霞水母胶原蛋白活性肽对小鼠免疫功能的影响

1材料与方法 1．1材料 1．1．1霞水母胶原蛋白活性肽。由霞水母酶解提取、经冷冻干燥得到,为淡棕色粉末。由江南大学医药学院药物化学与药物分析实验室制备（具体方法参见已向国家申请的专利200710171188．6）。     

衡阳紫色土丘陵坡地恢复过程中土壤性质的变化及其关系

[目的]为了探讨衡阳紫色土丘陵坡地恢复过程中土壤性质的变化规律。[方法]采用时空互代法,研究衡阳紫色土丘陵坡地不同恢复阶段O～40cm土层的土壤性质变化及其关系。《结果]土壤性质存在明显差别,从裸地阶段（I）、草本群落阶段（Ⅱ）、灌木群落阶段（HI）至乔木群落阶段（1g）土壤有机碳（SOC）、全氮（TN）、碱解氮（AN）和阳离子交换量（CEC）显著增加（P〈0．05）,容重（BD）与pH显著减小（P〈0．05）。微生物总数显著增加（P〈0．05）,其中细菌数量显著增加（P〈0．05）,真菌数量与放线茵数量显著减小（P〈0．05）;相关分析表明,土壤细菌数量与SOC、TN与AN呈极显著正相关（P〈0．01）,与CEC呈显著正相关（P〈0．05）;真菌数量与SOC与TN呈显著正相关（P〈0．05）,与BD呈显著负相关（P〈0．05）;放线菌数量与BD呈显著负相关（P〈0．05）。URE、INV、APE酶活性显著增强（P〈0．05）,CAT活性显著减弱（P〈0．05）;相关分析表明,URE、INV、APE活性与SOC、TN、AN、CEC显著或极显著正相关（P〈0．05或P〈0．01）,与BD与呈显著负相关（P〈0．05）;CAT与BD呈显著正相关（P〈0．05）,与SOC呈显著负相关（P〈0．05）。[结论]研究结果可以丰富该区域恢复生态学的内容,为衡阳紫色土丘陵坡地生态系统的植被恢复与重建提供一定的理论依据。     

草本刺嫩芽根多糖对小白鼠抗氧化作用的研究

[目的]研究草本刺嫩芽根多糖的抗氧化作用。[方法]建立小鼠动物模型,观察草本刺嫩芽根多糖对模型小鼠抗氧化功能的作用,检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性及丙二醛（MDA）的含量。[结果]草本刺嫩芽根多糖可降低肾、血清中丙二醛（MDA）含量（P〈0.05或P〈0.01）,可增加超氧化物歧化酶（SOD）的活性（P〈0.05）与过氧化氢酶（CAT）的活性（P〈0.05或P〈0.01）。[结论]草本刺嫩芽根多糖对模型小鼠具有抗氧化作用。     

Caffeoyl Glycoside对小鼠免疫细胞功能的影响

本实验室从胡黄连根茎分离到1，6-di-O-caffeoyl-β-D-glucopyranoside单体Caffeoyl Glycoside（CG），体外试验测定其对小鼠免疫细胞功能的影响。通过MTT法检测CG对Balb／c小鼠脾淋巴细胞增殖，NK细胞对K562细胞杀伤活性的影响，以及小鼠腹腔巨噬细胞（PMφ）能量代谢水平；CG对PMφ吞噬中性红能力的影响。CG在一定剂量范围内单独或者协同非特异性丝裂原（ConA或LPS）作用均能够显著增强小鼠脾淋巴细胞、PMφ的增殖能力（P〈0．05或P〈0．01），CG单独作用就能显著提高NK对K562细胞的杀伤活性（P〈0．05或P〈0．01）。CG在体外对小鼠主要免疫细胞的增值和功能方面具有显著的促进作用（P〈0．05或P〈0．01）。研究结果显示CG具有特异性与非特异性的免疫增强作用。     

东北红豆杉抗炎作用研究

[目的]研究东北红豆杉的抗炎作用。[方法]采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、甲醛致小鼠足肿胀的方法,以阿司匹林为阳性药对照,将东北红豆杉水煎液分为低、中、高剂量组（0．5、1．0、2．0g／ml）,观察东北红豆杉水煎液对小鼠的抗炎作用及其与剂量的关系。[结果]东北红豆杉水煎液低剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀及甲醛致小鼠足肿胀没有显著抑制作用（P〉0．05）;中、高剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀及甲醛致小鼠足肿胀均有显著抑制作用（P〈0．05）。[结论]东北红豆杉水煎液具有一定的抗炎作用。     

