野鸢尾PI-like基因的克隆及表达

为探究PI-like基因对野鸢尾花器官的花柱分枝和外轮花被片形成的作用,通过RACE方法,分离PI-like型花器官特征基因,并运用实时荧光定量PCR法检测其表达模式。结果表明:克隆得到野鸢尾2个PI-like基因,命名为Id PI1和Id PI2,其编码的氨基酸序列与MADS-box转录因子家族中的PI/GLO亚家族成员具有高度的同源性。Id PI1和Id PI2编码的氨基酸序列的同源性为80%。系统进化分析显示,Id PI1和IdPI2分布在进化树的两支,表明其功能可能发生了分化。相对定量检测结果显示,Id PI1和Id PI2的转录产物在花器官的各轮结构中均可检测到,但其表达量有差异。Id PI1在外轮花被片表达量相对较高,是内轮花被片的2.7倍,是花柱分枝的15倍;而Id PI2在外轮花被片、内轮花被片和花柱分枝的表达量差异不明显,外轮花被片是内轮花被片的1.4倍,是花柱分枝的2.7倍。2个Id PI基因对外轮花被片和内轮花被片的形成均有影响,且Id PI2对花柱分枝形成较Id PI1更为重要。     

人参达玛烷二醇合成酶基因的克隆、序列特征和组织表达分析

以五年生人参根组织为试验材料,利用RT-PCR方法克隆人参DS基因序列;通过生物信息学技术对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比对;运用实时荧光定量PCR技术检测DS基因在人参根、茎、叶、果各部位的表达量。结果表明:获得人参DS基因c DNA全长,其核苷酸序列长为2.385 kb,含有1个开放阅读框,编码769个氨基酸多肽。生物信息学分析显示DS编码蛋白质包含1个跨膜区域,具有3个保守结构域。人参DS编码蛋白质与西洋参的DS(AGK62449)和三七的DS(AGI19258)具有99%的序列相似性。实时荧光定量PCR显示,DS基因在人参根、茎、叶、果各部位均有表达,在叶中表达量最高,其次是在果中,在根和茎中表达量相近。     

土人参Actin 基因片段的克隆及序列分析

为土人参功能基因的表达与调控提供内参基因,根据已知植物Actin基因的保守区设计简并性引物,采用RT-PCR方法扩增得到土人参的Actin基因片段,将该片段连接于p GEM-T载体,测序获得一段大小为598 bp的基因片段,该片段编码198个氨基酸。通过生物信息学软件分析,该序列与其他植物Actin基因的cDNA序列同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性达到86%以上,表明试验克隆所得基因片段为土人参Actin基因片段。将该Actin基因片段命名为TpActin1,并登陆在Gena Bank,登录号为MH333039。     

人参单一基因微卫星标记的分析

 【目的】利用人参单一基因（unigene）序列,研究人参转录区SSR的分布特征;开发单一基因微卫星（UGMS）标记,并比较人参UGMS与基因组SSR标记（G-SSR）在分布频率、多态性及通用性等方面的不同,为人参等五加科药用植物的鉴定、遗传图谱的建立等研究奠定基础。【方法】利用NCBI公共数据库的7 649条人参EST序列,筛选出含有SSR的单一基因序列,并分析人参SSR的分布;根据这些序列以及包含SSR的人参基因组序列合成的引物扩增人参不同品种和其它五加科植物。【结果】检测到总长度为2.72 Mb的4 869个单一基因。其中,488个单一基因分布有724个SSR,占人参EST的10.02%,SSR的分布密度为3.75 Kb。一至三核苷酸重复分布频率分别为29.28%、48.06%和19.06%。非编码区和编码区重复序列分别以AT/TA和AAG/CTT为主。在合成的100对UGMS和44对G-SSR引物中,分别有86和44对能够扩增出人参的PCR产物,其多态率分别为42.0%和43.2%。人参UGMS对五加科西洋参、三七和刺五加植物的通用性分别为100%、87.2%和75.6%;G-SSR分别为95.5%、72.7%和40.9%。【结论】人参基因中SSR发生频率较高,并以二核苷酸重复为主。不同基因区域内的SSR分布具有非随机性。UGMS在揭示种内多态性方面不及G-SSR,但具有较高的种间通用性。     

