耐高温酒精酵母菌驯化与筛选

选取发酵良好的高温玉米醪酒精发酵液,通过富集培养、高温驯化与筛选,得到两株优良菌株,在35 ℃高温下酒精发酵性能优于拉斯2号酵母菌和耐高温酒精活性干酵母菌.     

Tn5转座诱变选育冠菌素耐高温生产菌株及其发酵条件研究

利用双亲接合的方法将含有Tn5转座子的质粒pRL1063a导入丁香假单胞菌大豆致病变种（Pseudomonas syingae pv. glycinea）PG4180中,在含有卡那霉素和链霉素的MG平板上筛选抗性接合子。通过诱变,从874个突变株中筛选得到2株高温下产生冠菌素的突变株MFB132和MFB141。进而对菌株MFB141的发酵条件进行了优化,其最佳发酵条件为：2%葡萄糖为碳源,0.1%氯化铵为氮源,培养基初始pH为6.8,装液量为50 mL / 500mL,接种量为2%,发酵温度由原来的18℃上升到28℃,而发酵时间由原来的168 h缩短到108 h。在最优化条件下,出发菌株28℃下冠菌素产量仅为1.8 mg/L,而突变株MFB141在28℃下的产量达到37.66 mg/L,大约是出发菌株的21倍。     

鸡粪便生产酵母蛋白试验研究

利用鸡粪进行酵母蛋白生产,结果筛选到特别适合在鸡粪中生长的并且具有较高产量优势的酵母菌2株;筛选到有较强分解纤维素能力的纤维素分解菌2株。后将收集的鸡粪经过除渣、晒干、高温灭菌(121℃,30min)等预处理,按先接种纤维素分解菌,24h后再接种酵母菌的方法,经过37℃6d的联合发酵,待晾干后可制成颗粒饲料。     

高温木质纤维素降解菌的筛选鉴定及其堆肥应用

为解决畜禽粪便堆肥发酵启动难、木质纤维素降解不充分等问题,筛选能在高温(50～70℃)堆肥中高效降解木质纤维素的高温降解菌株,并评估其在牛粪-秸秆堆肥应用效果.从高温时期堆肥样品中筛选能在50、60和70℃高温下生长、产酶的高温降解菌株.通过水解圈、秸秆崩解、纤维素酶活测试试验,筛选出BS40-4菌株,通过形态学观察和16S rRNA测序法,确定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.该菌株的堆肥应用效果结果表明,接种BS40-4菌株的处理具有发酵启动快、升温迅速、高温持续时间长、木质纤维素降解充分等优势,可有效提高堆肥发酵效率.     

酸马奶发酵中乙醇含量变化研究

从3个国家4个地区的酸马奶中共分离筛选出多株酵母菌，并筛选出3株酵母菌在实验室条件下与乳酸菌进行混合发酵制成酸马奶，测定发酵过程中的乙醇含量变化。结果表明，在发酵过程中乙醇含量逐渐上升，酵母菌与乙醇含量、酸度、风味之间相互影响，3株酵母菌及其组合的发酵能力各有不同。同时通过测定成熟酸马奶在4℃下保存时酵母菌的活菌数数量，了解酵母菌在酸马奶中低温保存下的生长情况。     

1株降解秸秆高温菌的分离、鉴定及降解能力

为分离得到高温高效降解菌株,促进作物秸秆快速腐解还田,解决秸秆资源的高效利用、培肥土壤和保护生态环境问题,从水稻秸秆中筛选分离出1株高温菌,具有降解农作物秸秆的能力。该菌株经鉴定为嗜热踝节菌,其最佳降解条件为:发酵时间15 d,发酵温度为55℃,高温菌株用量2 m L。在上述条件下,纤维素含量由初始的33.13%下降到25.92%,木质素含量从最初的12.65%下降到8.57%。     

低温型复合腐熟剂的研制及其对牛粪堆肥的处理效果

为了解决冬季(5~10℃)低温下牛粪堆肥发酵难以起温和缩短牛粪堆肥发酵周期,采用低温诱导和纤维素酶活对比方法从牛粪堆肥样品中筛选到1株耐低温菌株D4;采用对比试验研究了低温菌株对牛粪堆肥的起温效果,并将低温菌株与筛选到的纤维素酶活高的菌株制备了低温型复合腐熟剂,在有机肥厂测定了低温型复合腐熟剂的堆肥效果。结果表明:筛选到的能够在5~10℃下迅速繁殖的菌株D4,在冬季堆肥发酵中起温到25℃只需24 h。将筛选到的纤维素酶活较高的细菌X2、X3和真菌Z1与低温菌株D4混合制备成低温型复合腐熟剂,该腐熟剂在低温下使牛粪堆肥起温时间加快24 h,提前2 d进入高温期,使用低温型复合腐熟剂的堆肥生产时间比使用市售产品RW促腐剂的堆肥生产时间提前5 d,缩短了堆肥发酵周期。     

