禽腺病毒4型XZ株增殖与纯化方法的建立

2015年7月以来,禽腺病毒4型在中国的大部分地区暴发流行,并造成重大损失。为进一步对该病毒进行研究,采用两种方法对所分离的XZ株进行体外增殖培养,并利用透射电镜观察到完整的病毒粒子,同时采用超滤浓缩和凝胶层析的方法对病毒进行纯化。结果显示,成功建立了稳定的禽腺病毒4型XZ株增殖体系,以及温和、高效的病毒纯化工艺,且纯化病毒感染性强,具有很好的免疫原性。     

影响甘蓝型油菜下胚轴外植体芽高频率再生的因素

以优质高产杂交油菜新品种"蜀杂九号"父本84100-18(BrassicanapusL)油菜品系的下胚轴为外植体,分析讨论了预培养,苗龄,激素浓度,AgNO3等因素对下胚轴的再生条件的影响.试验表明:7 d～9 d(天)的苗龄的外植体出愈率很高;MS 3 mg/L(毫克/升)6-BA时芽的分化率最高;AgNO3可提高下胚轴芽的分化率;提高琼脂浓度,降低蔗糖含量可以减少玻璃化现象.     

猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选

为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定。同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定。结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3。综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体。     

转耐辐射球菌irrE基因提高拟南芥盐胁迫耐受性的表型分析

耐辐射球菌中的irrE基因作为一种全局性调节因子,在抵御极端辐射照射时起着至关重要的作用。利用农杆菌介导的花序浸染法,将irrE基因转化拟南芥,筛选和鉴定出表达irrE的植株,并分析了转基因植株的盐胁迫耐受能力。结果显示,转irrE拟南芥表现出对盐胁迫的耐受性提高;在盐胁迫下,转基因拟南芥体内脯氨酸含量比野生型有明显的提高。RNA半定量分析显示转基因植株中AtNHX1表达水平升高。因此推测irrE基因在转基因拟南芥中调控了AtNHX1的表达,引起了植株的盐胁迫耐受性提高。     

莴苣‘红帆’品种下胚轴愈伤组织诱导与植株再生

 莴苣下胚轴愈伤组织诱导时, MS+ 6-BA 0. 5 mg/ L+ 2, 4-D 1 mg/ L+ NAA 0. 1 mg/ L 效果最好,出愈率达94%; 愈伤组织分化为芽时, MS+ 6-BA 1. 0 mg / L+ NAA 0. 05 mg/ L 分化频率最高, 达100% ; 再生苗在1/ 2MS+ NAA 0. 5 mg/ L 中诱导生根成为完整植株。     

铺散诸葛菜的组织培养及植株再生

 以铺散诸葛菜的叶柄及叶片为外植体, 研究了不同的再生方式。在6-BA 和NAA 配合使用的MS 培养基上, 叶柄和叶片外植体有高的成芽率, 具有强的器官再生能力。在2,4-D 与6-BA、NAA 结合的培养基上, 叶柄和叶片有较高的愈伤组织诱导率, 在含6-BA 的培养基上也易于分化。叶柄、叶片再生的芽和经愈伤组织分化而得来的芽快速繁殖后, 在生根培养基上形成完整植株。研究表明铺散诸葛菜具有极强的器官分化能力。     

油菜萝卜质不育系测交后代恢复材料F_2(TC_1)的选育及细胞遗传学研究

以Ad-6(F5)与甘蓝型油菜OguCMS测交后代可育株F2(TC1)为材料,研究了测交后代的形态特征及体细胞染色体数目和花粉母细胞的减数分裂行为.结果表明,F2(TC1)的特征类似于Ad-6(F5),体细胞染色体数为2n=35～40.花粉母细胞减数分裂过程能够完成,但出现许多异常现象.在PMCMI期出现有较高单价体及多价现象,并且还有染色体桥存在.中期及后期有落后染色体存在,后期Ⅱ还出现有多极分裂现象.在四分体时期,除四分体外,还有二分体、三分体、五分体、六分体存在,其中三分体所占比例较高.这些现象说明,F2(TC1)还很不稳定,这可能是由于外源遗传物质与油菜的遗传背景不协调造成的.     

油菜萝卜质不育系测交后代恢复材料F_2(TC_1)的选育及细胞遗传学研究

 以 Ad- 6 (F5 )与甘蓝型油菜 Ogu CMS测交后代可育株 F2 (TC1 )为材料 ,研究了测交后代的形态特征及体细胞染色体数目和花粉母细胞的减数分裂行为。结果表明 ,F2 (TC1 )的特征类似于 Ad- 6 (F5 ) ,体细胞染色体数为 2 n=35～ 40。花粉母细胞减数分裂过程能够完成 ,但出现许多异常现象。在 PM CMI期出现有较高单价体及多价现象 ,并且还有染色体桥存在。中期及后期有落后染色体存在 ,后期 还出现有多极分裂现象。在四分体时期 ,除四分体外 ,还有二分体、三分体、五分体、六分体存在 ,其中三分体所占比例较高。这些现象说明 ,F2 (TC1 )还很不稳定 ,这可能是由于外源遗传物质与油菜的遗传背景不协调造成的。     

拟南芥中一个与ABA信号途径相关未知蛋白质的研究初报

利用酵母双杂交系统在拟南芥cDNA文库中筛选出1个与ABI2有相互作用的未知蛋白质（AC）。在酵母系统中的进一步研究表明，AC与ABI1、ABI2有相互作用，其作用依赖于ABI1、ABI2的PP2C活性。在大肠杆菌中表达和纯化了与预测结果一致的AC蛋白质。构建了真核过量表达载体，转化拟南芥后筛选和鉴定出转基因AC植株。转基因植株的生理性状分析表明，AC基因的过量表达降低了植物对ABA敏感性。研究初步证明AC可能是脱落酸信号传导途径中的1个新信号分子。