蒙古黄芪总DNA提取方法的改进研究

[目的]改进蒙古黄芪（Astragalus membranaceus var.mongholicus）总DNA的CTAB提取法。[方法]以蒙古黄芪为试验材料,通过提取试验研究了利用改进CTAB法从植物组织中提取总DNA的效果。[结果]提取DNA的凝胶电泳图谱上呈现出清晰、整齐的条带且拖带较少,说明所提DNA的纯度较高,质量较好。利用改进CTAB法提取的DNA进行trnS-trnG扩增的产量高,说明提取的DNA可用于测序等后续分析。用提取的基因组DNA为模板,用多对特异性ISSR引物对其进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱表明各基因组DNA均扩增出多态性谱带,且带型清晰,易区分,说明利用提取的基因组DNA进行ISSR分子标记检测的效果良好。[结论]改进CTAB法可有效消除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体trnS-trnG测序分析和ISSR分子标记分析。     

诺丽叶片DNA的提取及ISSR-PCR 反应体系的建立

[目的]提取诺丽（Morinda citrifoliaLinn.）叶片DNA,并建立ISSR-PCR反应体系。[方法]以3份采自海南、4份采自美国的诺丽种质的叶片为材料,对其DNA提取和ISSR分子标记方法进行了研究。[结果]采用改进的CTAB DNA微量提取法,可以得到高质量的诺丽叶片基因组DNA。用14条不同的ISSR引物对所提取的诺丽基因组DNA进行了ISSR分子标记分析,其中7条引物在诺丽DNA中可扩增出多态性产物。[结论]建立了诺丽叶片基因组DNA快速、高效的提取方法和ISSR标记体系,可为ISSR分析应用于诺丽遗传研究奠定良好的基础。     

贵州石笔木DNA提取与ISSR-PCR反应体系的建立

[目的]利用ISSR技术对贵州石笔木的遗传多样性进行分析。[方法]以贵州石笔木种子、新鲜叶片和干燥叶片为试材,采用改良的CTAB法和SDS法提取贵州石笔木基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的ISSR-PCR反应体系。[结果]利用CTAB法和SDS法从石笔木叶片中提取DNA时,鲜叶和干燥叶片提取的DNA质量和浓度略有差别,CTAB法提取的浓度稍大而蛋白残留稍多,SDS法提取的DNA量稍少但质量最高。而从种子中提取的DNA无论质量还是浓度均较差,但尚可满足ISSR分子标记试验。贵州石笔木的适宜ISSR-PCR反应体系为2μl的10×Buffer,模板DNA 40 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Taq酶1 U,引物0.2μmol/L,总体积为20μl。[结论]该ISSR技术体系适用于贵州石笔木遗传多样性分析。     

丝瓜DNA的提取与质量鉴定

探讨了基于CTAB法的丝瓜基因组总DNA提取过程中有关的技术环节及改进方法,并用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度检测和ISSR分子标记的方法进行鉴定、比较.结果表明:在2%CTAB提取液中加入β-巯基乙醇、PVP等,可提高DNA的纯度;提取的DNA完整性较好,无RNA污染,酚类、色素和蛋白质等杂质都已基本除尽,可用于ISSR等分子标记.     

枸杞干果DNA不同提取方法的比较

[目的]为枸杞DNA分子标记、种质资源研究及地道药材鉴别等提供技术支持。[方法]以枸杞干果为试材,分别采用常规CTAB法、高盐CTAB法、改进CTAB法、5×CTAB法、常规SDS法、改进SDS法等12种方法提取其基因纽DNA,比较不同方法的提取效果。[结果]12种方法中,5×CTAB法、改进SDS法等4种方法的提取效果不理想,其余8种方法均能有效提取枸杞干果的基因组DNA,且8种方法所提DNA的质量和产量均无明显差异。[结论]所用12种DNA提取方法中,8种方法提取的枸杞干果基因组DNA能够满足RAPD试验分析的需要。     

