小黑麦植酸酶最适提取、纯化与活性测定

[目的]为了获得高活性植物小黑麦植酸酶最适提取条件.[方法]研究饲食两用小黑麦209,探究最适提取条件.采用考马斯亮蓝法测总蛋白含量,按照国标新标准钒钼酸铵法测定植酸酶活性.[结果]最适提取条件为：pH 5.0的提取缓冲液,固液比10,室温,200r/mim振荡1h,不添加活性剂.[结论]该研究完善了麦类提取植酸酶技术手段,适于实际应用中.     

秸秆降解微生物在不同培养基中的产植酸酶特性

对能有效降解作物秸秆的间型脉孢菌MB、侧孢霉SCB和放线菌FZ等6种微生物的产植酸酶特性及添加植酸钙对产植酸酶的促进作用进行了研究。结果表明,这3种微生物在降解秸秆过程中均表现出不同的植酸酶活性,固体发酵时脉孢菌MB和侧孢霉SCB的植酸酶活性分别高达5390 U/g料曲和3080 U/g料曲。在基础液体培养基中培养时,侧孢霉MB的植酸酶活性为390 U/ml;在蔗糖液体培养基中活性提高到550 U/ml。加入适量的植酸钙有利于诱导菌株产酶活性的提高,使侧孢霉SCB与芽孢杆菌PD的植酸酶活性分别提高1.5倍和1倍。     

温度·时间和pH对饲料中植酸酶活力的影响

[目的]研究植酸酶在猪饲料中的应用条件。[方法]采用钒钼酸法测定植酸酶活力,研究植酸酶活力及时间、温度和pH等因素对饲料中植酸酶作用的影响。[结果]各样品溶液的OD平均值分别为0．241、0．245和0．220。总磷量平均值分别为1．6948、1．7229和1．5516μmol／g,酶活平均值分别为5891．78、5743．00和5171．89IU／g。植酸酶的最适温度为55℃。50～65℃下饲料中植酸磷的降解率接近100％,40℃下其降解率为80％。4h后植酸磷的降解率为80％,5～6h后植酸磷基本被完全降解。pH值为2.5和5．5时植酸酶的活性最强;pH值为7．0时,植酸酶的活性很低。在温度为55℃和pH值为5．5的条件下,5h以上植酸酶对植酸钠中植酸磷的降解率为60％-100％;在温度为40℃和pH值为2．5的条件下,4h后其降解率为60％。[结论]该研究为植酸酶在畜禽养殖中的应用提供了理论依据。     

蚕豆粉渣膳食纤维提取及功能性质研究

以蚕豆渣为原料,通过单因素试验和L9(34)正交试验得出用碱法和酶-碱法提取水不溶性膳食纤维的最佳工艺条件,并测定了2种方法制取的水不溶性膳食纤维的溶胀性和持水性。结果表明,碱法最佳工艺条件为:NaOH溶液浓度6g/100mL,碱浸温度50℃,碱浸时间40min;酶-碱法最佳工艺条件为:NaOH溶液浓度3g/100mL,碱浸温度60℃,碱浸时间50min,胰蛋白酶用量0.4g/100mL。酶-碱法制取的水不溶性膳食纤维具有较好的溶胀性和持水性。     

青霉植酸酶生产条件及纯化的研究

青霉培养液的原始pH值为5.5时，植酸酶大量地产生，酶活性高，在青霉的生长过程中，维持培养液pH的不降低会抑制青霉的生长，植酸钙可促进植酸酶活性的提高，粗酶液经硫酸铵分级沉淀，再经SephadexG-100凝胶过滤，洗脱液有2个具有酶活力的蛋白峰，植酸酶被纯化了3.3倍，比活力达71.3U/mg。     

黄芪对黑曲霉植酸酶代谢活性的影响

利用FeSO4-钼蓝法研究了中草药黄芪(Astragalus membranaceus)粉末、黄芪水提取液对黑曲霉(Aspergillus niger)植酸酶在固体培养基和液体培养基中代谢活性的影响.结果表明,在0.03 g/mL的黄芪粉末和0.03 g/mL的黄芪水提取液作用下,44h时黑曲霉中植酸酶活性最高.与对照相比,固体培养基中加入黄芪粉末和黄芪水提取液的吸光度分别提高了33.6％和37.8％,液体培养基中加入黄芪粉末和黄芪水提取液的吸光度分别提高了21.0％和28.7％.在最佳培养时间,植酸酶活性均随着黄芪浓度的增大而呈下降趋势,其中加入黄芪粉末的液体培养基变化幅度最大,植酸酶活性浓度0.01 g/mL是浓度0.05g/mL的1.64倍;加入黄芪水提取液的液体培养基中植酸酶活性浓度0.01 g/mL是浓度0.05 g/mL的1.54倍;加入黄芪粉末和黄芪水提取液的固体培养基中植酸酶活性浓度0.01 g/mL分别是浓度0.05g/mL的1.50和1.42倍.     