野生型乳酸菌的分离·筛选及鉴定

[目的]研究从传统乳制品中分离鉴定出乳酸菌,并对其发酵性能进行简单筛选。[方法]以10份传统自制酸乳食品为样品,对发酵性能优良的乳酸菌进行了分离、鉴定和产酸性研究。[结果]样品中共分离出55株乳酸菌,经凝乳试验筛选出27株凝乳效果较好的乳酸菌,鉴定为有乳杆菌属13株、乳球菌属2株和肠球菌属8株。将凝乳最快的2只杆菌SC1、SC4和1只球菌EB1以及按1∶1复配的SC1+EB1和SC4+EB1 5个样品发酵复原乳,分别测定了这5种发酵剂在37和42℃下发酵2～9 h产酸的速率。结果表明,分离得到的菌种37℃下产酸速率都大于42℃下的;且相比单个菌种,复配后的菌种发酵的酸乳产酸速率在37和42℃下都属于中速,但最终酸度最适合饮用,口感最佳。[结论]研究可为以后挑选出优良的野生菌种提供参考。     

酿酒酵母的紫外诱变选育及发酵条件研究

以果园土为菌种来源,采用平板分离法得到5种酵母菌,对其进行紫外线诱变,筛选出7株酵母菌突变株,通过测定突变株的发酵性能,从中筛选出1株液化酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力及发酵力均较好的酵母突变株N4-4,其发酵液化酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力和发酵力比对照菌株分别提高了6.7%、7.5%、8.1%和39.0%,通过单因素和正交试验确定该突变株的最佳发酵条件。结果表明,在30℃、120 r/min的培养条件下,突变株最佳发酵条件为3%葡萄糖、3%(NH4)2SO4、p H 5.0、3%接种量(V∶V)。     

鸡粪中具有产酒精能力酵母的初步筛选

[目的]筛选能发酵产酒精的酵母茵。[方法]在鸡粪样品中经过初筛、复筛,以及生理生化试验和发酵试验,确定所筛选的酵母菌株产酒精的能力,并对所筛选出菌株的适宜生长条件做初步研究。[结果]共筛选出4株可发酵菌株：HY-1、HY-2、HY-3和HY．4,其中HY-1产酒精能力最高。[结论]HY-1菌株的适宜生长条件为：pH值6．5,温度30℃,最适碳源为葡萄糖。该茵株的致死温度为50℃。在最适奈件下进行HY-1的酒精发酵试验,测得发酵液中的酒精度达6．90％。     

3株被孢霉的鉴定及其生物学特性研究

从土壤中分离获得3株被孢霉,对其营养、温度、pH等生物学特性进行研究,结果表明：3个菌株间生物学特性存在显著差异。3个菌株的适宜氮源均为蛋白胨,1、2,3号菌株适宜碳源依次为葡萄糖、淀粉、蔗糖;1号菌株和3号菌株的适宜生长温度均为5℃,2号菌株的适宜生长温度为30℃;3个菌株在pH4—9环境下均能生长,适宜pH为7。由ITSrDNA分子鉴定确定3株菌均为高山被孢霉。     

不同环境条件下联合共生固氮菌对小麦种子生长的影响

从13株小麦根际筛选得到3种联合共生固氮菌,通过单因素批次试验确定了不同菌种的培养时间、温度、pH、葡萄糖浓度及氮素浓度的适宜范围,得出单个菌株和组合菌组生长效果最佳的实验条件,并进一步测定单个菌株和组合菌组对小麦种子生长状况的影响。研究显示,在pH 7,温度35 ℃,NaCl浓度5%,葡萄糖浓度10%,氮素浓度3 g·L^-1的条件下培养36 h时,组合菌组作用于小麦种子的效果优于单个菌株的作用效果,相较于空白组,发芽率平均提高了4%,发芽势、发芽指数也均有所提高。组合菌组能更好地适应多变的环境,稳定发挥作用,有利于获得高产。     

