用胚挽救方法获得月季杂交后代植株

研究了3个接种时期和5个杂交组合对月季胚挽救效率的影响.结果表明:在含有0.05mg/L 6-BA,0.1 mg/L NAA的MS培养基上,杂交组合阳光粉×阿斯米尔黄金的幼胚芽苗再生率最高,为88.6%;接种时期以50~80 d的幼胚培养效果最佳,芽苗萌发率达83.3%,芽苗生根移栽后,其成活率可达90%以上.     

“鄂选1号”山桐子组培繁育体系构建

  目的  山桐子作为新近开发的木本油料树种,具有广阔的发展前景。“鄂选1号”山桐子作为新近认定的山桐子新品种,具有丰产稳产、适应性强等特点,备受行业关注。高质量“鄂选1号”山桐子良种苗木的需求日益增加,因此亟需构建高效的山桐子良种繁育体系,旨在满足“鄂选1号”山桐子在行业中的广泛运用。  方法  （1）以高产优质山桐子良种“鄂选1号”为研究对象,以其新生芽为外植体试验材料,以MS培养基为基础培养基,在对其外植体消毒方法、不定芽诱导培养基激素组合、不定芽增殖培养基激素组合、组培苗生根培养基激素组合优化研究的基础上,利用组织培养技术构建山桐子组培繁育体系。（2）系统地分析了“鄂选1号”外植体的消毒方法及植物激素在其丛芽诱导、增殖及生根过程中的作用。  结果  （1）75%乙醇处理30 s,联合0.1% HgCl₂处理8 min是“鄂选1号”山桐子良种外植体最佳消毒方法。（2）不定芽的诱导过程中,（1/2MS + 0.03 mg/L TDZ + 1.5 mg/L 6-BA + 0.05 mg/L NAA）培养基组合适合“鄂选1号”山桐子良种不定芽的诱导。（3）（1/2MS + 0.2 mg/L TDZ + 2.0 mg/L 6-BA + 0.05 mg/L NAA）培养基组合适合“鄂选1号”山桐子良种组培不定芽增殖培养。（4）（1/2MS + 0.3 mg/L NAA + 0.5 mg/L IAA）培养基组合适合山桐子良种组培苗生根诱导,在此条件组培苗生根率达到98%。  结论  本研究构建了“鄂选1号”山桐子的快速繁育体系,为“鄂选1号”山桐子的推广应用奠定了基础。      

杉木体细胞胚胎发生胚性愈伤组织诱导条件的优化

目的优化杉木体细胞胚胎发生过程中胚性愈伤组织的诱导条件，探究基本培养基、供体母株基因型和外源添加剂对杉木体胚诱导的影响。方法以3个供体母株基因型（Z1、Z2、Z3）的杉木雌配子体（其未成熟合子胚处于裂生多胚期）为外植体，采用6种基本培养基及不同浓度的外源添加剂塞苯隆（TDZ）和茉莉酸甲酯（MeJA）处理，并对诱导培养过程中的愈伤组织进行细胞学观察。结果以DCR为基本培养基，诱导培养效果最好，愈伤组织诱导率达70.74%，胚性愈伤组织的诱导率达17.36%；供体母株基因型对胚性愈伤组织诱导有较大影响，Z1基因型供体母株的雌配子体最适合用于诱导产生胚性愈伤组织，诱导率为14.73%；诱导培养时以DCR为基本培养基，添加蔗糖30 g/L、活性炭1 g/L、倍力凝5 g/L并附加植物生长调节剂2,4-D 1.5 mg/L、KT 0.4 mg/L、MeJA 1.2 μmol/L和TDZ 0.004 mg/L，杉木胚性愈伤组织的诱导率最高，达19.83%；仅需4 d就可诱导产生胚性愈伤组织，不同阶段原胚团的结构和极性特征有明显差异。结论基本培养基、供体母株基因型和外源添加剂都会明显影响杉木体胚诱导培养，以Z1供体母株基因型的杉木雌配子体为外植体、DCR为培养基并组合添加MeJA和TDZ可明显提高杉木体胚诱导率。      