基于响应面法优化HY15发酵生产β-环糊精葡萄糖基转移酶的发酵条件

为了提高β-环糊精葡萄糖基转移酶产酶活力,应用Plackett-Burman设计法对影响高温菌株HY15发酵的10个因素进行了筛选,确定了主要影响因素,然后通过响应面法优化了各因素的最优质量浓度,建立了β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的二次多项式数学模型,并分析了模型的有效性与因子间的交互作用。结果表明:影响β-环糊精葡萄糖基转移酶产率的主要因素及其最优质量浓度为:糖蜜+玉米淀粉22.45 g/L,K2HPO40.97 g/L,MgSO40.18 g/L,玉米浆+酵母21.82 g/L,pH值6.98。在优化后的培养基条件下,β-环糊精葡萄糖基转移酶酶活力达到1 409.70 U/mL,验证值1401.81 U/mL,二者吻合较好。     

毕赤酵母表达罗氏耶尔森氏菌(Yersinia rohdei)植酸酶和酶学特性研究

按毕赤酵母偏爱密码子,将来自Yersinia rohdei的植酸酶基因(YrAPPA)进行了化学合成,并成功在毕赤酵母GS-115中异源分泌表达,重组植酸酶分泌量能达到72μg/mL。酶学特性研究结果表明:酶比活达到1 500 U/mg,重组植酸酶的最适反应温度和pH分别为55℃和4.5;纯化的重组植酸酶能耐受60℃高温,且pH 3—7.5范围内重组植酸酶有良好的稳定性;Cu~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(3+)对植酸酶活性有抑制作用;重组植酸酶有抗胃蛋白酶和胰蛋白酶水解特性。     

2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究

对黑曲霉A 3214及其诱变株N14所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明A 3214植酸酶和N14植酸酶的最适pH均为2.5,最适温度均为50℃,60℃保温10 min后酶活保留均在80%左右,用胃蛋白酶处理后酶活均保留80%左右,分子量均为47.4 KD,等电点均在4.5到5.0之间,K+,Na+,Ca2+,Mg2+,Fe2+在高浓度时对A3214植酸酶和N 14植酸酶都有抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+却几乎没有抑制作用,A 3214植酸酶对植酸钠的Km值为0.0005 mol/L,N 14植酸酶对植酸钠的Km值为0.0004 mol/L,A 3214植酸酶的比活为135 777.5u/mg,N 14植酸酶的比活为148 447.5u/mg.     

低植酸玉米自交系的筛选及其遗传分析

 【目的】筛选获得低植酸玉米自交系,研究低植酸性状的遗传规律,为低植酸玉米杂交种的选育提供依据。【方法】通过钼酸铵显色法对100份玉米自交系进行测定,将筛选得到的低植酸自交系鲁原92与已知低植酸突变体Lpa/lpa241、Lpa/Lpa241和齐319进行杂交,分析低植酸性状的遗传;并用钼酸铵显色法和植酸含量国标测定法对6个不同来源的齐319、鲁原92及其杂交种进行植酸含量比较分析,同时通过发芽试验对齐319、齐319×Lpa241/lpa241、鲁原92×Lpa241/lpa241、鲁原92×齐319苗期表现进行鉴定分析。【结果】钼酸铵显色法显示,鲁原92的无机磷含量达到0.93 μg?mg-1水平,初步确定属于低植酸自交系;其低植酸性状受隐性单基因控制,可能与lpa241等位;齐319在植酸性状上表现杂合性,存在苗期纯合致死现象;齐319×Lpa241/lpa241、鲁原92×Lpa241/lpa241、鲁原92×齐319 F2苗期纯合致死比例相近;不同来源的同一自交系间植酸含量存在显著差异。【结论】筛选得到低植酸自交系1个,分析其低植酸性状为隐性单基因控制,且与lpa241等位。     

