狼犬肉毒梭菌毒素中毒的诊治

肉毒梭菌中毒症（简称肉毒中毒）是一种人、畜共患中毒病,是因犬、猫摄食了肉毒梭菌毒素而引起的一种中毒症。临床上以运动神经中枢麻痹和延髓麻痹为特征。犬肉毒梭菌毒素中毒在临床上极少见。1病原与流行病学肉毒梭菌是一种专性厌氧的革兰氏阳性杆菌,有甲膜,有周鞭毛,能运动,两端钝圆,单个或成队排列该菌的致病作用主要由其产生的毒素引起,本菌在动物尸体、肉类、     

家禽肉毒梭菌毒素中毒

家禽肉毒梭菌毒素中毒松花江畜牧局防疫站吴家志家禽肉毒梭菌毒素中毒又称肉毒中毒，系由家禽采食了被肉毒梭菌产生的毒素污染的饲料所引起的中毒性疾病．１病因本病的病原体为肉毒梭既是一种腐生且该菌在腐败的肉、鱼、动物尸体及霉烂蔬菜中与霉菌、腐生菌共生时，开始繁...     

貉肉毒梭菌中毒的救治

貉肉毒梭菌病是由貉采食被肉毒梭菌污染的饲料、饮水后而引发的一种中毒性疾病，肉毒梭菌可分为A、B、Ca、Cb、D、E、F、G八种类型，引起貉中毒的毒素是C型毒素。毒素主要作用于神经、肌肉结合点，引起机体由下而上的麻痹。肉毒梭菌有很强的毒力．能使多种动物致死．人也可以感染发病。     

C型肉毒梭菌肉毒毒素的抗原性分析

[目的]通过对分离纯化的C型肉毒毒素抗原性分析,提供快速鉴定动物因C型肉毒梭菌中毒的理论基础.[方法]对分离纯化的C型肉毒梭菌的肉毒毒素灭活后通过SDS - PAGE测定浓度,确定浓度后与弗氏佐剂乳化后免疫家兔,免疫结束后采家兔血液并分离血清.[结果]将不同稀释倍数的肉毒毒素经SDS -PAGE电泳分离后,转移至HybondNC膜,家兔三免后提取的血清作为一抗,用二抗进行Western blotting检测,大约在98.0和53.0 kDa处出现特异反应带;抗原与抗体在琼脂凝胶上结合时,会形成清晰的沉淀带.[结论]分离纯化的C型肉毒毒素,经免疫后家兔可见:C型肉毒毒素具有免疫原性和反应原性,抗体的效价为1∶8.     

一起水貂肉毒梭菌中毒的诊治

水貂肉毒梭菌中毒是由于食入含有肉毒梭菌毒素的肉类饲料引起的一种急性致死性中毒病,以呈现运动中枢神经麻痹和延脑麻痹症状为特征[1]。肉毒梭菌的芽孢分布广泛,动物肠道内容物、粪便、腐败尸体、腐烂饲料中经常含有肉毒梭菌。该菌在动物尸体、肉类、饲料内繁殖产生毒素[2]。     

羊肉毒梭菌中毒症及其防治

肉毒梭菌中毒症是家畜、家禽和人类食入有肉毒梭菌毒素的饲料或食物引起的一种急性中毒性疾病。以运动神经中枢麻痹为其特征。本病不常见,但任何地区都可发生,致死率很高．常造成严重损害。     

藏獒肉毒梭菌毒素中毒的诊治

肉毒梭菌毒素中毒又称肉中毒,是犬采食了含有肉毒梭菌神经毒素的食物、垃圾或腐烂变质的肉类后引起的一种急性的、致死性的中毒症。临床上以运动神经麻痹及延脑麻痹和胃肠机能障碍为特征。     

牦牛肉毒梭菌中毒症的诊治

肉毒梭菌中毒症（Botulism）主要由肉毒梭菌产生的肉毒神经毒素引起的一种病死率极高的周围神经麻痹性疾病。肉毒梭菌的芽孢广泛存在于粪便、腐尸、发酵食物、变质肉品、变质罐头中,1毫升纯肉毒梭菌毒素可使1万人致死。本病无地域、动物种类、年龄差别,主要通过食入毒素引起,潜伏期4至24小时。各种动物中毒后症状有所不同,主要表现为神经麻痹症状。     

朗县牦牛肉毒梭菌中毒症的诊治

肉毒梭菌中毒症（Botulism）主要由肉毒梭菌产生的肉毒神经毒素引起的一种病死率极高的周围神经麻痹性疾病。肉毒梭菌的芽孢广泛存在于粪便、腐尸、发酵食物、变质肉品、变质罐头中。1毫升纯肉毒梭菌毒素可使1万人致死。本病无地域、动物种类、年龄差别,主要通过食入毒素引起,潜伏期4至24小时。各种动物中毒后症状有所不同．主要表现为神经麻痹症状。     

