酯酶同工酶的一种新染色法的初步研究

酯酶可将α -醋酸萘酯和 β -醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚 ,利用KMnO4可与萘酚反应生成有色物质的性质可对酯酶同工酶进行染色。     

酯酶同工酶的醋酸萘酯 -铁氰化钾染色法的研究

酯酶可将α-醋酸萘酯和β-醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚,利用萘酚能与铁氰化钾反应生成有色物质萘醌的性质可对电泳凝胶上的酯酶同工酶进行染色.     

大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析

【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE（GenBank登录号：JF970181）全长1 946 bp,编码526个氨基酸。羧酸酯酶AgCarE的等电点（pI）为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族（EC: 3.1.1.-）。将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能。     

酶抑制法测定有机磷农药含量

通过测定乙酸-1-萘酯在酯酶(蚕蛹酶、鸡肝酶和面粉酶)催化下水解生成的乙酸被有机磷农药抑制前后pH值的变化,推算出有机磷农药对酯酶的抑制率,从而检测出有机磷农药的含量.以ΔpH值为指标,经由单因素试验得出最佳酶促反应条件:反应时间30 min、反应温度35 ℃、固蓝B盐1 mL、乙酸-1-萘酯3 mL.结果发现蚕蛹酶活性最高,且农药对酶的抑制具有选择性,混合酶液未出现特异性提高.     

草鱼不同类群淋巴细胞的分离及鉴定

用白细胞分离分质Histoque-1077将草鱼外周血液中淋巴细胞分离后，依据它们对尼龙毛的粘附特性分为粘附性细胞和非粘附性细胞两个类群。分别检测分离前、后的淋巴细胞的细胞表现超微结构、α-醋酸萘酯酶活性及膜表面球蛋白。结果表明：表面粗糙细胞、α-醋酸萘酯酶阳性细胞和膜表面球蛋白阳性（SIg)细胞在外周血液总淋巴细胞中的比例分别为47．8％、15．2％和53．8％，在粘附性淋巴细胞中的比例分别为82．3％、0．1％和76．2％，在非粘附性淋巴细胞中的比例为18．3％、24．2％和25．5％。     

DNA的酯酶催化活性研究

应用萘酯坚固蓝反应显色法对ＤＮＡ的酯酶催化活性进行了研究。结果表明，辣椒ＤＮＡ、鲱鱼精ＤＮＡ具有分解萘酯的活性；反应混合物中鲱鱼精ＤＮＡ浓度为０．００３４ｍｇ／ｍＬ时，ＤＮＡ仍有分解萘酯的活性；随着ＤＮＡ浓度增加，ＤＮＡ的催化活性增强。６种寡聚核苷酸均具有催化萘酯水解的能力，但活性强弱不同；４种ｄＮＴＰ均不能催化萘酯水解。双链ＤＮＡ、单链ＤＮＡ的显色反应完全来自ＤＮＡ的催化萘酯水解反应     

DNA的酯酶催化剂活性研究

应用萘酯坚固蓝反应显色法对ＤＮＡ的酯酶催化活性进行了研究。结果表明，辣椒ＤＮＡ、鲱鱼精ＤＮＡ具有分解萘酯的活性；反应混合物中鲱鱼精ＤＮＡ浓度为０．００３４ｍｇ／ｍＬ时，ＤＮＡ仍有分解萘酯的活性；随着ＤＮＡ浓度增加，ＤＮＡ的催化活性增强。６种寡聚核苷酸均具有催化萘酯水解的能力，但活性强弱不同；４种ｄＮＴＰ均不能催化萘酯水解。双链ＤＮＡ、单链ＤＮＡ的显色反应完全来处ＤＮＡ的催化萘酯水解反应。     

云南烟蚜羧酸酯酶活力测定条件的研究

 比较5种α-乙酸萘酯羧酸酯酶活力测定方法,发现唐振华等（1988）方法较好。进一步以底物浓度、反应温度、温浴时间、pH作因子,采用正交设计的方法来确定α-乙酸萘酯羧酸酯酶活力测定的最佳条件,结果表明,除pH影响不显著外,其余3个因子均影响显著吸光值,其中底物浓度影响极显著。4因子的主次关系为:底物浓度＞反应温度＞温浴时间＞pH。测定云南烟蚜的羧酸酯酶活力时,以底物浓度6.0×10^-4 mol/L,缓冲液pH 8.0,37 ℃保温30 min组合较好。     