凝结芽孢杆菌产β-半乳糖苷酶条件的优化

从土壤中筛选得到1株高产β-半乳糖苷酶的凝结芽孢杆菌,研究该菌产β-半乳糖苷酶的发酵条件。结果表明:产酶适宜的培养基配方为蔗糖10 g/L,麦芽糖5 g/L,可溶性淀粉5 g/L,酵母提取物6.7 g/L,胰蛋白胨13.3 g/L,KCl 1.5 g/L;产酶的最适发酵温度为45℃。培养48 h总酶活力达到7.1 U/mL,60 h胞外酶活力最高为3.0 U/mL。胞外酶的最适pH为6.0,最适温度65℃。该酶能够完全水解乳糖,可适用于无乳糖乳制品的生产。     

微生物植酸酶在水产饲料中的应用

植酸酶由一系列酶组成,是肌醇六磷酸酸化酶,可水解植酸使无机正磷酸逐步释放。植酸酶的活力单位(FTU)定义为:37℃,pH值=5.5条件下,1min内从0.0051mol/L的植酸钠溶液中水解释放1μmol/L无机正磷酸所需要的酶量为1个酶活单位[1]。植酸酶广泛存在于谷物、豆类、油料作物及动物胃肠道中,但在正常情况下,其含量微小,无法将日粮中的植酸盐消化达到显著水平[2]。在动物饲料中添加微生物植酸酶已被证明对于植酸降解非常有效。国内外对于在水产饲料中添加微生物植酸酶已有一些研究,并取得了明显的效果。1植酸及植酸盐植酸即肌醇六磷酸,是由6个含磷…     

抗坏血酸还原法测定工作场所空气中的磷酸含量

为了建立工作场所空气中磷酸含量的测定方法,利用磷酸与钼酸铵生成磷钼酸铵,抗坏血酸再将磷钼酸铵还原生成蓝色络合物的性质,对抗坏血酸还原法进行了优化。结果表明:空气样品中加入4.5 mol/L硫酸溶液4.0 mL、40 g/L钼酸铵溶液1.0 mL、17 g/L抗坏血酸溶液1.5 mL,沸水浴显色反应25 min,最后在815 nm波长处进行检测,磷酸检出限为0.016μg/mL,最低检出浓度为0.011μg/mL(以采集75 L空气样品计),测定范围2~200μg,回收率98.0%~101.7%。该方法简单快捷、灵敏度高、试剂用量少,适合工作场所空气中的磷酸含量测定。     

基于响应面的米曲霉产α-淀粉酶的发酵培养基优化

为提高米曲霉产α-淀粉酶的发酵水平,运用响应面法优化米曲霉产α-淀粉酶发酵培养基。首先,利用Plackett-Burman设计法从影响发酵水平的7个因素中高效地筛选出3个关键因素:豆粕粉、pH值和FeSO4.7H2O。在此基础上运用响应面法中的Box-Behnken设计,拟合得到多元二次方程,并通过对方程的方差分析和方程求解,获得米曲霉产α-淀粉酶的最优发酵培养基为:豆粕粉18.51 g/L、pH值6.39、FeSO4.7H2O 0.0092 g/L、玉米粉60 g/L、K2HPO4.3H2O 2.5 g/L、NaNO34.5 g/L、MgSO4.7H2O 0.8 g/L。发酵水平预测值为839.5 U/mL,试验验证值为843 U/mL,较优化前提高20%左右,且试验值与模型计算值相差+0.4%。     

枯草芽孢杆菌发酵产物有效磷变化及常规营养成分的评定

利用产植酸酶枯草芽孢杆菌为菌种,在由棉粕90g、玉米粉10g组成的发酵底物中接种菌液7.0mL·100g-1;在温度为37℃,时间为72h,底物初水分为30%,初始pH为7.0的条件下进行发酵,评定枯草芽孢杆菌发酵产物中有效磷及常规营养成分的变化。试验发现,通过枯草芽孢杆菌发酵,棉粕源发酵饲料中有效磷含量提高45.5%,差异极显著(P<0.01),植酸磷/总磷降低13.2%,差异显著(P<0.05),植酸酶活性提高103.72U·g-1,淀粉酶提高24.43U·g-1,蛋白酶活性提高23.21U·g-1,棉粕源生物蛋白饲料的营养价值均有不同程度的提高。     