海洋源高产葡萄糖氧化酶细菌的筛选和主要酶学性质

从海洋环境中筛选高产葡萄糖氧化酶的海洋细菌, 为生产葡萄糖氧化酶提供新的菌种资源。采集海泥、海水及珊瑚样品,采用亚甲基蓝平板显色培养的方法初步分离产酶细菌,再对分离菌株进行显色培养,挑选产酶优势菌株,用液态摇瓶发酵的方法测定优势菌株的产酶能力,然后检测温度及酸碱度对酶活性的影响,并对优势菌株进行形态鉴定、生化鉴定以及16S rDNA基因序列鉴定。从海泥样品中初筛得到几株产葡萄糖氧化酶的细菌,其中菌株MS-4产酶活力最高,该菌在常规LB液体培养条件下葡萄糖氧化酶活力达到8.8 U·mL^-1;所产酶最适作用温度为14 ℃,最适pH为7.0,在25 ℃以下活性稳定;经过综合鉴定MS-4是蜡状芽孢杆菌,其中生化鉴定和基因序列鉴定的结果显示,该菌与蜡状芽孢杆菌的相似度分别为98.8%和100%。实验结果说明,MS-4具有相对较高的产葡萄糖氧化酶能力,可作为低温食品保鲜用葡萄糖氧化酶的生产用菌进行开发和研究。     

热胁迫对大肠杆菌细胞膜和膜蛋白的影响

【目的】以大肠杆菌ATCC43889为试材,研究热胁迫处理对其细胞膜和膜蛋白的影响,为高温杀菌技术在食品工业中的应用奠定理论基础。【方法】研究ATCC43889分别经50℃、60℃和70℃热胁迫处理15 min并转接10次培养后,获得的3种抗热性ATCC43889菌株的细胞膜和膜蛋白变化。采用扫描电子显微镜分别观察原始对照菌株和3种抗热性菌株个体形态的变化;采用96孔微量酶标板法测定各菌株生物被膜生成能力的强弱;用气相色谱法测定各菌株细胞膜脂肪酸组成的变化及其差异;用差示扫描量热法测定各菌株细胞膜磷脂相变温度的变化;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法检测各菌株外膜蛋白表达的变化。【结果】大肠杆菌ATCC43889分别经50℃、60℃和70℃各10次热胁迫处理并转接10次培养后,其个体形态变化明显,经50℃热胁迫后,部分菌株由球状体变为长杆状;经60℃热胁迫后的菌株个体形态较50℃热胁迫处理的菌株细长;经70℃热胁迫处理后大部分菌株变成了更细长的杆状,大量的菌株聚集在一起,菌体表面呈凸凹不平的无规则形态。随着热胁迫温度的提高,ATCC43889抗热性菌株的生物被膜生成活力增大,其生物被膜生成能力增强,3种抗热性菌株的生物被膜生成能力与对照组相比差异显著（P<0.05）,60℃和70℃下获得的2种抗热性菌株的生物被膜生成能力差异不显著（P>0.05）。与对照的原始菌株相比,经过50℃、60℃和70℃各10次热胁迫处理并转接10次培养的菌株,缺失了3种脂肪酸,分别为C18:1n9c、C18:3n3和C21:0,随着热胁迫温度的提高,热胁迫菌株细胞膜中C13:0、C16:0和C17:0等饱和脂肪酸（SFA）及其总含量升高,而C14:1、C16:1、C17:1、C18:1n9t和C18:2n6t等不饱和脂肪酸（USFA）及其总含量降低,总SFA/总USFA比值增大,SFA/USFA比值越大,菌体细胞膜流动性越弱。随着热胁迫温度的提高,ATCC43889抗热性菌株细胞膜磷脂的熔点（T_m）升高,表明细胞膜磷脂的相变温度升高,细胞膜流动性降低,热胁迫温度越高,细胞膜流动性越低;随着热胁迫温度的提高,分子质量在63 kD和75 kD附近的条带颜色逐渐变深,分别经60℃和70℃各10次热胁迫并转接10次培养获得的2种抗热性菌株,其细胞外膜蛋白分子质量在48—75 kD均增加了特异条带;胁迫温度越高,一些外膜蛋白表达量及其种类增加,ATCC43889的耐热性越强。【结论】随着热胁迫温度的升高,ATCC43889个体形态变长,生物被膜生成能力增强,饱和脂肪酸含量升高,不饱和脂肪酸含量下降,细胞膜磷脂的相变温度升高,细胞膜流动性降低,一些外膜蛋白表达量提高、表达种类增加,菌株耐热性增强,这些变化有利于其适应不利的热胁迫环境,提高生存能力。     

环境条件对土壤中异噁草酮降解菌生长量的影响

以3株异草酮降解细菌X、Y1、W2为试验材料,研究土壤温度、湿度、异草酮浓度以及土壤类型等环境条件对其生长量的影响。结果表明,土壤温度为25～35℃时均适于3株降解菌的生长;土壤湿度为田间持水量50%时,3株菌均达到最大生长量;3株菌在高浓度异草酮中的适应能力由强到弱的顺序为W2>Y1>X;3株降解菌在4种不同类型的土壤中生长量均有一定的差异。     