有机磷农药与小麦酯酶作用关系研究

本研究以小麦为植物酯酶的酶源,α-乙酸萘酯为底物,考察了小麦酯酶与有机磷农药之间作用的关系,建立了10个以吸光值变化表示的酶活性与有机磷农药浓度对数之间的线性方程,并确定了函数的单调区间和极值。     

不同寄主植物对棉蚜酯酶活性及杀虫剂敏感性的影响

通过分析研究取食5种寄主植物的棉蚜对杀虫剂的抗药性及其α-乙酸萘酯酯酶对杀虫剂不敏感性的频率分布,为棉蚜抗药性的治理提供理论依据。结果表明,取食不同寄主植物的棉蚜对杀虫剂的敏感性存在一定的差异。取食不同寄主植物棉蚜的酯酶活力及杀虫剂对棉蚜酯酶的抑制作用均不相同。其中,棉花棉蚜种群中具有高酯酶活力的个体多于其它4种寄主植物棉蚜,杀虫剂对棉花棉蚜酯酶的抑制率也小于其它寄主植物棉蚜。表明取食寄主植物不同,可影响棉蚜解毒酶活力及其对杀虫剂的耐药性。     

粒系集落刺激因子对急性髓系白血病细胞的诱导分化作用

观察粒系集落刺激因子对急性髓系白血病细胞诱导分化作用。方法：常规分离３１例急性髓系白血病细胞体外培养７ｄ,然后通过瑞氏染色,非特异性酯酶及氯醋酸萘酚酯酶染色及ＮＢＴ还原试验分别观察了细胞形态学,细胞内酶化学和细胞功能变化,同时采用细胞免疫方染观察细胞膜分化抗原反应。     

N-(α-萘乙酰基)-N-′(2-丙酸基)-硫脲的合成

研究了从α-萘乙酸出发,用一锅法合成出N-(α-萘乙酰基)-N-′(2-丙酸基)-硫脲。首先,α-萘乙酸与氯化亚砜反应生成α-萘乙酰氯,然后,再加入硫氰酸钾,并在乙腈为溶剂的条件下,合成α-萘乙酰基硫氰酸酯,最后,再与丙氨酸反应,生成目标产物。所得产物结构经IR初步确证。     

棉铃虫羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析

 【目的】克隆棉铃虫中肠羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究棉铃虫抗药性机理奠定基础。【方法】制备抗血清,对棉铃虫(Helicoverpa armigera (Hübner))中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,得到编码棉铃虫羧酸酯酶基因的cDNA克隆,利用生物信息学软件和网站进行序列分析,构建原核表达载体进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因hc3(GenBank登录号：GU119888)全长2 896 bp,编码795个氨基酸。羧酸酯酶HC3的等电点pI为3.94,活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体)：Ser204, Glu331, His444;第545—773位包含大量高度重复的Gly,Asp、Glu(GDE区域)构成亲水区。该基因在大肠杆菌BL21中成功表达约100 kD的HC3蛋白,检测表达的羧酸酯酶活性为0.32 mmol/100 μL酶液。【结论】成功克隆、表达了棉铃虫羧酸酯酶蛋白HC3,并发现GDE亲水结构域。为进一步了解羧酸酯酶的三维结构及其水解作用并设计新型杀虫剂提供了可能。     

金雀花碱等对小菜蛾幼虫体内羧酸酯酶等水解酶活性的影响

金雀花碱是多种植物的次生代谢物质。苦豆碱存在于豆科植物苦豆子中。以小菜蛾幼虫为供试对象研究表明,两种生物碱对昆虫体内的α－乙酸萘酯酶和α－乙酸萘酯羧酸酯酶活性有明显抑制作用,体内和体外试验表明了相似的结果,且抑制作用程度随各自生物碱浓度的增加而提高。     

布氏杆菌抗独特型抗体苗小白鼠免疫试验

用布氏杆菌抗独特型抗体苗(简称二抗苗)进行试验表明,免疫小白鼠酸性α-醋酸萘酯酶阳性T淋巴细胞(TANAE~+)数明显高于对照组(P<0.01),且比19号苗免疫组还高,证实此二抗苗确有增强细胞免疫功能的作用。     