几种实验动物垫料的物理特性比较

[目的]比较研究刨花、玉米棒芯、蒲草叶垫料的吸水、吸氨及保暖等性能,为开发新型优质实验动物垫料提供科学依据。[方法]以24h吸水量为衡量垫料吸水能力的标准,时Co^60-γ辐射灭菌、高压蒸汽灭菌、干热灭茵和不做灭菌处理的垫料进行吸水性试验;用GS-3型大气采样机采集笼内及房舍内氨气,用纳氏比色法在557型分光光度计测定并计算所采样品的氨浓度;用半导体温度计测定小鼠巢温及离巢后空巢余温。[结果]蒲草垫料的吸水能力高于刨花垫料（P〈0．05）和玉米棒芯垫料（P〈0．01）,且刨花垫料的吸水能力高于玉米棒芯垫料（P〈0．05）。小鼠饲养换笼后第4天及第7天笼内氨浓度,刨花垫料高于蒲草垫料（P〉0．05）、低于玉米棒芯垫料（P〈0．05）,但蒲草垫料显著低于玉米棒芯垫料（P〈0．01）。在（14．4±2．1）℃室温下．小鼠离巢后5、10、15min巢内余温,蒲草垫料均高于刨花垫料（P〉0．05）及玉米棒芯垫料（P〈0．05）。[结论]蒲草垫料是一种应用前景较好的新型垫料。     

肠炎沙门氏菌对感染鸡部分血液生化指标的影响

[目的]探索肠炎沙门氏菌对感染鸡部分血液生化指标的影响。[方法]以肠炎沙门氏菌感染12日龄的健康三黄肉鸡为材料,在感染后不同时间采集其颈静脉血,分离血清用于生化指标检测。[结果]感染鸡血清AST、ALT、LDH和GLU活性呈先升高后降低的变化趋势。血清ALP活性、ALB和GLO含量总体呈先降低后升高的变化趋势。除TP无显著变化外,感染鸡血清其他7项生化指标都发生显著变化（P〉0．05）。其中ALT、AKP、LDH和GLO活性在感染后显著升高（P〈0．01）,ALB活性显著降低（P〈0．05）。[结论]该研究为揭示肠炎沙门氏茼感染病的发生、发展规律及制定综合防治措施提供了依据。     

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对小鼠免疫功能及肠道内环境的影响

90只清洁级昆明系小鼠,随机分为5组,预饲基础日粮一周后,各组分别灌胃：生理盐水（对照组,CK）、伴大豆球蛋白液（Ⅰ）、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液（Ⅱ）、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液提纯B组分（Ⅲ）、伴大豆球蛋白盐酸水解液（Ⅳ）,除对照组外,各处理组灌胃液体总含氮量相等,实验期21d。结果显示：与对照组相比,第3周Ⅱ组和Ⅲ组每只小鼠日均采食量较对照组显著下降,分别降低8．75％（P〈0．05）和9．28％（P〈0．05）;Ⅲ组小鼠胸腺相对质量极显著下降,降低了10．40％（P〈0．01）,肠黏膜sIgA水平提高45．49％（P〈0．01）,大肠食糜中6-磷酸果糖酮糖酶（F6PPK）活性极显著提高（P〈0．01）,pH值下降了1．80％（P〈0．05）,肠球菌数显著下降（P〈0．05）。实验结果表明水解肽作为腔内信号分子可能与肠道内相关因素有着多层次调控关系,共同促进宿主的健康。     

代森锰原药的致突变性试验研究

[目的]探讨代森锰原药的致突变性。[方法]用KM小鼠进行小鼠骨髓多染红细胞微核试验和小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,以及鼠伤寒沙门氏菌回复突变（Ames）试验。[结果]在小鼠骨髓多染红细胞微核试验和小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验中．阴性对照组与阳性对照组比较,差异有显著性（P〈0．01）;各剂量组与阴性对照组比较,差异均无显著性（P〉0．05）,且均低于阳性对照组（P〈0．05,P〈0．01）。在Ames试验中,4株试验菌在0．1～1．0mg／皿的试验剂量下（活化或非活化）均没有引起自发回变数2倍增加。[结论]根据《农药登记毒理学试验方法》中的评定标准,小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验和鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）在所选剂量范围内结果均为阴性,代森锰原药未呈现致突变性。     