闽楠微扦插繁育体系的建立

  目的   以闽楠Phoebe bournei近成熟胚为外植体，采用多种方法建立闽楠微扦插繁殖体系。  方法   探究不同子叶切除强度对胚褐化的影响，以及抗褐化剂和吲哚丁酸（IBA）对近成熟胚萌发和无菌苗微扦插生根的影响。  结果   闽楠近成熟胚褐化的主要部位为子叶，子叶切除后胚可以萌发但不能正常生长，添加聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）对抑制子叶褐化有明显效果且不影响胚的萌发。近成熟胚萌发最佳培养基为1/2MS+0.2 mg·L-1 IBA+2 g·L-1 PVP，萌发率最高可达89.71%。无菌苗微扦插最佳生根培养基为1/2MS+1.5 mg·L-1 IBA+2 g·L-1PVP，顶芽生根率为100%，平均生根数为3.86条，平均根长1.56 cm；侧芽生根率为60.27%，平均生根数为1.55条，平均根长0.85 cm。筛选出的3号株系的繁殖系数达24.40。  结论   研究结果可为闽楠良种繁育提供参考。     

双片苣苔的离体培养

以珍稀植物双片苣苔（Didymostigma obtusum）叶片和叶柄为外植体,以MS为基本培养基,研究了外植体的消毒方式,不同生长调节剂及其组合对不定芽诱导及生根的影响,探讨不同光照、pH、叶片放置方式等因素对不定芽诱导的影响。结果表明:适量的链霉素有利于外植体消毒,叶片诱导不定芽发生的适宜培养基为MS+2.0 μmol·L^-1 TDZ+0.2 μmol·L^-1 NAA,叶柄诱导不定芽发生的适宜培养基为MS+2.0 μmol·L^-1 TDZ+1.0 μmol·L^-1 BA,pH为5.6~6.0,叶背面朝下接种有利于叶片不定芽的诱导发生,适当增强光照有利于芽苗的生长;适宜生根培养基为1/2MS+2 μmol·L^-1 IBA+2 μmol·L^-1 NAA,生根率达100%,根系生长较好;试管苗移栽到腐殖质和黄泥（2∶1）的混合基质中,置于半荫温室中,成活率达100%。     

高产优质毛白杨良种组培繁育体系构建

目的毛白杨是我国北方人工林营造、景观绿化及木材加工等产业应用的主要树种。近年来,由于林业产业升级,原有的毛白杨多圃配套繁育体系不能满足高质量毛白杨良种的快速繁育需求,因此亟需构建高效的毛白杨良种繁育技术体系以保障毛白杨良种在木材生产以及城市绿化中的广泛应用。方法以高产优质毛白杨良种‘毅杨1号’‘毅杨2号’和‘毅杨3号’为研究对象,以其茎段和叶片为试验材料,利用组织培养技术构建毛白杨良种组培繁育体系。本研究系统地分析了‘毅杨 1 号’ ‘毅杨2号’和‘毅杨3号’外植体的消毒方法及植物激素对其不定芽、生根及叶片增殖诱导过程中的作用。结果（1）75%乙醇处理30 s联合2%次氯酸钠处理5 min是3个毛白杨良种外植体的最佳消毒方法。（2）不定芽诱导中0.3 mg/L 6-BA和0.1 mg/L的NAA适用于‘毅杨 1 号’和‘毅杨2号’ ‘毅杨3号’则在0.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA的条件下增殖系数达到最大。（3）生根诱导中‘毅杨 1 号’和‘毅杨3号’的IBA最适质量浓度为0.5 mg/L,‘毅杨2号’则为0.3 mg/L。（4）叶片增殖结果显示,‘毅杨 1 号’和‘毅杨3号’的植物激素最适质量浓度为1.0 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA,‘毅杨2号’为0.7 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA。结论本研究构建了‘毅杨 1 号’ ‘毅杨2号’ ‘毅杨3号’的快速繁育体系,可用于毛白杨良种的快速繁殖以及遗传转化研究,并将为毛白杨良种推广应用以及进一步利用基因工程技术在分子水平对现有良种开展精准改良奠定了基础。      

