鲤抗寒性状的RAPD标记转化为SCAR标记的研究

以黑龙江鲤Cyprinus carpio haematopterus、荷包红鲤抗寒品系、荷包红鲤Cyprinus carpio var.、柏氏鲤Cyprinus pellegnini pellegnini以及荷包红鲤抗寒品系(父本)与柏氏鲤(母本)杂交F2的DNA样品为材料,用300个随机引物对其进行PCR扩增,获得2个与鲤抗寒性状相关的分子标记AL04986和AR02788。回收、纯化这两个RAPD标记,连接到pMD18-T载体中,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,并对插入片段进行测序。根据测序结果,设计了3对SCAR引物SCAL04L/SCAL04R1、SCAL04L/SCAL04R2和SCAR02L/SCAR02R,其中SCAR02L/SCAR02R这对引物可以成功的反映出杂交F2两个群体在抗寒能力上的差异,适宜的退火温度为57℃,将此标记命名为SCAR02788。根据AL04986的测序结果设计的两对SCAR引物并没有反映出这种差异。SCAR02L/SCAR02R标记可以用作鲤抗寒基因分子辅助选择的依据。     

利用EST-SSR座位对鲤鱼几种生长性状的单标记回归分析

利用Windows Map Manager 2.0 的标记回归法对大头鲤/荷包红鲤抗寒品系的雌核发育群体进行QTL单标记定位分析.从70个微卫星座位对鲤鱼体重、体长、体厚、体高性状的标记回归研究中,共得到3个标记与性状相关.其中HLJE1、HLJE633与体长、体高、体厚相关,HLJE633、C88433与体重相关.将C88433通过BLAST比对,结果显示与斑马鱼上控制V型离子泵 (ATPase) 的基因相关.     

利用164个微卫星标记分析镜鲤家系的遗传多样性和经济性状

利用来源于细菌人工染色体文库(Bacterial artificial chromosome,BAC)的164个微卫星标记分析了镜鲤Cyprinus carpio L.家系遗传多样性及标记与体质量、体长、体高、体厚4个性状间的相关性.结果表明:镜鲤家系68个个体在164个微卫星位点上共扩增出402条条带,观察杂合度(Ho)为0.220 6 ～1.0000,平均为0.62,多态性信息含量(PIC)为0.243 9～0.702 8,平均为0.42,总体表现为中度多态(0.25≤PIC≤0.50),遗传多样性水平较高;利用SPSS 17.0的GLM模块分析标记与性状间的相关性,有25个标记与相应性状相关(P＜0.05),其中6个标记与性状的相关性达到极显著水平(P＜0.01),使用独立样本T检验和Duncan’s多重比较找到了每个位点的优势基因型;利用NCBI的Blast模块将各位点序列与斑马鱼的序列进行比对,有11个位点与斑马鱼基因相关,一致度均在80％以上,其中6个基因功能已知.     

鲤正、反交F2群体的AFLP遗传图谱构建及其QTL定位

以高代选育的荷包红鲤和兴国红鲤的正、反交F2群体为材料,利用AFLP标记构建了鲤正、反交群体的遗传图谱,并进行了生长相关性状的QTL定位。在正交群体中,14对AFLP引物共产生542个多态性标记,其中325个标记符合3∶1的孟德尔分离比例,利用其构建的遗传图谱涵盖50个连锁群,图谱总长度3 676.1 cM,并获得了与全长、体长、体高、尾柄长和尾柄高5个生长性状相关的17个QTL,可解释表型变异的1.66%~70.49%;在反交群体中,14对AFLP引物共产生605个多态性标记,其中333个标记符合3∶1孟德尔分离比例,构建的遗传图谱也涵盖50个连锁群,图谱总长度3 943.1 cM,获得了与体重、全长、体长、体高和尾柄长5个生长性状相关的15个QTL,可解释表型变异的1.58%~63.89%。还对正、反交群体构建的遗传图谱及QTL定位差异及结果进行了初步分析和探讨。     

显微介导远缘基因鲤家系的建立及遗传多样性分析

运用显微介导远缘杂交技术,将未经遗传修饰的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)总DNA直接导入受体鲤(Cyprinus carpio L·)内,以期通过这种基因组水平的远缘杂交技术改善受体鲤的品质。创建的远缘基因鲤提高了鲤的品质,丰富了鲤的遗传基础。本研究对48尾显微介导远缘基因鲤亲鱼进行标记取样,通过20个具有多态的鲤微卫星引物分析,选出在中度遗传距离(0.5～0.6)的亲本进行繁殖,从子代群体中选出品质性状优良的3个家系为研究对象。利用微卫星标记,分别对3个家系进行了遗传背景分析。结果表明,3个家系的平均有效等位基因数(Ne)分别为2.153 5、2.384 0和2.411 0;平均观测杂合度(Ho)分别为0.482 5、0.430 0和0.445 0;平均期望杂合度(He)分别为0.519 5、0.572 0和0.570 0;平均多态信息含量(PIC)分别为0.430 0、0.471 5和0.494 5。其遗传多样性处于中度多态(0.25PIC0.5)偏高水平。3个家系的基因分化系数(GST)为0.074,家系之间属于中度分化水平。     