灰树花多糖对小鼠免疫功能的影响

[目的]探讨灰树花（Grifola frondosa）多糖对小鼠的免疫功能的作用。[方法]将30只昆明系小白鼠随机分为3组,每组10只,试验组分别灌喂300（低剂量组）、600 mg/kg（高剂量组）灰树花多糖15 d,对照组灌胃蒸馏水,研究灰树花多糖对小鼠免疫器官增重和血液生化指标的影响。[结果]低剂量组小鼠胸腺指数显著低于对照组（P〈0.05）;试验组（低剂量组和高剂量组）脾脏指数分别极显著或显著高于对照组（P〈0.01,P〈0.05）;低剂量组小鼠血清总蛋白和球蛋白水平分别显著或极显著高于对照组（P〈0.05,P〈0.01）;低剂量组血清总胆固醇水平显著低于对照组（P〈0.05）;低剂量组血清免疫球蛋白IgG含量显著高于对照组（P〈0.05）。[结论]低剂量灰树花多糖组能有效提高小鼠脾脏质量,提高小鼠血清抗体水平,降低血清总胆固醇水平,具有明显增强小鼠免疫能力和降低血脂的功能。     

林蛙皮活性肽对小鼠免疫功能影响的试验研究

[目的]探讨林蛙皮生物活性肽对正常小鼠免疫功能的影响。[方法]将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、林蛙皮活性肽低、中、高剂量组,每组10只,连续灌胃给药28 d后,采用ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,检测T淋巴细胞增值,并通过溶血空斑试验和血清溶血素试验检测林蛙皮活性肽对小鼠体液免疫功能的影响。[结果]林蛙皮生物活性肽可明显促进ConA诱导的淋巴细胞增值,增加抗体生成细胞数量,增强血清溶血素抗体效价水平。[结论]林蛙蛙皮生物活性肽对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能均具有增强作用。     

鸡胸软骨胶原的提取及其结构表征

[目的]提取鸡胸软骨中的胶原,并对其进行检测。[方法]以鸡胸软骨为原料,采用酶法提取其中的胶原,并进行紫外光谱检测、傅里叶变换红外光谱检测、SDS-PAGE、氨基酸分析、圆二色谱检测及肽指纹图谱检测。[结果]胶原的提取率是0.11%(以湿重计),紫外最大吸收波长为217 nm;SDS-PAGE显示,胶原含有一条较粗的α带和一条较细的β带;氨基酸分析显示,羟脯氨酸为99残基/1 000氨基酸残基。[结论]该方法提取得到的胶原是典型的Ⅱ型胶原,且很好地保持了其天然结构,具有较高的纯度。     

狭鳕鱼皮胶原肽对过氧化氢诱导的人成骨细胞氧化损伤作用

[目的]复制过氧化氢诱导人成骨细胞氧化损伤模型,探讨狭鳕鱼皮胶原肽保护作用机制。[方法]以人成骨细胞为研究对象,将对数生长期的细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2损伤组、胶原蛋白肽低(100μg/m L)、中(300μg/m L)、高(600μg/m L)浓度组、阳性对照组(300μg/m L维生素E),CCK-8法检测成骨细胞的存活率,酶联免疫法检测细胞培养液中SOD、MDA的含量,PCR技术检测Foxo3amRNA的表达水平,Western blot技术检测Sirt1、Foxo3a的蛋白表达水平。[结果]与模型组相比,胶原肽组细胞存活率及SOD的水平升高,MDA含量下降,Foxo3amRNA及蛋白表达水平下降,Sirt1蛋白表达水平上升。[结论]300μmol/L H_2O_2可成功复制成骨细胞氧化损伤模型;一定浓度的胶原蛋白肽能降低MDA的含量,提高SOD水平,并具有抗氧化损伤功能,胶原肽对成骨细胞的保护作用可能与下调Foxo3a和上调Sirt1的表达水平有关。     

鳕鱼皮胶原蛋白酶解液的制备及抗氧化研究

[目的]利用酶解法从鳕鱼皮中提取胶原蛋白肽,研究其抗氧化能力。[方法]以鳕鱼鱼皮为原料,采用胃蛋白酶进行酶解,通过正交试验研究pH、水解温度、加酶量及水解时间4个因素对酶解鳕鱼皮的影响,确定胃蛋白酶酶解鳕鱼皮的最佳条件,并采用试剂盒法对酶解产物进行抗氧化活性研究。[结果]各因素对酶解鳕鱼皮的影响为水解时间〉水解温度〉加酶量〉pH,胃蛋白酶酶解鳕鱼皮的最佳工艺条件为：加酶量4%、温度37℃、pH 3、时间3 h。此条件下,蛋白质水解度可达到6.91%。胃蛋白酶酶解鳕鱼皮得到的胶原肽粗品具有一定的抗氧化能力,并对超氧阴离子自由基具有较强的清除作用。[结论]该研究为开发新的抗氧化剂提供科学参考。     

