副溶血弧菌对南美白对虾生理生化指标的影响

在自然条件下从患红体病的养殖南美白对虾肝脏内分离出病原菌——副溶血弧菌，将该菌通过肌肉注射的方式，对南美白对虾做感染实验，以探讨副溶血弧菌对南美白对虾生理生化指标的影响。注射弧菌后南美白对虾死亡率与时间、浓度呈正相关，与半致死剂量呈负相关；虾体肌肉、肝脏组织的超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSZ）酶活性随弧菌浓度的增加呈下降的趋势，而过氧化物酶（POD）酶活性呈上升趋势，这可能是应激反应；酯酶同工酶（EST）酶带表现出缺失，苹果酸脱氢酶同工酶（MDH）具有明显的组织特异性，并且两种酶在肌肉组织中表达最强。副溶菌弧菌感染后破坏了虾体的免疫系统，导致免疫机能的损坏，防病、抗病能力下降，进一步导致虾体患病，甚至死亡。     

副溶血弧菌对罗氏沼虾肝胰腺和鳃组织中呼吸相关酶活性及抗氧化酶基因表达的影响

【目的】探讨副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）肝胰腺和鳃组织中呼吸相关酶活性和抗氧化酶基因的影响,以期为罗氏沼虾免疫机理研究和病害防治提供参考依据。【方法】选取规格整齐、健康的罗氏沼虾,分别注射PBS溶液（对照组）和副溶血弧菌（试验组）,在第1、3、6、12、24、48、72和96h统计累计存活率,并取肝胰腺和鳃组织进行呼吸相关酶活性及抗氧化酶相关基因表达测定。【结果】罗氏沼虾感染副溶血弧菌后,随着时间的推移,其累计存活率逐渐下降,在96h累计存活率为72%。感染副溶血弧菌后,其肝胰腺中的ATP合酶、细胞色素C氧化酶和NADH脱氢酶活性随时间延长均呈先降低后上升最后趋于对照组水平的变化趋势,且在6~24h 3种酶活性均显著低于对照组（P<00.05,下同）,之后酶活性逐步上升;活性氧（ROS）含量则呈先上升后下降的变化趋势,且在6~48h显著高于对照组;超氧化物歧化酶（SOD）基因、过氧化氢酶（CAT）基因及谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）基因相对表达量呈先升高后降低再升高的变化趋势。在鳃组织中,ATP合酶、细胞色素C氧化酶和NADH脱氢酶的活性随着感染时间的延长呈先降低后上升至趋于对照组水平,在6~72h 3种酶活性不同时间段表现出显著下降趋势;ROS含量则呈先上升后下降的变化趋势;SOD、CAT和GPX基因相对表达量呈先升高后降低再升高的变化趋势,且均在感染6h显著上调至最大值,其中GPX基因相对表达量在12~48h显著下调低于对照组,并在72h逐渐上调。【结论】副溶血弧菌感染罗氏沼虾后对肝胰腺和鳃组织中的呼吸相关酶及抗氧化酶基因产生显著影响,ROS水平呈上升趋势。虽然罗氏沼虾能通过自我调节呼吸相关酶和抗氧化酶基因促使机体抵御病原体入侵,但超过机体自我调节的限度时会对机体造成损伤。     

3种菊酯类农药对南美白对虾同工酶表型的影响

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对注射不同浓度菊酯类农药的南美白对虾Penaeus vannamei3种组织的酯酶同工酶(EST)和苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)进行了分析比较。结果表明：经农药胁迫后，虾体内各组织同工酶酶带出现明显的变化，在不同浓度下存在明显的差异，并具有明显的组织特异性。由于不同种农药的作用结合位点不同，使得酶带变化规律也不相同，当虾体被注射农药后，EST酶带变化较复杂，而MDH酶带则较稳定。当虾体受到农药胁迫时，可引起虾体无氧代谢加强，有氧代谢和酯类降解代谢减弱，正常的物质代谢平衡被破坏，因而使供给机体的能量减少，机体的免疫力和抵抗外界环境的能力均明显降低；另外，还有可能诱发虾病的暴发或导致虾的大批量死亡。     