高粱总DNA不同提取方法的比较

[目的]探索高粱总DNA的快速、高效提取方法,为将其导入水稻提供大量、高质量的DNA。[方法]以高粱幼叶为材料,分别采用SDS法、CTAB法、尿素法和NaOH法提取高粱总DNA,并对不同方法提取DNA的纯度、浓度和产量进行检测。[结果]尿素法提取DNA纯度和质量最好,SDS法和CTAB法次之,NaOH法最差。采用尿素法、SDS法、CTAB法和NaOH法分别可从1g高粱样品中提取到约292.00、21.75、152.25和243.75μg的DNA。4种方法提取的高粱总DNA的琼脂糖凝胶电泳结果表明NaOH法不能有效提取高粱总DNA,其他3种方法在提取高粱总DNA时能较好地保证其完整性。高粱总DNA分子量约为50KB。[结论]尿素法提取DNA的纯度最好、产率最高,是一种理想的高粱总DNA提取方法。     

中华桫椤DNA提取及ISSR分析

[目的]研究中华桫椤总DNA的提取方法。[方法]采用SDS法和改良CTAB法提取中华桫椤总DNA,通过电泳检测方法进行比较。[结果]用改良CTAB法得到的DNA浓度和纯度都较高,基本上无蛋白质、多糖等杂质。用改良CTAB法得到的总DNA进行ISSR-PCR扩增,谱带清晰,获得较好的效果。[结论]为提取高质量的DNA样品奠定了基础,并为探讨中华桫椤自然居群的遗传多样性和种群遗传结构及进一步保护和利用中华桫椤提供了分子遗传学依据,     

大赖草基因组DNA提取方法比较分析

为了研究不同提取方法对大赖草[Leymus racemosus(Lam.)Tzvel]基因组DNA提取质量的影响,以大赖草的嫩叶为材料,采用CTAB法、CTAB改良法、SDS法、SDS-CTAB法4种提取方法提取大赖草叶片基因组DNA,对提取的基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计法检测,获得最佳大赖草DNA提取方法 ,并利用ISSR标记验证其质量。结果表明,改良的CTAB法提取的大赖草基因组DNA纯度较高、完整性较好,ISSR扩增条带清晰,多态性高。最终确定CTAB改良法为最佳提取方法,完全适合于进一步的分子生物学研究。     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

牡丹的基因组DNA提取与ISSR引物筛选

为了研究牡丹种质资源的遗传多样性和DNA鉴定,采用ISSR标记的方法来进行试验,即采用改良的CTAB法从成熟干燥的牡丹叶片中提取基因组DNA,其质量检测采用琼脂糖凝胶电泳法和超微量分光光度计法,用优化的ISSR-PCR反应系统,对加拿大哥伦比亚大学(University of British Columbia,UBC)公布的220条ISSR引物进行筛选.结果表明,从6个牡丹品种的叶片中提取的DNA浓度范围在30×10-3～100×10-3μg/μL之间,DNA样品纯度D260 nm/D280 nm比值在1.7～1.9之间;从220条ISSR引物中筛选出了12条适合牡丹的扩增结果好的引物,选出的引物扩增条带清晰、多态性高、重复性好.说明提取的DNA质量较好,该改良的CTAB法适用于从蛋白质和酚类物质含量较高的植物材料中提取基因组DNA;筛选出的12条ISSR引物为进一步研究牡丹资源的遗传多样性奠定了基础.     

基于ISSR标记的64份广东桑地方品种遗传关系分析

[目的]分析来自珠江流域（广东省和广西省）的64份广东桑地方品种的遗传关系。[方法]采用ISSR分子标记技术,分析来自珠江流域的64份广东桑地方品种的遗传多样性,并采用基于遗传相似系数的UPGMA法对这些地方品种的遗传关系进行研究。[结果]用13个ISSR引物从64个广东桑地方品种的总DNA中共扩增出128条带,其中多态性条带109条,多态性条带百分率为85.15%,表明供试的广东桑地方品种间存在丰富的遗传多样性;64个地方品种间的遗传相似系数为0.500 0～0.929 7,相对偏高。64个广东桑地方品种被分为2类,第Ⅱ类可进一步分为10个亚类。聚类结果显示,基于ISSR标记分析的64个广东桑地方品种的遗传关系与地理分布具有一定的相关性。[结论]ISSR标记技术在评价珠江流域广东桑地方品种的亲缘关系和遗传多样性等方面具有很好的适用性,可为广东桑种质资源DNA指纹图谱的建立及品种鉴定提供科学依据。     