人工养殖中华鲟鱼皮中胶原蛋白提取工艺研究

[目的]研究确定人工养殖中华鲟鱼皮中胶原蛋白的酶法提取工艺。[方法]以胶原蛋白得率为指标,采用单因素试验,考察各因素对人工养殖中华鲟鱼皮中胶原蛋白得率的影响。[结果]胃蛋白酶为最适宜提取酶,人工养殖中华鲟鱼鱼皮中胶原蛋白提取的最佳条件为料液比1∶10 g/ml,加酶量2.0%,提取时间6 h,胶原蛋白的得率为82.7%,含量为49.9%。[结论]该提取工艺稳定,提取率高,适用于人工养殖中华鲟鱼鱼皮中胶原蛋白的提取。     

PMC47-8株OmpH蛋白结构的初步预测

[目的]初步预测牦牛源多杀性巴氏杆菌C47-8株(PmC47-8)OmpH蛋白结构特点。[方法]对PmC47-8型菌株OmpH基因的测序结果进行在线BLAST比对、信号肽预测、二级结构预测及蛋白特性等方面的分析。[结果]PmC47-8株OmpH基因与已公布的81条OmpH基因相似性在84%～99%间;OmpH蛋白序列中存在信号肽,切割位点在第20号和21号氨基酸残基之间;OmpH蛋白二级结构预测中,折叠结构占49.8%,环状结构占50.2%;推测OmpH蛋白有7个O型糖基化位点,分别是位于第2、45、48、330、716、721、723号位的氨基酸残基,2个N型糖基化位点,即第15和35号位的氨基酸残基。[结论]该蛋白可能存在于细胞菌膜的外侧,而非跨膜蛋白。     

黄粉虫抗菌肽的生物学性质及初步分离纯化

［目的］探索黄粉虫抗菌肽的生物学性质。［方法］通过菌液注射对黄粉虫幼虫进行抗菌肽的诱导,对其热敏感性、反复冻融的稳定性、抑菌活性的适宜pH值及部分抑菌谱进行测定,并对黄粉虫血淋巴抗菌肽进行了初步的分离纯化。［结果］黄粉虫抗菌肽热稳定性好,反复冻融对其活性影响不大,显示出一定的抗酸碱性能,在pH为5时抑菌效果最佳,对测试的6种动物病原细菌均有不同程度的抑制作用,特别是对猪致病性大肠杆菌和猪链球菌,具有较强的抑菌活性。经SephadexG-25凝胶过滤柱层析分离得到3个活性峰,表明黄粉幼虫血淋巴中有多个抗菌活性组分。［结论］该研究为黄粉虫抗菌肽的利用奠定了理论基础。     

革胡子鲶生长激素成熟肽cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

[目的]构建革胡子鲶生长激素基因原核表达体系。[方法]采用PCR方法,扩增得到了革胡子鲶生长激素基因成熟肽的cDNA序列,将该序列克隆至原核表达载体pRSET-A,构建重组质粒pRSET-mGH,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。[结果]革胡子鲶生长激素成熟肽cDNA序列全长534 bp,编码1个由178个氨基酸残基组成的生长激素成熟肽,分子量为20.28 kDa,等电点为5.93。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的目的融合蛋白分子量为27.41 kDa,主要以非可溶性的包涵体形式存在于菌体沉淀中。目的融合蛋白的表达量高达细菌沉淀蛋白总量的36.8%。[结论]该研究为革胡子鲶生长激素的产业化开发和应用奠定了基础。     

有机酸提取草鱼皮胶原蛋白的工艺研究

[目的]研究草鱼皮基本成分及鱼皮胶原蛋白的提取工艺。[方法]通过正交试验确定有机酸提取草鱼胶原蛋白的最佳提取工艺条件,并对所提取的胶原蛋白进行紫外光谱分析币口氨基酸组成分析。[结果]结果表明,采用0.5mol/L的柠檬酸,料液比为1：10,溶胀时间为24h时,可充分提取草鱼皮中的胶原蛋白,提取率可达92．88％。[结论]该研究可为开发草鱼的附产物提供科研依据。