高效污泥降解菌种的筛选及在污泥堆肥中的效果

从采集的高温样品中分离筛选出4株污泥堆肥菌株,经鉴定,这4株菌均系芽孢杆菌属(Bacillus)。将这4株菌等比例混合制成微生物菌剂,按0、3%、5%和10%的菌剂添加量接种至堆肥体系中,筛选合适的堆肥接种量,并探究其在污泥堆肥中的应用效果。结果表明:添加微生物菌剂的处理组在各项堆肥指标上明显优于空白组,处理组堆体的升温速度、物料水分去除率和最高温度值均高于空白组,堆肥结束时,处理组均完全腐熟,而空白组未达腐熟标准。各处理组中,以3%菌剂添加量的堆肥效果最好,各项指标最佳:堆体最高温度达63 ℃,堆体高于55 ℃的高温可持续4 d,堆肥后种子发芽指数为134.1%。说明筛选配制的微生物菌剂在污泥堆肥中具有一定的应用潜力。     

番茄早疫病菌抗嘧菌酯突变体培养特性研究

通过对番茄早疫病菌抗、感嘧菌酯菌株的培养基营养条件、pH以及温度的改变,了解抗性菌株的生物学特性。结果表明:抗、感菌株之间的营养利用情况不同,敏感亲本在以可溶性淀粉为碳源和以蛋白胨为氮源的培养基中菌丝生长最快,而抗性菌株在葡萄糖和牛肉膏的培养基中生长最快;对pH值的要求也略有差别:抗、感菌株均在pH值为6、7时生长较迅速,抗性突变体在pH值为7时生长最快而亲本菌株在pH值为6时生长最快。二者在不同温度下生长情况基本相似:在4～30℃温度范围内菌丝均能生长,以20～25℃生长最快。其中在4～25℃之间菌丝生长速度随温度升高而加快;在25～30℃之间则随温度升高而减慢,在35℃几乎不生长,各温度下敏感亲本菌丝生长速度均比抗性突变体快。     

甘肃野生酵母菌株的鉴定及抗性评价

采用形态和生理生化鉴定方法及26S rDNA D1/D2区序列分析,对甘肃部分县市的17份土样中分离到的29株野生酵母菌株进行了鉴定.结果显示,29株酵母归为10属18个种,其中优势属为隐球酵母属(4个种),假丝酵母属(4个种),毕赤酵母属(3个种);中国新记录种7个,包括Williopsis californica,Williopsis californicavar.dimennae,Cryptococcus aerius,Candida pseudolambica,Candida fermentati,Hanseniaspora occidentalis,Pichia pijperi.同时对这29株酵母进行了抗性评价,菌株38A(Candida tropicalis)耐60%的葡萄糖,45℃高温和14%NaCl.     

金黄色葡萄球菌分离株的菌膜测定及其影响因素

采用96孔细胞培养板法,对10株不同来源的金黄色葡萄球菌分离株的菌膜形成能力进行调查,并研究外部环境因素对金黄色葡萄球菌菌膜形成的影响。首先以金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC6538为模式菌株,确定了亲水性细胞培养板、培养48 h为适宜的菌膜体外培养条件。在此条件下测定了10株分离株的菌膜形成量,并研究了不同培养温度（25~46℃）和不同营养条件（葡萄糖和氯化钠）对菌膜形成的影响。结果显示,体外培养条件下,金黄色葡萄球菌普遍可以形成菌膜,10株菌中仅1株为菌膜阴性,不同菌株菌膜形成能力差异较大;较高的培养温度有利于菌膜的形成,有3株菌在46℃时菌膜形成量达到最大;0.5%葡萄糖和1%氯化钠的添加可显著改变各菌株的菌膜形成,葡萄糖倾向于促进临床分离株菌膜形成量的增加,而氯化钠倾向于促进食品分离株菌膜形成量的增加。这一结果,可以为实际环境中菌膜的预防及控制提供指导和方向,同时也说明金黄色葡萄球菌的菌膜形成存在着不同的调控模式。     

三株细菌降解苯酚特性的比较研究

从焦化厂、农药厂与药厂废水中筛选出3株苯酚降解细菌,分别编号为JHC-2、NYC-2与YC-2。分别采用摇瓶培养与模拟SBR方法比较3株细菌处理苯酚废水的效率,结果表明摇床培养条件为35℃与150r/min,苯酚浓度为100mg/L,经JHC-2、NYC-2、YC-2处理3h后,CODcr的去除率分别为30.52%、71.19%、65.89%。SBR的处理条件为28℃,苯酚初始浓度为100mg/L,HRT为16h,JHC-2、NYC-2、YC-2对CODcr的去除率分别为52.11%、76.69%、70.26%。3株细菌处理苯酚废水效率比较表明,NYC-2在3株细菌中降解苯酚能力最强,通过对其细胞形态、生理生化特性研究,初步确定该菌株属于假单胞杆菌属。