不同养殖模式下对虾早期死亡综合症致病菌的动态变化

[目的]为指导南美白对虾高位池的科学养殖提供理论依据。[方法]选取2种养殖模式的南美白对虾高位池塘为试验对象,通过周期性的水样采集研究了虾池水体细菌数量、弧菌数量以及弧菌中非副溶血弧菌和副溶血弧菌比例变化规律与早期死亡综合症发生的相关性。[结果]试验虾池在养殖初期弧菌数量较低,养殖过程中弧菌数量与细菌总数的消长趋势基本一致。当虾池中细菌总数高于2.5×104cfu/ml,弧菌数量高于1.5×103cfu/ml,非副溶血弧菌与副溶血弧菌的比例超过10∶1,虾池内极易发生早期死亡综合症。[结论]该研究结果可用于进行对虾健康养殖的风险评估。     

常见罗氏沼虾、青虾病害诊治(下)

四、弧菌病1.症状弧菌病是由弧菌中的一些菌如副溶血弧菌、拟态弧菌等感染引起的。患病青虾体表无明显症状,少数病虾表面有少量似粘液的物质,体色略呈     

人工感染3种弧菌对鲻鱼血清酶活力的影响

[目的]了解病原菌对鲻鱼非特异性免疫功能的影响,为鲻鱼细菌性疾病的免疫防治提供参考依据.[方法]采用腹腔注射法将等比例混合浓度为4.5× 106 CFU/mL的副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、创伤弧菌（Vibriiovulnificus）和哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）混合菌悬液人工感染鲻鱼,对照组注射等量灭菌生理盐水,分别在感染后第0、1、3、7、11、15、19、23、27、31和35 d采集血样测定血清中酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）活力的变化.[结果]鲻鱼在感染3种弧菌混合悬液后第3d开始出现发病症状,其血清中的溶酶体酶（ACP、AKP和LSZ）活力总体上呈先降低后升高再降低的变化趋势;抗氧化酶（SOD和POD）活力也呈先降低后升高再降低的变化趋势;氨基转移酶（GOT和GPT）活力在感染初期呈急剧上升态势,而后下降回归至正常水平.[结论]鲻鱼受到外源微生物（弧菌混合悬液）刺激后,其体内非特异免疫系统被激活、组织（肝脏）受到损伤,即血清中非特异免疫酶可作为鉴定鱼体健康状况的指标.     

口服免疫多糖(酵母细胞壁)对南美白对虾抗哈维弧菌感染的作用

在南美白对虾(Penaeus vannamei)饲料中分别加100.0、200.0、300.0、400.0和500.0 mg*kg-1Bm的免疫多糖(酵母细胞壁),连续投喂28 d后,通过检测供试虾血清、肝胰腺和肌肉中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和过氧化物酶(POD)的活性及经过哈维弧菌的活菌攻毒,探讨口服不同剂量的免疫多糖(酵母细胞壁)对南美白对虾体内免疫相关酶活性的影响和对人工感染哈维弧菌抗病力的作用.结果表明,在南美白对虾饲料中添加100.0 mg*kg-1Bm的免疫多糖(酵母细胞壁),能显著提高供试南美白对虾血清和肌肉中ACP和ALP活性(t测验,P<0.05),极显著地提高肝胰腺中ACP、ALP和POD的活性(t测验,P<0.01),增强抗哈维弧菌感染的能力.免疫多糖(酵母细胞壁)不同添加剂量的试验组之间则未出现显著差别(t测验,P>0.05).试验结果表明免疫多糖(酵母细胞壁)在南美白对虾饲料中的添加量以100.0 mg*kg-1Bm为宜.     