鸭肉毒中毒的诊治

鸭肉毒中毒是由肉毒毒素引起的中毒性疾病,笔者介绍了该病的病原、临床症状、病理变化及诊治方法。     

几种微生物表达系统的比较

微生物表达系统是用于蛋白质生产及性质研究的重要基础。常用的微生物表达系统有大肠杆菌表达系统,酵母表达系统和丝状真菌表达系统。该文主要介绍了上述表达系统的优缺点,并作比较分析。     

鸭肠炎病毒核衣壳蛋白密码子偏爱性分析

为给鸭肠炎病毒（DEV）核衣壳蛋白（NP）基因选择良好的宿主表达系统提供参考依据,本研究运用EM-BOSS软件包CHIPS和CUSP程序对DEVNP基因进行了密码子偏爱性分析。结果显示,DEV NP基因的ENC值为51.180,编码NP蛋白的A、I等氨基酸不同密码子的使用频率存在一定的差异;从与DEV NP基因密码子使用频率比值上看,大肠杆菌22个、酵母18个、鸭12个和人20个密码子存在较大的偏爱性。由此可见,编码DEVNP蛋白密码子出现频率较均一,且酵母等真核生物与其密码子偏爱性较为接近,可作为该基因体外表达宿主的首选。     

酵母提取物诱导重组大肠杆菌合成HrpNEcc蛋白的研究

 【目的】HrpNEcc蛋白是一种起细胞信号作用的蛋白激发子,通过激活植物遗传系统的多基因表达调控,诱导植物的广谱抗病性、驱虫性和抗逆性,促进植物生长发育,因此在农业生产中具有重要意义。在hrpNEcc重组大肠杆菌高密度发酵廉价诱导剂的筛选工作中,偶然发现不添加任何外源诱导剂的TB培养基对照处理也有HrpNEcc蛋白合成。本研究旨在找出引起对照处理中HrpNEcc蛋白合成的诱导因子,并研究诱导因子的来源和含量对HrpNEcc蛋白合成的影响。【方法】摇瓶发酵培养重组大肠杆菌,离心收集菌体,用考马斯亮蓝染色法测定菌体总蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白条带,并结合Bandscan软件计算出HrpNEcc蛋白含量。【结果】在不添加任何外源诱导剂的情况下,用TB培养基发酵生产重组大肠杆菌E. coli BL21(DE3)/pET30a(+)hrpNEcc,HrpNEcc蛋白最高产量可达301.45 mg?L-1,比在IPTG诱导下,用LB培养基发酵生产的HrpNEcc蛋白产量提高72.43%。进一步研究证实,TB培养基中的酵母提取物（yeast extract）含有某些诱导因子能够诱导hrpNEcc基因表达合成HrpNEcc蛋白,并且hrpNEcc的表达水平随酵母提取物来源和浓度的不同而存在较大差异。【结论】在不添加任何外源诱导剂的情况下,高含量的酵母提取物诱导重组大肠杆菌hrpNEcc表达合成HrpNEcc蛋白,但其诱导机制还有待进一步研究。     

酵母双杂交表达载体pGADT7-AtTGA2的构建及酵母菌的转化

[目的] 研究TGA2在植物系统获得抗性中所起的作用,阐明其作用机制.[方法] 通过PCR扩增获得拟南芥中TGA2基因全长CDS序列,克隆至pGADT7酵母表达载体,并转化至AH109酵母菌株中.[结果] 重组质粒通过大肠杆菌转化获得了阳性克隆,经过菌落PCR及单、双酶切验证重组质粒构建成功.将重组质粒又转化到AH109酵母菌中,并在相应筛选培养基上成功获得了转酵母菌成功的阳性克隆.[结论] 为进一步研究TGA2参与水杨酸诱导抗性基因表达的作用机制奠定了良好的基础.     

酵母乙醇提取物对重组大肠杆菌外源蛋白表达的影响

酵母乙醇提取物是利用啤酒干酵母经培养发酵后提取的富含多种活性物质的混合物。初步实验研究发现,该物质对大肠杆菌蛋白表达有明显促进作用。为了进一步研究其对蛋白表达的作用,以E.coli BL21(DE3)/p GEX-4t-1-ggt为主要研究菌,以2 g·L-1乳糖作为诱导剂,研究酵母乙醇提取物对γ-GGT蛋白表达的作用。研究发现,分批添加终浓度10 g·L-1的酵母提纯提取物到2 g·L-1的乳糖为诱导剂的培养基中可以显著提高γ-GGT蛋白的表达及宿主菌的生长,蛋白表达量比1 mmol·L-1 IPTG诱导效果高10%~50%,菌体密度提高1.75~3倍左右。对于其他的重组蛋白及表达宿主有相似的作用。酵母乙醇提取物与乳糖组成的复合制剂可以有效替代有毒性的IPTG作为诱导剂的使用,为大规模诱导蛋白表达奠定了基础。     

