乳酸菌口服疫苗在猪病防治中的应用

在工业菌株中,乳酸菌是非常重要的一类,且该菌安全等级是食品级的,在制作口服疫苗时以乳酸菌为表达载体安全无毒。乳酸菌口服疫苗主要利用胃肠黏膜来呈递抗原,进而诱导机体产生响应的免疫应答与免疫耐受。文中重点讨论乳酸菌口服疫苗的研发和应用等内容,供相关人员参考。     

我国畜禽基因工程疫苗技术体系建设进展迅速

在国家“863”计划支持下,以提高基因工程疫苗的免疫能力和安全性为目标,在畜禽基因工程疫苗和免疫佐剂技术体系建设方面取得了重要进展。在克隆抗原或疫苗研制用相关基因的基础上,构建了高效表达的稳定载体,建立并完善了基因工程疫苗安全性评价体系和规模化生产工艺。成功研制出鸡传染性法氏囊病(IBD)二价基因工程疫苗、4种DNA疫苗(如猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗)、轮状病毒基因工程乳酸菌疫苗、鸡传染性鼻炎疫苗;建立并完善了猪伪狂犬病病毒闽A株SA215三基因缺失疫苗生产工艺,完成猪伪狂犬病基因缺失活疫苗SA215新兽药证书的全套研究…     

嗜酸乳杆菌S-层蛋白表面展示系统的构建及酶切位点分析

[目的]克隆和表达嗜酸乳杆菌S-层蛋白基因,用其构建能承载外源抗原表位的乳酸菌细胞表面展示系统。[方法]以染色体DNA为模板克隆S-层蛋白基因SlpA,通过酶切、连接将其插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pW425et,构建表面展示系统pW425et-S,并对酶切位点进行分析。[结果]将pW425et-S转化入thyA基因缺陷型E.coli X13感受态细胞,SDS-PAGE、Western-blotting、全细胞ELISA检测表明,在重组菌表面表达出S-层蛋白,构建出表面展示系统,确定BstEⅡ作为融合外源保护性抗原基因的酶切位点。[结论]克隆出嗜酸乳杆菌S-层蛋白基因,成功构建表面展示系统pW425et-S,为开发乳酸菌活载体口服活菌疫苗提供了可行性操作平台。     

疫苗研制的新进展

随着生物技术的不断创新,继减毒苗、灭活苗、基因工程苗、合成肽苗、抗独特型抗体苗之后,科研工作者又先后研制出核酸疫苗、转基因植物疫苗和高分子微球疫苗,本文对后三种疫苗作一简介。1核酸疫苗所谓的核酸疫苗又称基因疫苗,就是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上,然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内使外源基因在活体内表达,产生的抗原激活机体免疫系统,引起免疫应答。用DNA作为免疫原的称DNA疫苗,用RNA作为免疫原的称RNA疫苗。核酸免疫是近几年基因治疗研究中衍生发展的一个新领域,有人将核酸疫苗看作是继全菌减毒疫…     

应用伪狂犬病毒表达载体研制重组疫苗的研究进展

随着分子生物学技术的发展,尤其是DNA重组技术的发展和应用使得疫苗方面的研究正逐渐从传统的灭活和弱毒疫苗向基因工程疫苗过渡,特别是以病毒和细菌为活载体疫苗的研制,以期克服常规疫苗在免疫时出现的毒力返强和散毒、免疫效率较低、过敏反应、用量较大等弊端。随着人们对伪狂犬病病毒分子生物学的深入研究,伪狂犬病毒特殊的基因组结构、宿主的广泛性和生物安全性作为重组病毒载体疫苗株越来越引起人们的关注,以伪狂犬病毒为载体研制基因工程疫苗的研究在国内外已取得了可喜的进展,现就国内外研究概况作一综述。1伪狂犬病毒的分子生物学…     