疣粒野生稻体细胞杂交后代Y73快繁技术

通过采用疣粒野生稻和栽培稻体细胞杂交的方法获得其体细胞杂交后代,从而实现疣粒野生稻遗传物质向栽培稻的定向转移工作。结果表明,胚性愈伤组织的诱导率在11.1%~14.2%,随后转入分化培养基MS+NAA 1.5~2.0 mg·L ^-1+6-BA 0.1~0.3 mg·L ^-1+KT 1.5~2.0 mg·L ^-1中培养,成苗率在28.6%~40.7%左右。成苗后转入1/2MS+IAA 0.01~0.30 mg·L ^-1生根培养基中,生根率达到91%。炼苗14 d后移栽到苗床,成活率达到90%。结果表明,培苗快繁技术可在短期内实现体细胞杂交后代Y73的快速生长及繁育,这为水稻新种质创制和抗病分子育种奠定基础。     

早熟梨新梨7号胚培养直接成苗的影响因素探讨

以早熟梨新梨7号为试验材料,在离体条件下研究了基本培养基种类、激素配比、胚龄大小及低温预处理等因素对早熟梨幼胚离体培养的影响。结果表明:MS培养基诱导新梨7号胚萌发和子叶转绿方面与White培养基相似,而在培养后期促进生根和成苗率方面优于White培养基;适宜培养基激素浓度比例为2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;以胚龄85 d以后的幼胚培养较易成功。低温预处理对促进65 d和75 d胚龄的幼胚萌发和成苗效果优于85 d以后梨胚,且低温处理对胚萌发、子叶转绿的促进作用大于对生根率和成苗率的促进作用。     

槟榔体胚发生途径的组织培养技术研究

以槟榔品种热研1号为研究对象，分别以成熟合子胚、一年生种苗茎尖和无菌苗幼根为外植体，研究了不同浓度的植物激素对愈伤诱导、体胚诱导、再生芽萌发及生根的影响，最终获得槟榔组培苗。结果表明：在愈伤诱导阶段，2,4-D为120 mg/L时，茎尖、合子胚、幼根的愈伤诱导率均最高，分别为83.34%,53.34%和10.00%；在体胚诱导阶段，6-BA为50 mg/L时，体胚萌发率最高，为73.33%；在再生芽萌发及生根阶段，NAA为1 mg/L时，体胚萌发率和成苗率最高，分别为83.33%和73.33%。本研究初步建立了槟榔组织培养技术体系，为后续槟榔的组培快繁和遗传转化提供技术支持。     

马尾松扦插繁殖技术的研究

马尾松历来被认为是扦插极难生根树种,是良种繁育的主要障碍之一,为探索马尾松扦插育苗技术,1989～1991年进行了马尾松扦插育苗、提高繁殖系数以及扦插苗造林试验。结果表明:通过修剪诱发萌芽枝作插穗,并合理选择扦插基质、扦插时间,经生根促进剂处理和全光喷雾管理,扦插生根率可达90％以上;幼树插穗繁殖系数可达2～5倍;扦插苗造林成活率和生长量均优于实生苗,使该项技术在生产上可以有效地应用。     

利用生物技术创造甘蓝育种新材料的方法研究

以5个甘蓝品种为试材,从基因型以及培养基中的有机成分、蔗糖浓度和激素浓度4个方面,对利用生物技术创造甘蓝育种新材料的方法进行了研究。结果表明:不同品种之间的遗传差异影响了参试甘蓝花药胚状体的诱导频率;培养基中的有机成分、蔗糖浓度和激素浓度均对胚状体诱导频率有较大影响。并建立了1套通过甘蓝花粉培养诱导产生单倍体植株的技术:取未授粉甘蓝花药和花粉,接种在蔗糖浓度为10%、附加NAA 0.2 mg/L+6-BA 2 mg/L的MS培养基中,诱导胚状体产生及萌发;将胚状体接种在附加NAA 0.2 mg/L的MS培养基中进行生根诱导,30 d后生根率达89%,且根数较多,平均根长1.0～2.0 cm,芽苗生长健壮。利用该技术获得单倍体再生植株所需要的时间一般为80 d左右。     