应用微卫星技术对野鲤和两种鲤选育品系的遗传多样性分析

用自行设计的１６对微卫星引物研究了野鲤、高寒鲤和荷包红鲤抗寒品系的群体内遗传变异及相互间的。微卫星分析结果表明：野鲤、高寒鲤和荷包红鲤抗寒品系平均扩增条带分别为４．９１、２．８２和２．４５,平均杂合度观测值分别为０．６４、０．４０和０．３８。表明野鲤的遗传多样性水平最高,高寒鲤次之,荷包红鲤抗寒品系最低。说明了人工繁育和养殖实践会造成物种遗传多样性的降低。本试验共发现了１个群体特异性标记２０９ｂｐ     

应用微卫星技术对野鲤和两种鲤选育品系的遗传多样性分析

用自行设计的１６对微卫星引物研究了野鲤、高寒鲤和荷包红鲤抗寒品系的群体内遗传变异及相互间的。微卫星分析结果表明：野鲤、高寒鲤和荷包红鲤抗寒品系平均扩增条带分别为４．９１、２．８２和２．４５,平均杂合度观测值分别为０．６４、０．４０和０．３８。表明野鲤的遗传多样性水平最高,高寒鲤次之,荷包红鲤抗寒品系最低。说明了人工繁育和养殖实践会造成物种遗传多样性的降低。本试验共发现了１个群体特异性标记２０９ｂｐ     

鲤鱼耐寒性状研究

用80个随机引物对黑龙江野鲤(耐寒)、柏氏鲤(不耐寒)和杂交F1(越冬成活)的群体混合DNA样品进行RAPD—PCR扩增，结果引物S1043、S1052和S1066扩增出与抗寒性状相关的分子标记各一个。至此，共获得9个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记，进一步表明抗寒性是数量性状(QTL)受微效多基因控制。此外，就RAPD—PCR实验中需要注意的问题如模板纯度、水的去离子和不同商标酶的活性等进行了简单的讨论；并对目前所应用的淡水鱼类抗寒基因工程研究策略及现状进行了简单概述。     

转基因鲤的形态特征及主要经济性状研究

文章对转大麻哈鱼生长激素基因鲤的形态特征和在高寒地区的池塘的生长、生活力、抗寒、肌肉营养成分等主要经济性状进行了比较研究。结果表明,转基因鲤在生活力、抗寒、肌肉营养成分等经济性状与普通鲤经t值检验均无明显差异。而转基因鲤在体重、全长、体长、体高、头长等性状要明显大于普通鲤,主要表现在个体生长差异大,在试验鱼群体中最大个体体重比对照组群体中最大个体体重分别提高了52.5%,46.0%,76.0%,说明外源基因的导入对部分受体鱼有促生长效应,促进了转基因鲤的生长。在所测量的11种可比性状中,体长/体厚、体高/体厚,经数理统计分析与普通鲤均有显著差异,而其它9种性状,则无显著差异。     

鲤鱼耐寒性状研究

用80个随机引物对黑龙江野鲤(耐寒)、柏氏鲤(不耐寒)和杂交F1(越冬成活)的群体混合DNA样品进行RAPD—PCR扩增，结果引物S1043、S1052和S1066扩增出与抗寒性状相关的分子标记各一个。至此，共获得9个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记，进一步表明抗寒性是数量性状(QTL)受微效多基因控制。此外，就RAPD—PCR实验中需要注意的问题如模板纯度、水的去离子和不同商标酶的活性等进行了简单的讨论；并对目前所应用的淡水鱼类抗寒基因工程研究策略及现状进行了简单概述。     

鲤遗传连锁图谱的构建

利用JoinMap 4.0软件包,以德国镜鲤选育系为祖父母所培育的自交F2群体的68个个体为作图群体,首次以新型分子标记单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)为主要作图标记,以微卫星(Simple Sequence Repeats,SSR)和表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)为辅助标记,采用CP(CrossPollinators)模型构建鲤的遗传连锁图谱。构建的遗传连锁图谱含有560个标记(174个SSR标记、41个EST-SSR标记和345个SNP标记),分布在50个连锁群上,最大连锁群由60个标记组成,最小连锁群仅含2个标记,平均每个连锁群有11.2个标记。最大连锁群的图距为198.1厘摩(centimorgan,cM),最小的连锁群图距为1.5 cM,图谱总图距为3 295.92 cM,标记间平均间距为7.21 cM,图谱覆盖率为76.26%。构建的图谱为中等密度的遗传连锁图谱可为进一步的鲤相关经济性状的QTL定位研究和分子标记辅助选择育种(MAS)打下基础。研究亮点:首次以新型分子标记SNP为主要作图标记并以SSR标记为...     