犬细小病毒病DNA疫苗的研究进展

犬细小病毒病是犬的一种具有高度接触性的烈性传染病。近年来,在犬细小病毒新型疫苗研究方面取得了新的进展,特别是DNA疫苗,笔者就犬细小病毒DNA疫苗的作用机理、抗原基因、载体选择、分子佐剂的研究进展方面进行系列论述。     

嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析

为构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗载体,根据已发表的该菌外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR技术,扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因,并插入到真核表达载体pcDNA3上,构建成DNA疫苗,命名为pcDNA3-POMP。以纯化的原核表达蛋白GST-POMP免疫SD大鼠制备抗血清,用ELISA测定抗体效价达到1∶100 000以上;用pcDNA3-POMP质粒转染293细胞,转染48h后收集细胞,提取细胞的RNA进行RT-PCR,检测到外源基因的表达。至此,初步完成嗜水气单胞菌DNA疫苗表达载体的构建,为进一步疫苗免疫和效价的检测奠定基础。     

绿色荧光蛋白标记穿梭表达载体构建及重组乳酸菌制备

以红霉素耐药性基因/thy A基因双筛选压力大肠杆菌-乳酸杆菌穿梭表达载体pW425et为基本骨架,将绿色荧光蛋白(GFP)基因插入该载体,构建GFP标记的穿梭表达载体pW425et-GFP.通过连续的荧光强度检测,验证gfp基因能否在重组菌中得到稳定表达.重组表达质粒pW425et-GFP酶切和PCR鉴定结果与预期片段大小相符,SDS-PAGE显示27 kD的绿色荧光蛋白获得表达,在蓝光的激发下,可见明显的绿色荧光,且荧光稳定性强,连续传代30次仍可见荧光.结果表明已成功构建了GFP标记穿梭表达载体pW425et-GFP,为乳酸菌作为益生生理菌载体进行体内定植规律研究和食品级、疫苗级乳酸菌产品的开发奠定了基础.     

鸡新城疫病毒F基因高效真核表达质粒的构建

为进一步研究基因疫苗的免疫机制和基因疫苗的免疫效果 ,应用 DNA重组技术 ,根据载体 pc D-NA4 .0 / His Max的多克隆位点设计引物 ,对含有 NDV保护性抗原基因 F的质粒 PCR扩增。将得到的目的片段插入到载体的启动子下游 ,成功得到含有 NDV F基因的真核表达质粒载体 PC4 F的基因疫苗。     

鸡白细胞介素2口服免疫佐剂增强传染性法氏囊病病毒DNA疫苗免疫效果的研究

将含萧山鸡白细胞介素2基因的真核表达质粒pCI-IL-2的减毒鼠伤寒沙门氏茵ZJ111(ZJ111/pCI-IL-2)口服接种小鼠和雏鸡,并与传染性法氏囊病病毒(IBDV)DNA疫苗联合免疫雏鸡观察其免疫效力.结果表明:利用减毒沙门氏菌作为栽体的鸡白细胞介素2口服免疫增强剂具有相对的安全性,重组ZJ111/pCI-IL-2茵能明显增强IBDV DNA疫苗对强毒株攻击保护率;增强IBDV DNA疫苗诱导的抗体的效价(P＜0.05);增强IBDV DNA疫苗所诱导的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应(P＜0.05),上述结果初步表明以减毒沙门氏菌为载体的白细胞介素2免疫增强剂具有良好的安全性和免疫增强作用,为研制低成本、实用化的禽类口服免疫增强剂奠定了基础.     