拟南芥中一个与ABA信号途径相关未知蛋白质的研究初报

利用酵母双杂交系统在拟南芥cDNA文库中筛选出1个与ABI2有相互作用的未知蛋白质（AC）。在酵母系统中的进一步研究表明，AC与ABI1、ABI2有相互作用，其作用依赖于ABI1、ABI2的PP2C活性。在大肠杆菌中表达和纯化了与预测结果一致的AC蛋白质。构建了真核过量表达载体，转化拟南芥后筛选和鉴定出转基因AC植株。转基因植株的生理性状分析表明，AC基因的过量表达降低了植物对ABA敏感性。研究初步证明AC可能是脱落酸信号传导途径中的1个新信号分子。     

逆境诱导基因GsSNARE1的耐逆功能分析

【目的】分离GsSNARE1,并分析其耐逆功能,为深入研究GsSNARE1功能及分子机制奠定基础。【方法】以耐盐野生大豆G50109为材料,利用酵母双杂交验证GsSNARE1与GsCBRLK的互作关系,通过real-time PCR分析干旱和盐处理后GsSNARE1的表达特性,对GsSNARE1进行原核表达,分析GsSNARE1抗盐旱功能。【结果】获得与GsCBRLK互作的GsSNARE1,同源克隆其全长CDS,并在酵母体内验证了二者的相互作用;Real-time PCR分析表明GsSNARE1受盐、干旱胁迫诱导,经PLACE分析,发现其启动子中含有多个逆境胁迫相关的顺式作用元件;GsSNARE1在植物不同组织中均表达;GsSNARE1的表达降低了重组菌对盐、干旱胁迫的耐性。【结论】验证了GsSNARE1与GsCBRLK的互作关系,GsSNARE1在不同组织中均表达,且受盐、干旱胁迫诱导,GsSNARE1的表达降低了重组菌耐盐、耐旱能力。     

耐盐基因HAL1的克隆及在原核细胞中的表达

以酵母基因组DNA为模板,采用PCR方法得到耐盐基因HAL1,插入原核表达载体pGEX-4T-1的XhoI和EcoRI酶切位点之间,构建原核表达载体pGEX-HAL1;将该载体转化到大肠杆菌中,重组菌株用IPTG诱导表达,其耐盐性比空白菌株提高50%;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示有明显表达的蛋白质条带。     

拟南芥AFP4的克隆、原核表达和纯化及其与ABI5的互作

拟南芥ABI5相互作用蛋白AFP4(ABI five binding protein 4)是植物中的一个小分子蛋白,其表达特性与ABI5相似,受ABA诱导。以拟南芥Arabidopsis thaliana L. (Heyn) cv. Columbia为材料,通过PCR扩增了AFP4基因的完整编码序列。扩增片段插入到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点之间和酵母双杂交载体pGBKT7的多克隆位点EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ酶切位点之间。将ABI5基因的编码序列插入到酵母双杂交载体pGADT7的多克隆位点EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ酶切位点之间。重组质粒测序结果表明,所克隆的AFP4和ABI5编码区序列分别与NCBI数据库收录的AFP4基因(GenBank登录号NM_111081.2)和ABI5基因(GenBank登录号NM_129185.3)完全一致。重组原核表达载体含有AFP4片段的重组融合蛋白的理论分子量为53.4 ku。将重组质粒转化至大肠埃希菌表达菌株BL21 Star (DE3)中诱导表达,并经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化、SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。将含有AFP4和ABI5的酵母双杂交重组质粒共同转化酿酒酵母AH109中进行酵母双杂交。结果表明,重组融合蛋白在大肠埃希菌E. coli BL21 Star (DE3)中表达的适宜条件为:IPTG浓度为0.4 mmol·L^-1、25 ℃下诱导表达6 h。在上述条件下,重组融合蛋白占细胞破碎后上清液总蛋白的41.6%。经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,AFP4融合蛋白在SDS-PAGE分析时呈现单一条带。该条带经过抗6xHis标签肽的抗体分析,呈阳性。该条带经酵母双杂交分析结果表明,AFP4和ABI5在酵母细胞中可以相互作用。     

链格孢菌（Alternaria tenuissima）cDNA酵母表达文库的构建

为了解细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)遗传学背景,克隆及研究该菌功能基因,根据Gateway技术构建了既能在酵母细胞中表达外源基因又能在原核细胞大量复制的酵母表达载体pRS-DEST42,构建了细极链格孢菌(A.tenuissima)cDNA酵母表达文库.经检测,文库的平均滴度为2.44×106 cfu/ml,文库总容量为2.44×107 cfu(colony-forming unit),阳性克隆率为100%,平均插入片段约为1.38 kb.细极链格孢菌cDNA酵母表达文库是一个质量较高的表达文库,为克隆与分离全长目的基因及其功能奠定了坚实的基础.