人参CYP716A53v2基因的克隆与序列分析

研究人参皂苷生物合成途径中的影响因子。以五年生人参根组织为试验材料,提取总RNA,反转录合成c DNA的第1条链,利用PCR法对人参中的原人参三醇合成酶(CYP716A53v2)基因的c DNA进行克隆及序列分析。获得CYP716A53v2基因全长片段为1 506 bp,开放阅读框长1 410 bp,编码470个氨基酸多肽。生物信息学分析显示,CYP716A53v2基因编码蛋白质不含跨膜区域。说明CYP716A53v2基因与其他植物氨基酸序列具有较高同源性,其中与人参、西洋参、三七同源性分别为99%、98%、98%。     

人参法尼基焦磷酸合成酶基因的表达及其与皂苷含量的关系

以五年生人参根组织为试验材料,克隆得到人参法尼基焦磷酸合成酶(FPS)基因。通过生物信息技术对其氨基酸序列进行比对,使用MEGA5.1构建人参与相关物种的FPS系统进化树,运用实时荧光定量PCR方法检测FPS基因在不同生长时期的表达量,用高效液相色谱法测定根中8种单体皂苷含量,进行相关性分析。结果显示:人参FPS基因c DNA大小为1 134 bp,含有一个开放阅读框,编码342个氨基酸。FPS编码蛋白相对分子质量为39 567,等电点为5.83,不含信号肽,无跨膜区。二级结构中主要为α-螺旋,占58.19%。同源性分析显示,FPS基因与西洋参(ADJ68004)、三七(AGS79228)核苷酸序列相似性为99%。实时荧光定量PCR结果显示,FPS基因在人参各生长时期中,以展叶期表达量最高。相关性分析表明,FPS基因的表达与Rb3含量显著正相关(P0.05),与三醇型皂苷含量呈正相关,但相关性不显著。     

川芎甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析

以川芎(Liqusticum churning Franch Hort)为材料,采用RT-PCR和RACE方法,从新鲜的嫩叶中克隆出甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)基因的cDNA序列。克隆到的cDNA序列全长为2 211 bp,编码一条由508个氨基酸残基组成的多肽,其核酸序列与人参的BADH基因的cDNA序列同源性为86%,对应编码氨基酸序列同源性为91%。将得到的序列提交GenBank,序列号为HM352764。与其他植物BADH的氨基酸序列比对,川芎BADH具有相同功能区域,包括N-端信号肽、底物结合及酶催化位点,因而可以参与甜菜碱的合成反应。对川芎BADH与其他植物BADH的氨基酸序列的进化分析表明,其与五加科人参的同源性较近。     

大白菜PHK4基因cDNA3'端序列的克隆及分析

采用 3'RACEcDNA末端扩增技术,克隆出大白菜PHK4基因3'端cDNA序列.该序列长810bp,其中编码区序列546bp,编码181个氨基酸,其编码序列、氨基酸序列与拟南芥AHK4基因的同源性分别为90%和96%,说明PHK4基因与AHK4基因编码区的同源性较高,而PHK4基因3'UTR区与AHK4基因3'UTR区的同源性为52%,远低于编码区.     

棉花解旋酶基因克隆及生物信息学分析

从棉花cDNA文库中克隆了棉花解旋酶全长基因,GenBank登记号:EU373038,并对其编码的氨基酸序列进行分析.结果显示,基因长度为3 491 bp,编码930个氨基酸,其编码的蛋白质预测等电点和分子质量分别为5.98和103.994 ku.蛋白质氨基酸序列分析表明,所获得的基因编码蛋白的氨基酸序列与GenBank中拟南芥同源性为74%与水稻同源性为60%,与葡萄同源性为79%.     