DNA疫苗的研究进展

DNA疫苗（DNA vaccine）又称“裸”DNA疫苗（naked DNA vaccine）、基因疫苗（genetic vaccine）,亦有核酸疫苗（nucleic acid immunization）、多核苷酸疫苗（polynuleotide vaccine）等相关名称,是近年来基因治疗研究中所衍生并发展起来的一个新的研究领域。它是指将编码某种蛋白质抗原的重组真核表达载体直接注射到动物体内,使外源基因在活体内表达,产生的抗原激活机体的免疫系统,从而诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。该疫苗既具有减毒疫苗的优点,同时又无逆转的危险,因此越来越受到人们的重视,被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。     

论新型疫苗的研究概况与进展

随着免疫学和分子生物学技术的快速发展,近年来出现了各种不同的新型疫苗,这类疫苗的出现弥补了传统疫苗的缺点,也填补了疫苗种类的空白。就重组活载体疫苗、树突状细胞疫苗、T细胞疫苗、食物疫苗、DNA疫苗、RNA复制子疫苗、多肽疫苗和抗独特型抗体疫苗等8种新型疫苗的研究概况与进展进行论述。     

传染性法氏囊病病毒DNA疫苗的免疫原性研究

 将传染性法氏囊病病毒弱毒株 (IBDV JD1)和强毒株 (IBDV ZJ2 0 0 0 )的基因组A节段全长cDNA、多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)和主要宿主保护性抗原 (VP2 )基因 ,分别克隆入两种真核表达载体pCI和 pcDNA3,构建成 12种真核表达质粒。将制备的DNA疫苗以 2 0 0 μg的剂量经腿肌和皮下结合途径首免 14日龄SPF鸡 ,2 8日龄以相同的剂量二免 ,二免后 14d攻击IBDV标准强毒BC6 / 85株。结果表明 ,含A节段或多聚蛋白基因的表达载体均能诱导较高水平的中和抗体并能提供对强毒的免疫保护 ,多聚蛋白基因构建成的DNA疫苗与弱毒苗B87的免疫效果相当 ;编码VP2基因的DNA疫苗仅能诱导很低水平的中和抗体 ,几乎不能提供免疫保护 ;以 pCI为表达载体的免疫效果优于pcDNA3;源于ZJ2 0 0 0株基因构建成的DNA疫苗诱导的免疫反应优于JD1株 ,提示DNA疫苗的免疫效果与VP2蛋白的构象、表达载体的调控元件和毒株差异等因素有关。     

编码草鱼呼肠孤病毒VP5与NS38B细胞表位的DNA疫苗壳聚糖纳米口服制剂的研制与评价

以编码II型GCRV VP5和NS38的B细胞线性表位的cDNA串联构建pcDNA3.1(+)-Bs5-10（GenBank登录号为MH234474）,并包被成纳米级壳聚糖颗粒;无GCRV草鱼（11~12 cm、25~30 g）随机分为空白对照组、空白对照-GCRV攻毒组、裸空载体注射组、壳寡糖包被空载体口服组、裸DNA疫苗注射组（每尾鱼注射10 μg载体,1 d和29 d各免疫1次）、壳寡糖包被DNA疫苗口服组（每尾鱼大约投喂50 μg载体,1～3 d、15～17 d和43～45 d各口服免疫1次）,在28℃水温下评价疫苗保护力和特异性抗体水平。结果显示,裸DNA疫苗注射组和壳寡糖包被DNA疫苗口服组的相对保护率分别为66.67%和50%;两组血清抗VP5和抗NS38的IgM水平均随加强免疫而显著升高（P<0.05）;且在对应时间点（22 d或50 d）,前组特异性IgM水平均显著高于后者（P<0.05）。结果表明,壳聚糖包被的DNA疫苗口服免疫能在一定程度上抵抗GCRV攻击,且体液免疫参与了该保护机制。     

禽流感HA7基因DNA疫苗的构建及免疫保护效果研究

为了研究禽流感HA7亚型DNA疫苗,将HA7基因插入高效真核表达载体pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA7,然后将pCAGGHA7以100μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,免疫SPF鸡后两周抗体水平达到3Log2,4周后用100 LD50的H7N1鼻腔途径进行攻击毒,发现100μg pCAGGHA7可形成8/8的免疫保护。表明禽流感DNA疫苗pCAGGH7诱导的保护性抗体免疫反应水平较高,能达到免疫保护效果。     