粘毛黄芩丛生芽的诱导及快速繁殖

[目的]为粘毛黄芩种质保存和工厂化繁育提供理论依据。[方法]以粘毛黄芩无菌苗的幼茎为外植体,MS为基本培养基,分别对其进行启动、丛生芽及生根培养,建立粘毛黄芩离体培养再生体系。[结果]粘毛黄芩最佳丛生芽诱导培养基MS＋6-BA 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L,丛生芽分化率可达94.8%,平均丛生芽倍增数为11.6;试管苗生根培养基以1/2 MS＋IAA 0.5 mg/L最好,生根率高达97.8%。[结论]该研究建立了粘毛黄芩的快速、高效无性繁殖体系。     

浅裂小花苣苔叶片离体快繁技术

以珍稀植物浅裂小花苣苔(Chiritopsis lobulata)叶片为外植体,以MS为基本培养基,研究不同生长调节剂及其组合对不定芽诱导、增殖及生根的影响,同时也探讨不同光照、pH值对不定芽诱导的影响.结果表明,叶片诱导不定芽的最佳培养基为MS+5.0μmol/L TDZ+1.0 μmol/L BA,最佳pH值为7.0～8.0,诱导率达94.4％,平均不定芽数为57.7;MS+2.0μmol/LTDZ+0.2 μmol/L NAA最利于不定芽增殖和生长;1/2MS+3 μmol/L IBA是理想的生根培养基,生根率达100％,根系生长较好;移栽到半荫温室里的试管苗,生长良好,成活率达90％.     

非洲菊单倍体移栽苗培育的关键技术

以非洲菊(Gerbera hybrida)单倍体组培繁殖苗为材料，研究培养基、炼苗时间和基质对非洲菊单倍体生根和移栽的影响。结果表明: 生根前的增殖培养基对后期的生根培养影响显著，增殖培养基为MS 改良培养液 + KT 0.15 mg·L?1，生根培养基为1/2MS +IBA 0.6 mg·L?1 + NAA 0.1 mg·L?1，是生根苗培育的最佳培养基组合。室内培养20 d后，移入大棚炼苗4 d，再在V_腐植土∶V_红土∶V_珍珠岩= 4∶1∶0.5的混合基质中培育的移栽苗，其炼苗成活率和移栽成活率最高。     

紫叶酢浆草鳞茎离体培养及快速繁殖研究

 采用紫叶酢浆草（Oxalis violalea）鳞茎作外植体源,进行离体培养及快速繁殖研究。结果表明:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L诱导丛生芽发生,效果较好;丛生芽增殖用MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L每20 d转接1次增殖3～4倍。1/2 MS+NAA 2.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L有利于壮苗和生根。从生根诱导到试管苗出瓶需20 d,生根率100%. 从丛芽增殖至生根出苗,整个培养周期只需40 d. 较已有报道的用叶片、叶柄组织培养的提前15～10 d,且繁殖速度极快,试管苗生长健壮,炼苗成活率达95%.     

蓝莓品种阳光蓝离体繁殖条件的筛选

【目的】筛选适宜蓝莓品种阳光蓝(Sunshine Blue)的离体繁殖条件,建立阳光蓝组培快繁体系。【方法】以阳光蓝无菌苗茎段为外植体进行离体繁殖,筛选适合其芽增殖及生根的培养基类型、茎段起始芽数、细胞分裂素、生长素、pH及活性炭(AC)添加量。【结果】阳光蓝茎段在WPM培养基中增殖芽数最多,培养60 d时平均芽长较长,可作为阳光蓝茎段增殖较佳的基本培养基;以起始芽数2芽茎段接种到WPM+2.0 mg/L ZT+0.01 mg/L IBA培养基上,培养30 d时增殖芽数为10.25个,显著多于其他增殖培养基(P<0.05),培养60 d时增殖芽数达17.43个,增殖效果明显优于其他增殖培养基。在生根培养中,当生长素为0.10 mg/L IBA、添加1000.0 mg/L AC、培养90 d时生根率达87.50%,明显优于其他生根培养基。【结论】阳光蓝组培苗的离体繁殖以带2个芽茎段在WPM+2.0 mg/L ZT+0.01 mg/L IBA中进行增殖培养、在1/2WPM+0.10 mg/L IBA+1000.0 mg/L AC中进行生根培养效果较佳。     