油菜花药中酯酶和柱头中角质酶的提纯

油菜授粉时期花粉药和柱头总蛋白质提取液经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,花药中酯酶用α－乙酸蔡酯和β－乙酸萘酯染色,柱头中角度质酶用４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｕｌ ｂｕｔｙｒａｔｅ染色。切下的酶带纯化后,经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,酯酶分子量约为３１ＫＤ,角质酶分子量约为３７ＫＤ。     

乙酸-2-苯乙酯的合成途径与调节研究

为了研究苹果醋发酵过程中的特征性香气成分乙酸-2-苯乙酯的合成途径和调节,采用反应体系跟踪法检测各合成相关基质的浓度变化,发现在苹果醋发酵第7d后,乙酸-2-苯乙酯开始大量生成,第30d达到最高值;根据分析乙酸-2-苯乙酯与其合成基质,AAT,Esterase酶活浓度之间的相关系数,初步确定乙酸-2-苯乙酯的合成途径同时存在酯酶途径和醇酰基转移酶途径,推测醇酰基转移酶途径可能是主要的合成途径,醇酰基转移酶可能是关键酶;通过外源加标法,检测到8g/L是L-苯丙氨酸的最佳添加质量浓度,可以有效增加苹果醋的香气成分的生成量和醋酸质量浓度,进而提高苹果醋制品独特的香味和风味.研究结果为苹果醋制品香气成分和风味物质的深入研究和其关键工艺控制点提供了一定的参考依据.     

应用脂酶染色法对布氏杆菌病奶牛T淋巴细胞的测定

本文应用酸性α—醋酸萘酯(ANAE)染色法,测定了30头健康奶牛和30头布氏病奶牛外周血中的T淋巴细胞值,发现两者差异极显著,因此,此方法可作为测定T淋巴细胞值的有效手段之一。     

不同染色条件对大麦酯酶同工酶显色的影响

用聚丙烯酰胺垂直平板电泳技术研究了不同底物（α－萘醋酸酯和β－萘醋酸脂）、不同偶联剂（固蓝ＲＲ盐和固蓝Ｂ盐）、ｐＨ及温度条件对大麦酯酶同工酶电泳显色的影响。结果为：（１）绝大多数酶带可用α－萘醋酸酯或β－萘醋酸酯显色，极少数酶带只能用α－萘醋酸酯显示，混合底物显色时，酶带数目与α－萘醋酸酯底物显色相同，只是酶带颜色有差异；（２）用固蓝ＲＲ盐作偶联剂染色与用固蓝Ｂ盐相比，多数酶带的相对染色强度提高；（３）ｐＨ６．４比较适合酯酶同工酶染色，且以３７℃１０ｍｉｎ为最佳。表明各电泳酶带染色强度的相对差异并不一定反映各同工酶本身含量、酶活性的相对高低。     

东方蜜蜂与西方蜜蜂酯酶同工酶的比较研究

酯酶（esterase）是一组多态性很高的同工酶，常用于昆虫种属鉴定和遗传变异研究。本试验采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳（IEF-PAGE）技术，分析了浙农大Ⅰ号意蜂（A.m. lingustica）、东北黑蜂（A.m.ssp）和卡尼鄂拉蜂（A.m.carnica）等西方蜜蜂与中华蜜蜂（A.cerana cermama）酯酶同工酶及蜜蜂不同发育阶段酯酶同工酶的变化，以便为酯酶同工酶在蜜蜂遗传变异、种属鉴定及品种选育研究中的应用，提供基础资料。 　　1　材料与方法 　　1.1　材　料　浙农大Ⅰ号意蜂和中华蜜蜂来自浙江大学实验蜂场，东北黑蜂和卡尼鄂拉蜂来自吉林省蜜蜂研究所种蜂场。 　　1.2　方　法　每种蜂各取外勤蜂、内勤蜂和幼蜂20只，剪取头部，以1∶2（W/V）加入提取液, 在1.5 mL Eppendrof 管中，用玻棒研磨（冰浴中），离心（4 ℃，12 000 r/min,10 min）,取上清用于电泳。参照Nunamaher等的方法，用IEF-PAGE技术在LKB多相电泳系统中检测酯酶同工酶，酶活性染色液为0.1 mol/L pH6.5的磷酸缓冲液，含33.33%α-乙酸萘酯，33.33%β-乙酸萘酯，66.67%坚牢兰RR。……