人参鲨烯环氧酶基因的克隆与序列分析

以五年生人参根组织为试验材料,提取总RNA,反转录合成cDNA,利用RT-PCR法对人参鲨烯环氧酶(SQE)基因的cDNA进行克隆及序列分析,初步探讨人参皂苷生物合成途径中的影响因子。结果表明:获得人参SQE基因全长片段大小为1 636 bp,开放阅读框长1 611 bp,编码536个氨基酸残基,与其他植物核苷酸序列具有较高同源性,其中与三七、龙牙惚木、刺五加同源性分别为98%、96%、90%。     

A Genetic Linkage Map of Brassica carmpestris L.ssp.pekinensis (syn. B.rapa L.ssp.pekinensis )

A molecular genetic map of Chinese cabbage was constructed with a 102 recombinant inbred(RI) population from a cross of two cultivated Chinese cabbage lines 177 and 276, using AFLP and RAPDmarkers. 352 markers including 265 AFLP markers and 87 RAPD markers were integrated into 17 linkagegroups. It covered a total of 2 665.7 cM with an average interval of 7.6 cM. AFLP marker is efficient formap construction while it easily forms clusters to cause big gaps in map. A total of 13. 92% abnormal segrega-tion markers distributed in the map. The molecular genetic map is fundamental for gene localization, compar-ative genomics, and QTL mapping of important agronomic traits.     

壳聚糖对番茄枯萎病菌的拮抗作用

采用含毒介质法研究了壳聚糖对番茄枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用.结果表明,浓度大于1 mg/mL的壳聚糖能明显抑制菌丝生长,各设定浓度均可在一定程度上抑制孢子萌发,而且抑制效果随着处理浓度的增大而增强;浓度大于0.1 mg/mL的壳聚糖处理可诱导初生菌丝发生肿胀、分枝增多且茵体分隔增加及体细胞变短等形态学变化.壳聚糖的抑菌作用机制与其增加茵丝细胞膜的透性有关.     

谢君魔芋染色体数目的观察研究

谢君魔芋(AmorphophallusxieiH.Li,F.GaoetZ.L.Dao,sp.nov)是近年来新发现的极具生产潜力的魔芋新种,其染色体数目目前尚无报道。对谢君魔芋染色体数目采用常规压片法进行了观察研究,表明谢君魔芋染色体数目为26条。     

华南虎、金钱豹、云豹血清蛋白和LDH同工酶的电泳研究

本文报道了华南虎、金钱豹、云豹的血清蛋白和LDH同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱和扫描曲线。分析结果表明:华南虎、金钱豹和云豹的血清蛋白电泳可分辨的区带数分别为13、14、13。在各区带的相对迁移率及含量方面显示出动物体蛋白在物种间存在着差异。3种动物血清LDH同工酶谱带均为5条,但仍各具特征性电泳图谱,且LDH同工酶表型分析结果提示,华南虎与金钱豹的电泳图谱较为接近。     

栽培大豆、野生大豆和半野生大豆酯酶同工酶的研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分析了栽培大豆、野生大豆和半野生大豆的酯酶同工酶．结果表明，栽培大豆幼苗期的酯酶同工酶共出现了１７条酶带。栽培大豆和野生大豆既有共同的酶带，又有各自独特的酶带，是亲缘关系较近的两个种。半野生大豆有类似野生大豆的酶谱，表现了野生种的特点．不同进化类型的大豆酯酶同工酶有明显不同。随着进化程度增高，酶带数目有增多的趋势．研究表明，大豆幼苗酯酶同工酶酶谱比较稳定，酶带明确，具有较为明显的种的专一性，可以做为大豆分类学和研究大豆进化关系的一个生化指标。     

