八氢番茄红素合成酶(PSY2)基因果实特异表达载体的构建

八氢番茄红素合成酶是番茄红素合成的关键酶,通过PCR法获取PSY2基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pBI101.2中,构建了果实特异表达启动子的八氢番茄红素合成酶基因植物表达载体。并采用PCR、限制性内切酶酶切和序列测定分析法,对重组质粒进行鉴定。结果表明,番茄果实特异性表达PSY2蛋白的重组质粒构建成功;通过农杆菌直接转化技术将其成功转入转化农杆菌LBA4404、EHA105,为下一步PSY2蛋白在番茄果实中特异表达奠定了基础。     

mASR3基因超量表达载体的构建

ASR 是植物特异的亲水蛋白家族,近来发现它们在植物生长发育、成熟衰老以及非生物胁迫过程中起着 重要的作用。而mASR3 基因是从植物中发现的一种转录因子,为进一步研究该基因功能,将合成的mASR3 基因构 建入超表达载体pMD1 中,并通过农杆菌将此重组质粒转化入拟南芥,转入目的基因的拟南芥子叶为绿色,下胚轴 较长,并具有较长的主根,筛选得到的转基因植株,为该基因的进一步功能研究打下基础。     

番杏TtASR基因的克隆及其抗逆功能分析

ASR（ABA, Stress and Ripening）蛋白是植物中特有的亲水性小分子蛋白,在植物细胞失水条件下对细胞器起保护性作用。本研究在构建番杏[Tetragonia tetragonioides (Pall.) Kuntze]全长cDNA文库中通过随机克隆测序分析基础上,获得了一个编码番杏ASR蛋白的全长cDNA序列,命名为TtASR（GenBank登录号：MH454101）。TtASR的cDNA全长序列包含一个为723 bp完整开放阅读框,编码蛋白TtASR含有240个氨基酸,等电点为5.26,分子量为25.29 ku。对TtASR与其他植物中同源蛋白的进化分析表明,与辽宁碱蓬SlASR和海蓬子SbASR-1亲缘关系较近。将TtASR的cDNA阅读框插入到原核表达载体pGEX 6p-1中,通过转化大肠杆菌进行原核表达分析。结果表明,重组大肠杆菌菌株能表现出良好地抗逆性,特别是对NaCl、高渗透压和氧化胁迫的抗逆性增强。     

土人参Actin 基因片段的克隆及序列分析

为土人参功能基因的表达与调控提供内参基因,根据已知植物Actin基因的保守区设计简并性引物,采用RT-PCR方法扩增得到土人参的Actin基因片段,将该片段连接于p GEM-T载体,测序获得一段大小为598 bp的基因片段,该片段编码198个氨基酸。通过生物信息学软件分析,该序列与其他植物Actin基因的cDNA序列同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性达到86%以上,表明试验克隆所得基因片段为土人参Actin基因片段。将该Actin基因片段命名为TpActin1,并登陆在Gena Bank,登录号为MH333039。     

阔叶丰花草对茄科作物的化感效应

为探明入侵植物阔叶丰花草对茄科作物种子萌发和幼苗生长的影响,采用种子萌发与生物测定法,测定比较了阔叶丰花草不同浓度水提液处理番茄、茄子和辣椒种子的萌发率、幼苗的根长及茎长。结果表明：番茄和茄子的发芽速度指数随处理浓度上升而显著降低;番茄种子的萌发率略低于对照,均在93．33％以上;茄子和辣椒种子的萌发率均随水提液浓度的上升而降低,14 d 时分别在70％以上和66．67％以上;各浓度水提液番茄和茄子的根长显著低于对照,辣椒除高浓度外,根长均长于对照;培养7 d 时番茄的茎长短于对照,14 d 时均长于对照。结论：阔叶丰花草对番茄的综合化感效应表现为抑制作用;低浓度的水提液对茄子综合化感效应表现为促进作用,高浓度为抑制作用;辣椒则表现为抑制转变为促进,表现出一定的适应性。     

