用显微注射技术导入外源DNA对鲤鱼和虹鳟鱼受精卵孵化率的影响

本报道了利用显微注射技术导入外源基因分别对鲤鱼和虹鳟鱼授精卵孵化率影响的研究。从1993年－1996年4年中，我们用显微注射方法，将全鱼生长激素基因导入虹鳟鱼授精卵（包括囊胚期卵）5，676粒，孵出鱼苗364尾，孵化率为6.4%(4年平均，虹鳟鱼正常孵化率为80％）；而用这种方法，将全鱼生长激素基因导入鲤鱼授精卵12，196粒，孵出鱼苗4，290，孵化率为34．0％（4年平均，鲤鱼正常孵化率为70％左右）。实验结果：显微注射技术在虹鳟鱼和鲤鱼两种受精卵上的效果明显不同，斑点杂交和SouthernBlot杂交结果相近。     

低温胁迫对鲤血清生化指标的影响

本研究主要报道了荷包红鲤抗寒品系(Cyprinus．carpio var．wuyuanensis)与大头鲤(Cyprinus．pellegrini pellegrini)杂交F_2在温度骤降过程中,温度对其血清中的总蛋白、白蛋白、总胆红素、胆固醇、尿素氮、血糖和甘油三酯等血清生化指标的影响。骤降试验以2℃为降幅,每次间隔1h,依次将10℃、8℃、6℃和4℃,对应编号为A组、B组、C组和D组。数据经SAS8．0统计软件单因素方差分析。结果发现,除温度对尿素氮有显著性影响外{F0．05(3,28)=3.99,P=0．0175(P＜0．05)},温度与其它指标的变化无显著性关联。再对4组样本血清的各项指标进行Ducan式多重范围比较分析。结果表明,D组(4℃)与B组(8℃)总胆红素存在显著性差异(P＜0．05)；C组(6℃)与A(10℃)、B (8℃)组尿素氮存在显著性差异(P＜0．05)。     

低温鲤鱼血清pH值的变化

荷包红鲤抗寒品系(♂,耐寒)与柏氏鲤(♀,不耐寒)杂交F2分别进行室内水温缓降试验和骤降试验。当水温缓降至4℃时,临近死亡(组d)血清pH值为7.31,成活组(g,o)为7.08￣7.20,对照组(c)为6.97。单因素方差分析表明,同一温度下,不同样本组与血清pH值变化无直接关联;经Ducan式多重范围比较,临近死亡组与对照组血清pH值存在显著性差异(P<0.05);水温骤降试验10,8,6,4℃的pH值分别为6.71,6.60,6.71,6.74。单因素方差分析表明,不同温度与血清pH值不存在显著性关联;经Ducan式多重范围比较,4℃与8℃F2血清pH值存在显著性差异(P<0.05)。另外,本研究虽然通过两种降温方式模拟淡水鱼类冬季的生存环境(0￣4℃),但pH值的检测结果呈现相似的变化,即,同一温度不同样本组或同一样本不同温度组,血清pH值的均值呈偏碱性趋势变化。     

不同鲤鱼种间DNA遗传标记多态性

用８４个随机引物对黑龙江野鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏ ｈａｅｍａｔｏｐｔｅｒｕｓ Ｔｅｍｍｉｎｃｋ ｅｔ Ｓｃｈｌｅｇｅｌ）和柏氏鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ Ｔｃｈａｎｇ）进行种间ＲＡＰＤ分析，结果共扩增出４８４个片段，二者共有扩增片段为１３个，黑龙江野鲤特有的为２３３个，柏氏鲤特有的为２２５个，这些特异片段可做为黑龙江野鲁和柏氏鲤的分子遗传标记。并对     

应用荧光原位杂交技术检测大麻哈鱼生长激素基因在超级鲤染色体上的插入位点

对外源基因在鱼体内的整合、表达及遗传(夏德全等，2000)情况并不清楚。直接荧光原位杂交方法已在医学、农林牧渔(权法霞等，1999；孙梅和刘红林，2000)等各方面得到广泛的应用。本实验采用直接荧光原位杂交的方法，将荧光素分子(cy5)直接标记在上游引物5′末端，通过。PCR扩增获得标记的探针，将探针与变性的染色体玻片进行杂交，经一系列洗涤和复染过程，在荧光显微镜下观察大麻哈鱼生长激素基因在鲤鱼染色体上的插入位点。     

转基因鲤鲫杂交(F1)回交三倍体子代红细胞大小与DNA含量测定

通过细胞遗传学方法对转基因鲤鲫杂交(F1)回交三倍体子代鱼进行了红细胞及其核大小的测量和DNA含量的测定,结果为：采用血涂片法测量鲤鲫杂交回交子代红细胞面积和体积分别是二倍体红鲫鱼的1．43倍和1．57倍,接近三倍体的理论预期值1．5倍;通过流式细胞仪对鲤鲫杂交子代细胞和二倍体细胞进行相对DNA含量测定,结果为：在所测的12尾鱼中,有9尾鲤鲫杂交回交子代鱼的DNA含量是对照鱼的1．5倍。占总鱼数的75％,在2～3倍体之间非常接近三倍体(非整倍三倍体)的鱼有3尾,占总鱼数的25％,本结果与其细胞染色体核型分析结果基本一致。