ClO2对南美白对虾减菌效果及品质的影响

研究不同浓度ClO2暂养液在不同处理时间对南美白对虾虾体的减菌效果及其对虾体色泽和质地的影响。研究结果表明,随着ClO2浓度增加(0～30 mg.kg-1)和处理时间的增长(0～20 min),虾体菌落总数逐渐降低,当处理时间达到20 min时,ClO2对对虾的减菌效果趋于平缓,且20 mg.kg-1(CA组)和30 mg.kg-1(CB组)ClO2暂养液对虾体的减菌效果差异显著。ClO2处理组(CA和CB组)对虾体色泽和质地具有一定的影响,a*和b*值增大,剪切力下降,但CA和CB组差异不显著。综合考虑建议选择30 mg.kg-1ClO2浓度处理南美白对虾20 min作为虾体减菌的预处理工艺。     

虾价反弹 蟹价遇冷 甲鱼走俏

从陕西省铜川水产市场获悉，随着天气转冷，水产品价格整体呈上升趋势，其中，虾价反弹强劲，南美白对虾批发价上涨了50％左右；蟹价由于大闸蟹超产，供大于求导致售价下降了40％。     

Zn~(2+)胁迫对小麦幼苗生理活性影响的研究

以郑州9023为供试材料，采用室内水培方法，研究了不同浓度Zn^2＋（0、30、60、120、240、360mg·L^-1）对小麦幼苗生理活性的影响，初步阐明了Zn^2＋对小麦幼苗的毒害机理。结果表明，在Zn^2＋胁迫下，随处理浓度的升高，小麦幼苗叶片中超氧阴离子自由基（O2^-1）含量、丙二醛（MDA）含量、可溶性糖含量、抗坏血酸过氧化物酶（APX）及过氧化物酶（POD）活性均呈上升趋势，超氧化物歧化酶（SOD）活性呈先下降后上升的趋势；抗坏血酸（ASA）含量、过氧化氢酶（CAT）活性均呈现先上升后下降的趋势，可溶性蛋白和叶绿素含量呈下降趋势。对SOD、POD、CAT同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分析表明，正常情况下，小麦幼苗叶片主要表达Rf值（相对迁移率）分别为0．98、0．96、090．8、0．6、0．48的6条SOD同工酶带；POD同工酶带主要分为5区，至少包括10条同工酶酶带；CAT主要表达2条同工酶带。浓度小于120mg·L^-1的Zn^2＋抑制SOD同工酶的表达，促进CAT同工酶的表达，浓度大于240mg·L^-1的Zn^2＋促进SOD同工酶的表达，抑制CAT同工酶的表达，Zn^2＋诱导小麦幼苗中POD同工酶的表达。Zn^2＋没有诱导新的CAT、SOD和POD同工酶的表达。     

1993年中国对虾暴发性流行病细菌病原学研究

１９９３年中国对虾发生了暴发性流行病。自病虾体内分离出多株细菌，主要是弧菌属和微球菌属。感染实验表明弧菌毒力强，球菌毒力相对弱。未除菌病虾组织浆悬液组比除菌病虾组织浆悬液组死亡快，证明细菌尤其是弧菌可加速暴发性流行病病虾的死亡，１６种不同药物敏感试验结果表明细菌对目前常用抗生素敏感性显降低。     

罗氏沼虾同工酶表达组织差异性及遗传多样性分析

【目的】从生化遗传角度分析罗氏沼虾群体的同工酶基因座及其酶谱表型,明确不同群体的遗传多样性,为其种质资源鉴定及遗传育种研究等提供基础数据。【方法】采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）对罗氏沼虾肌肉、复眼、鳃、心脏和肝胰腺等5种组织中的苹果酸脱氢酶（MDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、山梨醇脱氢酶（SDH）、苹果酸酶（ME）、磷酸葡萄糖变位酶（PGM）、乙醇脱氢酶（ADH）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷氨酸脱氢酶（GDH）、天冬氨酸脱氢酶（AAT）和酯酶（EST）等11种同工酶进行电泳分析,并选取肌肉同工酶对申漕群体、野生群体、抗病群体、生长群体和浙江群体（2017年引进种虾）等5个罗氏沼虾群体进行遗传学研究。【结果】同种同工酶在罗氏沼虾不同组织间所表现出的酶谱总数和酶带颜色（酶活性）存在明显差异,即罗氏沼虾同工酶具有明显的组织差异性;11种同工酶在罗氏沼虾5种组织中存在26个基因座。其中,EST在肌肉中未表达,但在肝胰腺中表达较多;ME在肌肉、复眼、鳃、心脏和肝胰腺等5种组织中均有表达;SOD-2只在肝胰腺中表达;PGM在肝胰腺和心脏中表达较多。罗氏沼虾肌肉中的7种同工酶存在11个基因座,有3个基因座（SDH-1、PGM-3和LDH-1）呈多态性,多态位点比例为27.27%。5个罗氏沼虾群体的平均预期杂合度在0.1006~0.1416,平均观测杂合度在0.1143~0.1762,Hardy-Weinberg遗传偏离指数（0.1362~0.2444）均为正值,即偏离Hardy-Weinberg平衡。【结论】罗氏沼虾同工酶具有明显的组织差异性,表现为不同组织间的酶谱总数和酶带颜色（酶活性）存在明显差异,因此同工酶可作为研究罗氏沼虾遗传多样性的一种生化遗传标志。5个罗氏沼虾群体均处于杂合子过剩状态,其遗传变异水平较高。     