应用RAPD技术分析三种红鲤遗传多样性

利用40个随机引物对产于江西省的荷包鲤，玻璃红鲤和兴国红鲤及野鲤（俗称“江西三红”）进行了RAPD检测及聚类分析。结果表明，25个引物的扩增效果良好，引物S225，S221对4种鲤鱼扩增出的指纹图谱差异显著，存在5个明显的特异性条带，可作为分子标记，三个品种内，以荷包红鲤的遗传距离最小（0.809)；对于品种间，则是玻璃红鲤与兴国经鲤较为相似（0．745）；“江西三红”之间的遗传差异较小，根据聚类分析可右兴国红鲤与玻璃红鲤之间的亲缘关系最近，荷包红鲤次之。     

应用RAPD技术分析三种红鲤遗传多样性

利用40个随机引物对产于江西省的荷包鲤，玻璃红鲤和兴国红鲤及野鲤（俗称“江西三红”）进行了RAPD检测及聚类分析。结果表明，25个引物的扩增效果良好，引物S225，S221对4种鲤鱼扩增出的指纹图谱差异显著，存在5个明显的特异性条带，可作为分子标记，三个品种内，以荷包红鲤的遗传距离最小（0.809)；对于品种间，则是玻璃红鲤与兴国经鲤较为相似（0．745）；“江西三红”之间的遗传差异较小，根据聚类分析可右兴国红鲤与玻璃红鲤之间的亲缘关系最近，荷包红鲤次之。     

鲤脑组织cDNA文库的构建及鉴定

用Gubler—Hoffman法构建了耐低温鲤Cyprinuscarpio脑组织全长cDNA文库,经测定库容量为5．7×10^5cfu／mL,文库的重组率接近95％,平均插入片段长度为1500bp,符合文库保存和筛选实验的要求。同时,根据鲤与低温相关的消减eDNA文库中低温下特异表达基因的片段序列,设计了PCR引物,并在此eDNA文库中进行PCR检测和序列测定。使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示,8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率接近75％。     

岩原鲤脑颅的研究

岩原鲤具有后耳骨，脑颅整体形态、各骨片形态和连结与鲤相近，而与乌原鲤较远，赞同原鲤属与鲤属是一个类群的观点。     

声音对不同体长鲤的诱集效果

用400Hz正弦波连续音对不同体长鲤Cyprinus carpio进行音响驯化,探讨声音对不同体长鲤的诱集效果。结果表明：体长30—40cm和20—30cm的鲤,驯化第8d聚集率达到100％;体长10～20cm的鲤,驯化第6d聚集率达到100％;体长5～10cm的鲤,驯化第5d聚集率达到100％。平均聚集时间,体长30～40cm的鲤为50．01S,20～30cm的鲤为49．37S,10～20cm的鲤为48．77S,5～10cm的鲤为47．25s。400Hz正弦波连续音对不同体长鲤均具有明显的诱集效果,但对体长较小的鲤的聚集效果相对好于体长大的鲤。     

低温鲤鱼血清pH值的变化

荷包红鲤抗寒品系(♂,耐寒)与柏氏鲤(♀,不耐寒)杂交F2分别进行室内水温缓降试验和骤降试验。当水温缓降至4℃时,临近死亡(组d)血清pH值为7.31,成活组(g,o)为7.08￣7.20,对照组(c)为6.97。单因素方差分析表明,同一温度下,不同样本组与血清pH值变化无直接关联;经Ducan式多重范围比较,临近死亡组与对照组血清pH值存在显著性差异(P<0.05);水温骤降试验10,8,6,4℃的pH值分别为6.71,6.60,6.71,6.74。单因素方差分析表明,不同温度与血清pH值不存在显著性关联;经Ducan式多重范围比较,4℃与8℃F2血清pH值存在显著性差异(P<0.05)。另外,本研究虽然通过两种降温方式模拟淡水鱼类冬季的生存环境(0￣4℃),但pH值的检测结果呈现相似的变化,即,同一温度不同样本组或同一样本不同温度组,血清pH值的均值呈偏碱性趋势变化。     

运用TRAP标记分析5个鲤群体的遗传多样性

运用TRAP标记技术,选取10个多态性较好的引物组合对荷包红鲤、黄河鲤、建鲤、兴国红鲤和黑龙江野鲤等5个鲤群体进行遗传多样性分析,其中固定引物是根据目标候选基因GHR基因的序列设计。结果表明,共扩增出168个位点,其中多态性位点134个,平均多态位点比例为80.41%,平均多态性信息含量为0.29。分子变异方差分析(AMOVA)结果显示群体内的方差贡献率达96.97%,表明各个鲤群体内存在较大的遗传变异。种群再分效应固定指数(FST=0.030 26,P<0.05)表明不同鲤群体间有显著的遗传分化。基于目标候选基因的TRAP标记对5个鲤群体进行聚类分析,结果表明建鲤和兴国红鲤首先聚成一类,然后黄河鲤和黑龙江野鲤聚为一类,再与荷包红鲤聚为一类。