利用DNA分子标志鉴别台湾茶树品种及评估种原之遗传歧异性

爲評估台灣茶樹種原之遺傳歧異性,本硏究由100條ISSR引子中篩選出12條可産生多型性條帶明顯的引子,這些引子共可産生67個的多型性條帶罁恳环N原之分子標誌數據進行UPGMA法分群分析結果,可將台灣133個茶樹種原區分成六大群,包括油茶群、赤芽山茶群、野生茶樹群、大葉變種與小葉變種混合群、大葉、小葉及大葉、小葉雜交種混合群及小葉變種群。而主成分向量分析的結果與利用群聚分析得到的親緣關係樹形圖結果相符合。台灣茶樹種原高比例的遺傳歧異度是由台灣的野生茶樹所貢獻,部分重要栽培種間的相似性仍極高。爲了探討制茶過程對分子級品種鑒定之影響及DNA分子標誌應用于成茶品種鑒定之可行性,本硏究分析不同發酵程度的茶類,在制茶過程中對DNA質量之影響,試驗結果顯示高溫殺菁過程嚴重造成成茶DNA的降解。利用各種類別成茶與新鮮茶葉(對照)所抽取之DNA樣品進行PCR擴增反應,結果發現分子量小於1,000bp的ISSRDNA條帶表現較穩定。     

ISSR 分子标记技术及其在茶树研究中的应用

随着现代生物技术的发展,DNA 分子标记技术在茶树研究领域的应用越来越多,ISSR 分子标记技术以 其高效、快速、稳定、可靠等诸多优点而被广泛应用。介绍了ISSR 分子标记在构建植物DNA 指纹图谱上的应用,综 述了ISSR 分子标记技术在茶树亲缘关系研究、遗传多样性分析、品种鉴定、遗传图谱构建等领域中的应用研究进 展,探讨了ISSR 分子标记在茶树研究中存在的一些问题,为更好地应用ISSR 技术开展构建茶树DNA 指纹图谱等 研究提供参考。     

芸香科药用植物ISSR-PCR反应体系的建立及优化

[目的]建立和优化芸香科药用植物的品种的ISSR反应体系,为芸香科药用植物的资源评价、品种鉴定提供依据。[方法]以象头山芸香科植物柚、山油柑、3个品种为研究对象,从DNA提取、退火温度、循环次数、引物筛选等方面研究ISSR反应及优化条件。[结果]选用的20个引物中有3种引物扩增效果较好,以柚为代表的优化结果表明,引物826对芸香科植物扩增的最适退火温度为52.0℃,最佳循环次数为35个循环。[结论]ISSR适合于芸香科药用植物的品种的鉴定。     

大豆基因组DNA提取纯化方法研究

[目的]通过逐步富集的方法,提高大豆DNA的纯度和质量,为其他动植物基因组DNA的提取纯化提供参考。[方法]以梅桥大豆为试验材料,在CTAB法提取大豆基因组DNA的基础上,对大豆基因组DNA进行了纯化,对纯化后的DNA进行了光密度、紫外光谱、琼脂糖电泳和RAPD-PCR等的检测。[结果]光密度和紫外光谱检测表明A260/A230介于1.678~1.722,平均为1.697,A260/A280介于1.733~2.022,平均为1.844;琼脂糖电泳检测证实DNA分子量较大、完整性好、RNA残留少;RAPD-PCR检测得到了谱带清晰、多态性丰富的电泳谱带。DNA的得率为66.969μg/g。该试验的研究方法具有DNA质量高、操作简便、试验条件要求不高的特点。[结论]该方法可以应用于其它动植物的DNA提取纯化。     

