＮＡ浓度增加，ＤＮＡ的催化活性增强。６种寡聚核苷酸均具有催化萘酯水解的能力，但活性强弱不同；４种ｄＮＴＰ均不能催化萘酯水解。双链ＤＮＡ、单链ＤＮＡ的显色反应完全来处ＤＮＡ的催化萘酯水解反应。