干扰COX2基因对罗氏沼虾生长及能量代谢酶活性和基因表达的影响

【目的】从能量代谢的角度探索罗氏沼虾生长缓慢的原因,为分析和解决罗氏沼虾生长缓慢问题提供参考。【方法】利用合适浓度的siRNA抑制罗氏沼虾肝胰腺和肌肉中COX2基因的表达,分析肝胰腺和肌肉中线粒体呼吸链相关基因表达量和酶活性以及ATP含量的变化;通过持续抑制罗氏沼虾COX2基因的表达,分析其对罗氏沼虾生长的影响。【结果】siRNA对罗氏沼虾线粒体编码的COX2基因表达有抑制作用,在一定浓度范围内,随着siRNA浓度的增加抑制的作用越明显,超过一定的浓度范围的siRNA抑制作用不明显,浓度为2.0μg/g的siRNA与0.8、1.5、3.0μg/g的siRNA的抑制作用相比效果最好。罗氏沼虾注射siRNA后,肝胰腺和肌肉中的COX2基因表达量下调,ND1和ATP6基因表达量随之下调,COX、ATP合酶、CCR和ND的酶活性显著下降（P<0.05,下同）,ATP含量降低。连续注射siRNA能持续抑制罗氏沼虾肝胰腺和肌肉中COX2基因的表达,随着siRNA注射次数的增加,抑制COX2基因表达的作用时间也增加,在注射4次2.0μg/g siRNA虾的肝胰腺和肌肉中,COX2、ND1和ATP6的基因表达量持续下调的时间最长,COX、ATP合酶、CCR和ND的酶活性能长期保持在显著低于对照组的水平,ATP含量也显著低于对照组。随着肝胰腺和肌肉中COX2基因表达被抑制时间的增加,罗氏沼虾的体长与体重增加量越小,养殖28d后,注射1次siRNA和注射4次siRNA的虾的体重净增长分别为0.59和0.34g。【结论】当参与ATP合成的酶的基因表达量和酶活性长时间受到抑制时,会抑制罗氏沼虾的生长。     

1993年中国对虾暴发性流行病病原初步研究

在患暴发性流行病病虾肝胰腺及中肠超薄切片中看到有包膜的杆状病毒颗粒，长２５０￣２７０ｎｍ、宽７０ｎｍ左右。将除菌病虾组织浆悬液注射健康虾，可引起发病死亡，症状与自然发病虾相仿。因此，杆状病毒是中国对虾暴发性流行病的病原。同时在活检时发现病虾肝胰腺及心脏压片中有较多细菌，将未除菌病虾组织浆悬液注射健康虾，比注射除菌病虾组织浆悬液的虾死亡早而迅速，所以受病毒感染后再继发细菌感染将加快病情恶化和死亡。     

两种致病菌对杂交东方鲀非特异性免疫和抗氧化指标影响

为研究迟钝爱德华氏菌和哈氏弧菌感染对杂交东方鲀"冀研一号"(菊黄东方鲀♀×红鳍东方鲀♂)非特异性免疫和抗氧化指标影响,分别对杂交东方鲀腹腔注射PBS、迟钝爱德华氏菌和哈氏弧菌,注射后6、12、18、24和36h分别取肝胰脏,测定其谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活力。结果表明,在攻毒后36 h内,注射迟钝爱德华氏菌"冀研一号"东方鲀肝胰脏总超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶酶活均极显著升高(P0.01);攻毒后36 h内谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽均表现升高趋势。感染哈氏弧菌后,肝胰脏中谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶活力均高于对照组;谷胱甘肽含量表现升高趋势。试验鱼体感染致病菌后,引起肝胰脏非特异性免疫和抗氧化指标变化。     