广丰千金薯和铁棍山药脱毒微型块茎的转录组分析

为探究广丰千金薯和铁棍山药在分子水平的差异,以广丰千金薯(QJS)和铁棍山药(TGSY)试管苗的微型块茎为试验材料进行转录组分析。结果表明:QJS组和TGSY组样本间相关系数为0.42。QJS组和TGSY组表达量FPKM的对数值在0~1.5,表达量密度在0~1.0。与TGSY组相比,QJS组有4 765个基因下调,有5 112个基因上调。QJS组和TGSY组表达的共有基因有25 207个,QJS组单独表达的基因有5 261个,TGSY组单独表达的基因有3 571个。QJS组和TGSY组共发现611 498个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点和12 056个简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)。与TGSY组相比,QJS组的淀粉合成酶3、α-淀粉酶3、β-淀粉酶、类黄酮3'-单加氧酶、类黄酮3'-羟化酶、花青素合酶等基因上调,而颗粒结合淀粉合酶2、蔗糖合酶1、扩展蛋白2和苯丙氨酸解氨酶等基因下调。这可能是广丰千金薯微型块茎肉质绵密粉嫩、软糯爽口、胁迫防御、食后易胀的内在原因。结果可以为广丰千金薯的品种鉴定和分子育种提供参考。     

樗蚕蓖麻蚕及柞蚕卵壳表面构造的研究

用扫描电镜观察了樗蚕、蓖麻蚕及柞蚕卵壳的表面构造,并比较了三者间的差异。精孔区:樗蚕、蓖麻蚕均只有一层花瓣状纹,无过渡型卵纹;而柞蚕为多层状构造,过渡型卵纹发达。卵壳中央部表面:樗蚕、蓖麻蚕由多角形主细胞紧密连接,主细胞中央凹陷,周边凸出成多角形小室,使整个卵面呈蜂窝状构造,主细胞顶角处有气孔开口;柞蚕则由多角形主细胞和郁金香花瓣状细胞间体及细胞间隙组成网状构造,细胞间体排列于主细胞环形突起上,内腔中心有气孔开口,外侧为郁金香花瓣状。樗蚕和蓖麻蚕的卵壳表面构造极为相似;而柞蚕则迥然不同。著者认为:昆虫卵壳表面的卵纹、结构在一定程度上反映了它们的类缘关系。     

金铁锁地膜覆盖栽培研究

为了研究金铁锁应用地膜覆盖栽培的效果,笔者采用白色农膜覆盖、黑色农膜覆盖、不覆盖任何农膜(CK)研究了金铁锁种子直播栽培的效果。结果表明：用地膜覆盖栽培比不盖膜栽培第1 年可明显提高保苗率,增加根重;第2 年保苗率明显降低,根重无明显差异;第3 年保苗率和根重都明显降低。种植第1年可用农膜覆盖,种植第2、第3年不能再盖膜。3年连续盖膜栽培可导致金铁锁最终产量降低。     

乌天麻有性繁殖块茎发育性状-产量-天麻素相关性研究

从四川天麻主产区采集不同发育阶段的乌天麻块茎,测定其性状、产量和天麻素含量,并建立鸟天麻不同类型块茎性状-产量-天麻素的相关回归方程。结果表明,与乌天麻块茎产量和天麻素积累呈正相关的因素主要有块茎干重（y2）、鲜块茎长度（x1）、鲜块茎直径（x3）、鲜块茎系数（y6）、鲜块茎周长（x2）,呈负相关的因素主要为块茎数（x5）。     

“琼花”的染色体研究

本文对两种类型“琼花”小孢子母细胞(花粉母细胞)减数分裂和芽尖体细胞有丝分裂进行了观察。结果表明,两者具有相同的染色体数目,2n=2x=18,並且两者的核型组成也相同。2对最大的染色体和4对较小的染色体为具中部着丝点染色体,1对较大的染色体和2对较小染色体为具近中部着丝点染色体。