珍珠相思叶状柄水提物的化感效应研究

探讨不同浓度珍珠相思叶状柄的水提液对3 种茄科植物（番茄、茄子和辣椒）生长的影响。通过种子萌 发试验,测定不同浓度叶状柄水提液对受体植物的化感效应指数、萌发率和幼苗生长特性影响,分析是否存在化感 效应和潜在的生态风险。低浓度（0.02 g/mL）叶状柄水提液条件下,茄子种子萌发率的化感指数为0.06;番茄的芽长 化感效应指数和综合指数分别为0.37、0.09,而较低浓度（0.04 g/mL）下分别为0.30 和0.01,表现为一定的促进作用; 此外的其他指数均为负值,体现出较强的抑制作用。叶状柄水提液中所含的化感物质对3 种茄科植物种子萌发及幼 苗生长表现有所不同。不同浓度水提液对番茄幼苗生长具有低促高抑的双重浓度效应,而对辣椒和茄子幼苗生长均 具明显的抑制作用,且在其作用范围内具有浓度依赖性。     

热激法诱导蝇蛆抗菌活力的工艺研究

将不同虫龄尧不同培养条件下的家蝇（Musca domestica）蝇蛆进行不同程度的高温刺激、辅以一定时间的 恢复培养后、测量蝇蛆抗菌活力的变化。结果表明院适当热激能够显著提高蝇蛆的抗菌能力、不同温度尧不同热激时 间尧不同热激后恢复时间以及不同虫龄均对蝇蛆抗菌能力有不同诱导效果、其中以65益尧10 min 热激处理尧再经3 h 于22益恢复效果最佳、其抗菌活力比对照提高约53 倍。多批次不同材料的重复性试验表明、该条件诱导蝇蛆抗菌活 力的效果重现性好尧稳定性高。不同处理量试验证明、热激处理大批量蝇蛆材料将导致抗菌活力诱导效率及稳定性 下降、但通过将大批量材料适当分装的方式可以有效解决这一问题。     

香蕉BBI 型蛋白酶抑制剂（MaBBI1）的诱导、变性和复性

BBI(Bowman-Birk protease inhibitor)是一种富含半胱氨酸的植物蛋白酶抑制剂,其抑制的蛋白酶主要包括胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶等丝氨酸蛋白酶。以从香蕉(Musa acuminata L.cv.Brazilian)根中提取的总RNA逆转录成的c DNA为模板,根据NCBI公布的野生型马来西亚蕉(Musa acuminata subsp.Malaccensis)BBI基因(收录号:XM_009415512)的序列设计引物,克隆了1个BBI型蛋白酶抑制剂基因(MaBBI1)。MaBBI1基因大小为381 bp,编码126个氨基酸,包括12个半胱氨酸(9.5%),将该基因构建到载体p GEX-6P-1上转化大肠杆菌Rossetta菌株进行重组蛋白GST-MaBBI1的诱导表达。在IPTG诱导3 h后,一个预测分子量为40.8953 ku的GST-MaBBI1融合蛋白被大量表达。IPTG诱导后的GST-MaBBI1融合蛋白是不溶的并累积成包涵体,通过对包涵体进行变性和复性的方法得到可溶的GST-MaBBI1融合蛋白,为进一步在体外研究该蛋白的功能奠定基础。     

拟南芥血红蛋白1（AtGLB1）超量表达载体和RNAi表达载体的构建及转化

为研究拟南芥血红蛋白1基因(AtGLB1)的功能,将AtGLB1基因构建入超表达载体pMD和RNAi载体pZYI中,并采用花序浸染法将重组质粒转化拟南芥Columbia得到了转基因植株。对超表达株系和RNAi株系的纯合体进行Northern分析,结果表明:超量表达的拟南芥株系中AtGLB1的表达水平比野生型高很多,而表达被抑制的RNAi株系中几乎检测不到AtGLB1基因的表达。这些AtGLB1表达水平不同的拟南芥株系的获得可为该基因功能的后续研究以及在农业生产中的应用奠定一定基础。