mzhy@mail.hebau.edu.cn

 以陆地棉冀无2031无菌苗下胚轴为外植体，在MS中附加激素0.1mg/L IAA+0.1mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT的培养基上诱导出愈伤组织。选择疏松愈伤组织继代到附加0.1mg/L ZT的培养基中，经2~3个月的继代培养诱导出颗粒状疏松胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在无激素、每升加2g谷氨酰胺和0.5g天门冬酰胺的胚性愈伤增殖萌发培养基上培养2个月左右，可陆续形成不同时期的体胚苗。对冀无2031不同时期的体细胞萌发后的体胚苗进行观察，发现了真叶畸形苗、子叶节生根胚、胚轴侧生根胚、腋芽丛生苗和以腋     

茶壶枣离体多倍体诱导关键技术研究

目的离体多倍体育种是枣树育种的重要方法,对其关键技术的研究有利于建立和完善枣树离体多倍体育种体系,加快枣树多倍体种质的创制。方法以茶壶枣无菌叶片为材料,将预培养不同天数（7 ~ 20 d）的叶片固定后制成石蜡切片,进行细胞学观察以确定适宜的预培养时间。在此基础上,将叶片不定芽再生技术与秋水仙素染色体加倍技术相结合,在叶片预培养8、9、10、11 d后,分别用70和90 mg/L的秋水仙素处理48和72 h,并对处理后得到的不定芽进行流式细胞术倍性检测。结果通过对叶片最佳预培养时间的细胞学研究可以得出,茶壶枣无菌叶片在预培养8 ~ 9 d时,分生细胞的分裂能力最强,且未出现分化现象,在此时期用秋水仙素对叶片进行处理,可大大提高诱导率,并且可以有效避免嵌合体和混倍体的出现。染色体加倍试验发现,在预培养8 d后,用70 mg/L的秋水仙素处理72 h,其诱导率最高,达4.11%,并成功获得8株多倍体植株。通过流式细胞术确定这8株多倍体均为纯合四倍体。结论本研究探索出了将茶壶枣叶片不定芽再生体系与秋水仙素染色体加倍技术相结合,人工诱导茶壶枣多倍体的技术方法。      

茶子未成熟胚子叶柄离体培养诱导再生植株

为迅速提高茶树杂交后代群体的个体数,进行了茶树未成熟胚培养获得芽苗及子叶柄,再以芽苗和子叶柄为外植体诱导再生植株的试验.结果表明:MS+BA 3 mg/L+IBA 2 mg/L+YE 200 mg/L和改良ER+BA 2.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L两种培养基均能较好地诱导未成熟胚正常萌发;改良ER+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基可较好地诱导子叶柄产生愈伤组织并分化出芽;以培养带芽愈伤组织块方式增殖效果明显比用带腋芽茎段增殖方式好:增殖倍数为5.4,继代周期39 d,芽苗健壮整齐,有效苗率达83%;芽苗生根的最适培养基为1/2改良ER+IBA 0.1 mg/L.     

基本培养基和6-BA对花生去子叶胚离体培养形态发生的影响

将已去子叶的粤优1号花生（Arachis hypogaea L.）的胚、胚芽、上胚轴、下胚轴、胚轴作外植体在MS、1/2MS和B5培养基上进行离体培养,结果表明,B5对愈伤组织的诱导和萌发成苗的效果最好,外植体中以胚轴诱导愈伤组织最好,成苗诱导以胚最好.在B5＋0.20mg/L NAA上,6-BA含量为0.20mg/L时胚萌发的幼苗生长最好,根、茎的POD活性及木质素含量也较高,含量太低或偏高均不利于幼苗的形态发生.