花斑副沙鳅七种同工酶的组织特异性表达

采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳方法,对花斑副沙鳅(Parabotia fasciata Dabry)的鰓、心、肝胰脏、肠、肾、肌肉、眼、脑8种组织中的过氧化氢酶(CAT)、酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和醇脱氢酶(ADH)进行了分析。结果表明,花斑副沙鳅的7种同工酶表达具有明显的组织特异性,8种组织中检测出3种CAT同工酶、8种EST同工酶、4种LDH同工酶、8种MDH同工酶、10种POD同工酶、10种SOD同工酶、10种ADH同工酶表达。其中,CAT-3、EST-7仅在肝胰脏表达,LDH-4、SOD-9、ADH-3仅在肾表达。     

工厂化育苗养殖体系内细菌数量动态变化研究

[目的]探寻工厂化育苗中细菌的动态变化规律,为对虾健康养殖提供科学依据。[方法]对中国对虾育苗期养殖体系中的异养菌、弧菌、致病性副溶血弧菌进行监测。[结果]异养菌、弧菌和致病性副溶血菌数量都是对虾受精卵中高,无节幼体中最低,而后逐渐升高。在整个育苗期,对虾幼体中异养菌和养殖水体中弧菌增加1个数量级,对虾幼体中弧菌和养殖水体中异养菌均增加2个数量级。活饵中异养菌和弧菌数量很大,致病性副溶血弧菌量很低。养殖体系中幼体与水体中的异养菌和弧菌的相关系数分别为0.704和0.840;活饵中异养菌、弧菌与对虾幼体和养殖水体相关性很低或呈负相关。[结论]育苗期养殖水体与对虾幼体中细菌数量变化具有动态联系,严格控制养殖条件副溶血弧菌很难引起幼体疾病爆发,饵料中细菌数量与养殖系统中细菌数量无明显相关性。     

饲料中不同铜源和水平对凡纳滨对虾生长、免疫和组织铜含量的影响

在凡纳滨对虾Litopenaeus vannam ei的配合饲料中分别添加两种形式的铜——硫酸铜和蛋氨酸铜,添加量分别为10、30、50 mg/kg,饲喂凡纳滨对虾8周,并于试验的第4周末、第8周末取对虾称重,同时采集对虾的血清、肝胰脏和肌肉,测定其血清酚氧化酶(PO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及肝胰脏和肌肉中铜的含量。结果表明:1)4周时,硫酸铜各组虾的增重率和对照组无显著差异,蛋氨酸铜各组虾的增重率显著高于对照组,添加量为10 mg/kg时,铜源之间增重率差异极显著;8周时,硫酸铜各组虾的增重率显著高于对照组,蛋氨酸铜各组虾的增重率极显著高于对照组,添加量为30 mg/kg时,铜源间增重率差异显著。2)两种铜源的各添加水平对对虾的成活率无影响。3)硫酸铜各组虾的PO、SOD值显著高于对照组,蛋氨酸铜各组虾的PO、SOD值极显著高于对照组;添加水平为10 mg/kg时,两种铜源对PO和SOD的影响差异极显著;添加水平为30 mg/kg时,两种铜源对SOD的影响差异显著。4)两种铜源的各添加水平对肌肉中的铜含量无显著影响;蛋氨酸铜各组虾的肝胰脏中铜含量极显著高于对照组,硫酸铜各组表现为随添加水平的增加,虾肝胰脏中铜含量极显著增加,10、30、50 mg/kg添加水平下,铜源对肝胰脏铜含量有极显著影响。对对虾生长、酶活、组织中铜含量的统计结果表明:铜源之间存在显著差异,蛋氨酸铜的营养效果好于硫酸铜;饲料中蛋氨酸铜的添加量为10 mg/kg时,即可满足对虾生长、免疫的需要。