基于ISSR标记的20种荷花品种资源遗传多样性分析

[目的]研究20种荷花材料遗传多样性和亲缘关系。[方法]利用ISSR-PCR体系筛选出16条多态性引物,并利用16条ISSR引物对20种荷花材料进行PCR扩增。[结果]16条引物扩增出225个位点,多态性位点占75.56%。通过Popgene32软件计算出20个荷花品种间的相似性系数为0.577 8~0.951 1,平均值为0.779 6。通过聚类分析将20个荷花品种分为两大类,白洋淀红莲和冬瓜莲可归为一类,其他18个品种划分为第二类。[结论]ISSR标记技术可有效应用于不同荷花品种的遗传多样性分析和亲缘关系的鉴定。     

竹壳葫芦茶的质量标准研究

[目的]建立竹壳葫芦茶质量标准。[方法]采用薄层色谱法（TLC）对竹壳葫芦茶中的救必应进行定性鉴别;采用高效液相色谱法（HPLC）测定竹壳葫芦茶中的槲皮素含量。[结果]TLC结果显示,竹壳葫芦茶在与救必应对照药材相应位置上,呈相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。竹壳葫芦茶槲皮素含量为41.03~49.06μg/包。[结论]该研究建立的定性及定量方法简单可行、重复性好,能有效地控制竹壳葫芦茶的质量。     

中国湖桑地方品种遗传多样性分析

[目的]探讨中国湖桑地方品种的遗传多样性。[方法]采用ISSR分子标记技术,对141个湖桑品种的遗传多样性进行分析,并根据ISSR标记遗传相似系数,按UPGMA法对141份湖桑地方品种进行聚类分析。[结果]共扩增出90个条带,其中多态性条带57条,多态性比率63.33%。141份湖桑的遗传相似系数变异范围为0.633 3~1.000 0,平均遗传相似系数为0.483 4,表明不同湖桑品种间的遗传多样性存在差异。但聚类分析结果与传统的形态学和农艺学性状的分类结果不完全一致。[结论]4个亚类清楚地代表了141份湖桑的遗传关系,并为桑树品种的优化和种质资源的保护提供了理论依据。     

千岛银珍茶适制品种筛选研究

[目的]筛选出适合加工千岛银珍茶的无性系茶树良种。[方法]对中白1号白化茶品种和茂绿、中茶108、春雨1号、杭茶21、鸠坑早等10个品种的产能性状和制得茶样的感官品质、理化成分、香气成分等进行比较分析。[结果]中白1号、茂绿和浙农117品种芽头肥壮,产能较高,且制得的茶样品质较好,审评总分高于对照鸠坑群体种2分以上。[结论]中白1号、茂绿和浙农117等品种较为适合加工千岛银珍茶。     

魔芋DNA快速提取新方法及ISSR-PCR扩增（摘要）

[目的]研究魔芋DNA的提取方法。[方法]采用CTAB、SDS及新改良的方法提取魔芋总DNA,通过分光光度计检测、电泳检测及ISSR-PCR检测方法进行比较分析。[结果]采用新改良的方法得到的DNA纯度及产量均较高,适于魔芋DNA的快速提取;以其为模板进行ISSR-PCR扩增,条带清晰,可获得较好的结果。新改良的方法与常规的SDS及CTAB方法相比,有以下优点：①效率高。运用冷冻研磨仪进行研磨,克服了研磨困难问题,节约液氮,且研磨效率大大提高,研磨时间短,褐变较少,1个人即可同时大批量进行提取;②提取质量高。在提取液中加入高浓度的PVP、β-巯基乙醇及KAc,有效去除了多酚和多糖等次生物质,检测结果DNA条带清晰,且无拖尾,更有利于大规模样本DNA提取;③用材少。需要的魔芋组织量少,适宜对较为珍贵的材料进行DNA提取,从而进行分子标记辅助育种、群体遗传多样性分析和种芋纯度鉴定的研究。[结论]为大规模提取高质量的魔芋DNA奠定基础,也为进一步研究魔芋的遗传多样性提供了分子依据。