前沿扫描六则

正新冠疫苗研发5种路线同步开展2月21日上午,国务院应对新型冠状病毒感染肺炎疫情联防联控机制举行新闻发布会。发布会上,国家卫健委副主任曾益新对目前新冠肺炎疫苗的研发进展进行了介绍,在疫苗研发上有5条技术路线在同步开展,包括灭活疫苗、重组基因工程疫苗、腺病毒载体疫苗、核酸疫苗(mRNA疫苗和DNA疫苗),以及减     

动物病毒重组活载体疫苗研究进展

病毒活载体疫苗作为一种新型疫苗,与传统疫苗相比,具有极大的优势与应用前景,是当今与未来疫苗研制与开发的重要方向之一。目前在人类医学和兽医领域,病毒活载体疫苗均取得了大量的研究成果。本文综述了主要的兽用病毒疫苗载体及重组活载体疫苗的最新研究进展,并分析了其发展趋势,为进一步研制新型重组病毒疫苗提供参考。     

豆渣固定化培养乳酸菌的条件优化及其对乳酸菌的保护作用

以豆渣为乳酸菌固定化载体,利用单因素实验和正交实验对影响乳酸菌固定化培养的3个因素进行了优化,同时研究了体外模拟消化系统胁迫对发酵豆乳中活乳酸菌数量的影响。结果表明:固液比1∶40、接种量3%、培养时间24 h为豆渣固定化培养乳酸菌的最佳条件,在此组合条件下豆渣载体上固定吸附的最大活菌数为1.07×1010cfu/g;经体外模拟胃肠消化系统后,豆渣固定化乳酸菌发酵豆乳中的活菌数显著高于游离乳酸菌发酵豆乳中的活菌数。说明豆渣可以作为一种新型固定化乳酸菌的材料,且能够增强乳酸菌对消化系统胁迫的抵抗能力。     

捻转血矛线虫DNA疫苗的构建及山羊免疫保护性试验

 【目的】构建捻转血矛线虫DNA疫苗，并研究该疫苗对山羊的免疫保护效果。【方法】将捻转血矛线虫重要保护性抗原H11的编码基因分H11-1、H11-2和H11-3三部分，分别亚克隆到基因疫苗载体pcDNA4/His Max C中，用酶切反应、序列测定等方法鉴定重组疫苗。将纯化的DNA疫苗肌肉注射山羊后，用RT-PCR、Western blotting和ELISA方法检测疫苗在山羊体内的转录、翻译和诱导IgG的产生。第2次免疫后2W用10 000条捻转血矛线虫第3期幼虫攻击实验动物，检测山羊虫卵排出、虫卵孵化率、成虫数量等免疫保护性指标。【结果】获得了捻转血矛线虫H11 DNA疫苗，疫苗第1次免疫7d后在山羊肌肉组织中进行了转录，第2次免疫7 d后，DNA疫苗获得了翻译，并诱导机体产生了相应的抗体。与对照组比较，试验组山羊排出虫卵减少58.8%、虫卵孵化率减少75.3%、成虫减少68.2%。【结论】构建了捻转血矛线虫H11 DNA疫苗，该DNA疫苗对山羊具有较好的免疫保护效果。     

豆渣固定化培养乳酸菌的条件优化及其对乳酸菌的保护作用

以豆渣为乳酸菌固定化载体,利用单因素实验和正交实验对影响乳酸菌固定化培养的3个因素进行了优化,同时研究了体外模拟消化系统胁迫对发酵豆乳中活乳酸菌数量的影响。结果表明:固液比1∶40、接种量3%、培养时间24 h为豆渣固定化培养乳酸菌的最佳条件,在此组合条件下豆渣载体上固定吸附的最大活菌数为1.07×1010cfu/g;经体外模拟胃肠消化系统后,豆渣固定化乳酸菌发酵豆乳中的活菌数显著高于游离乳酸菌发酵豆乳中的活菌数。说明豆渣可以作为一种新型固定化乳酸菌的材料,且能够增强乳酸菌对消化系统胁迫的抵抗能力。