1株产纤维素酶嗜盐放线菌的鉴定、发酵优化及酶学性质的研究

从内蒙古腾格里沙漠红盐湖泥样中分离到一株高产纤维素酶菌株,根据菌株形态特征及分子生物学鉴定,确定为拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis sp.),命名为Nocardiopsis sp.DN-A4.采用单因素筛选和正交试验方法优化产纤维素酶的发酵条件,结果表明最适产酶条件:低粘度CMC 4％ (w/v),明胶0.05 g/100 mL,pH=7.0,NaCl3 g/100 mL,接种量60mL/100mL,装液量80mL/250mL,优化后纤维素酶活力达到1.25 U/mL.部分酶学性质研究表明,酶反应最适温度55℃,pH=7.0,NaCl 0 g/100 mL,该酶具有较强的热、pH及盐度的稳定性,酶反应55℃保温8h,pH=6.0～10.0保温6h,NaCl(0～25) g/100mL保温12 h,酶活力仍保持在80％以上.     

钼营养对药用菊花产量与药用品质的影响

以药用菊花为供试材料,在基质缺钼情况下,叶面喷施0、100、200、300 mg/L钼酸铵,研究钼对药用菊花产量和品质的影响.结果表明,叶面喷施钼肥可提高菊花百花质量、单株花序干质量及折干率,其中喷施200 mg/L钼酸铵效果较好.叶面喷施钼酸铵降低了花序可溶性糖含量,但其蕾期叶片硝酸还原酶(NR)及谷氨酸合成酶(GS)活性及可溶性淀粉含量均明显高于缺钼处理,钼营养提高了蕾期叶片可溶性蛋白含量.喷施低浓度钼肥后花序总黄酮含量为对照的1.06倍,绿原酸以叶面喷施300 mg/L钼酸铵最大,与对照比较增幅达20.14％,木樨草苷和3,5-0-双咖啡酰基奎宁酸质量分数以200 mg/L钼酸铵喷施处理最高.叶面喷施钼肥提高了花序钾积累量,钼肥盈亏影响花序钙和镁的积累,即中浓度钼肥与花序镁含量表现为拮抗作用,缺钼处理菊花花序钼含量(18.65 μg/g)最低,花序铜和锌等元素积累量表明菊花存在钼-锌、钼-铜间协助效应.总之,于药用菊花现蕾前期叶面喷施适宜浓度钼酸铵有助于改善药用菊花的生长,并能适当提高其药用品质.     

施钼对烤烟硝酸盐和亚硝酸盐含量的影响

研究了不同钼肥用量对烤烟叶片硝酸盐和亚硝酸盐含量的影响。结果表明,在一定的范围内,随施钼量的增加,烤烟硝酸盐和亚硝酸盐含量降低,不同部位烟叶硝酸盐的变化规律表现一致。这表明叶面喷施钼酸铵以降低烟叶中硝酸盐和亚硝酸盐含量的方法是可行的,其中,以烤烟团棵期叶面喷施0.5g/kg钼酸铵3次的效果最佳。     

植酸酶的研究及其应用

植酸酶是能降解植酸及其盐的酶。其能提高磷的利用率 ,解除植酸对一些矿物元素如钙、锌、铁、铜等的抗营养效应 ,不仅对动物具有良好的增重效果 ,同时可降低动物磷排泄量 ,减少环境污染。植酸酶可替代饲料中的无机磷 ,但作为饲料添加剂 ,其作用效果受饲料中钙、磷水平及维生素Ｄ含量的影响。现将其研究与应用现状介绍如下。1　植酸酶的来源与性质植酸酶即肌醇六磷酸水解酶 ,它可以通过催化水解反应将磷酸盐从植酸中释放出来 ,因而将其作为饲料添加剂可以达到提高磷利用率的目的 ,又可以降低环境中的磷污染。现已知植酸酶有 3种类型 :肌醇六…     

叶面喷施钼酸铵对谷子光合特性及产量的影响

以张杂谷10号为试验材料,于谷子拔节期分别喷施清水及不同用量(0.75、1.50、2.25、3.00 kg/hm~2)的钼酸铵,在施肥后对谷子农艺性状、光合参数、叶绿素含量及产量构成进行测定,旨在探明钼酸铵对张杂谷10号光合特性及产量的影响,为谷田合理有效施用钼酸铵提供理论依据。结果表明,施用钼酸铵与清水对照相比,叶绿素含量在1.5 kg/hm~2用量下显著升高,株高、叶面积、净光合速率及产量在1.5 kg/hm~2用量下均达到最大值,增产效果明显。在谷子拔节期喷施1.5 kg/hm~2用量的钼酸铵效果最好。