生防菌菌株A的摇瓶培养条件及发酵工艺

[目的]优化生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺。[方法]采用均匀试验设计方法、回归分析方法和分批补料发酵工艺,研究生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺的优化。[结果]结果表明,适合菌株A摇瓶培养的最佳条件为：培养温度35℃,摇瓶装量12％,接种量3．0％,初始pH值7．2。20L发酵罐分批补料发酵参数为：种子培养基为YDC培养基,培养时间24h,接种量3．0％;发酵培养基：葡萄糖1．0％,酵母膏1．0％,CaCO3 1．0％,pH值7．2;流加培养基：葡萄糖1．5％,酵母膏0．5％,制成混合液一起流加,发酵8h开始流加;发酵周期（34±2）h,在以上发酵条件下,发酵液芽孢浓度达（3．410±0．151）×10^9cfu／ml。[结论]该试验条件下所获得发酵液芽孢数浓度较高,可用于进一步制备生防菌剂。     

丽格海棠继代增殖培养研究

对丽格海棠进行增殖培养，结果发现丽格海棠在继代增殖培养过程中的最佳培养基为：MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1mg／L＋IBA0．10mg／L＋食糖30g/L＋琼脂8g／L，pH值为5．8～6．0。     

培养基组分及操作参数对抗体多聚体形成的影响

近年来,国家食品药品监督管理局基于药物安全性的考虑对于治疗性蛋白的质量提出了更高的要求,而蛋白多聚体能引起人体免疫反应,被认为是关键质量属性(critical quality attributes,CQA)。采用培养基组分添加试验和操作参数控制试验的方法,系统研究了培养基中氧化还原物质和培养过程参数(温度和p H值)对抗体多聚体形成的影响。结果表明,半胱氨酸的添加能显著抑制多聚体的形成,培养基中半胱氨酸添加浓度增至30 mmol/L,多聚体含量下降40%。而铜离子的添加浓度从500μmol/L降至0μmol/L,多聚体含量则降低了43%。培养温度从35℃降低至32℃,重链结合蛋白(Bi P)和蛋白二硫键异构酶(PDI)的表达水平均提高了89%,细胞翻译后修饰能力显著加强,分泌至上清液中的抗体多聚体含量相应下降了38%。研究结果明确了生产工艺和产品关键属性之间的关系,为后续设计优化以质量为先导的培养过程,生产质量可控、安全、有效抗体药物奠定了基础。     

海南粗榧细胞悬浮培养体系的建立

以海南粗榧愈伤组织进行悬浮培养,考察了培养基、维生素、蔗糖浓度、pH值、接种量对海南粗榧细胞悬浮培养体系建立的影响,并利用HPLC技术检测海南粗榧悬浮细胞和培养基中生物碱的含量.结果表明:海南粗榧悬浮细胞系培养的最适条件:MS为基本液体培养基、添加蔗糖35 g/L+VB1 10 mg/L、接种量6％、初始pH值5.5～7.0;发酵过程中每5d调节pH值至6.0,有利于细胞的生长和产物的合成;细胞的生长呈“S”型曲线,细胞生长周期为30 d,产物含量在培养25 d时达到最大;细胞活力呈先急剧上升后缓慢下降的趋势.     

白背三七悬浮细胞培养体系的建立

目的:建立稳定的白背三七悬浮细胞培养体系。方法:采用植物组织培养技术,探讨初始接种密度、装液量、初始pH值、激素种类及浓度4个因素对白背三七细胞悬浮培养的影响。结果:白背三七细胞悬浮培养的适宜条件为:B5基本培养基+0.5mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+30g/L蔗糖,pH 7.0,装液量为40%,初始接种密度为90g/L(鲜质量),弱光培养。在此优化条件下,细胞生长呈"S"形曲线;培养过程中,培养基的pH呈先下降后缓慢升高的变化趋势;细胞活力的变化稍滞后于生长曲线,逐渐降低。     

碱性蛋白酶提取米糠蛋白的研究

为建立高效的米糠蛋白提取工艺,对碱性蛋白酶提取米糠蛋白的工艺条件进行了研究。以蛋白提取率为考察指标,在单因素试验的基础上,通过正交试验进一步优化米糠蛋白提取工艺条件。结果表明,料液比对米糠蛋白提取率的影响最大,其次为pH值,温度、时间和加酶量影响较小。优化后的工艺条件为:温度60℃,时间3.0h,料液比1∶20,加酶量2.5%,pH值9.5。在此条件下,蛋白提取率可达75.42%,同时测得米糠蛋白的等电点为4.5。影响米糠蛋白提取率的主次因素顺序为:料液比>pH值>温度>时间>加酶量。     

沙芥叶片愈伤组织诱导研究初报

以MS为基本培养基，确定5种组合对沙芥叶片进行愈伤组织诱导，结果显示：MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L＋3．0％蔗糖＋0．5％琼脂（pH值5．8）可诱导出愈伤组织；以MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA2mg／L＋3．0％蔗糖＋0．5％琼脂（pH值5．8）作为愈伤组织增殖培养较理想。     

肌注手足口病(EV71型)人免疫球蛋白层析工艺研究

[目的]优化手足口病（EV71型）人免疫球蛋白的层析工艺条件,为制备治疗手足口病（Ev71型）的人免疫球蛋白提供依据。[方法]采用单因素试验和响应面分析法,研究样品pH值、蛋白质浓度和电导率对层析后流穿液中免疫球蛋白纯度的影响。[结果]影响层析流穿液中免疫球蛋白纯度的主要因素为电导率,其次是蛋白质浓度,pH值对层析流穿液中免疫球蛋白蛋白纯度影响最小。手足口病（EV71型）人免疫球蛋白的最佳层析工艺参数为：pH5．28、蛋白质浓度41．62g／L、电导率为0．24m／s。[结论]层析优化后的流穿液中手足口病（EV71型）人免疫球蛋白纯度可达到99．60％,可用于制备高纯度的手足口病（EV71型）人免疫球蛋白。     

甜瓜的组织培养及快繁试验

材料与培养条件：1．1材料。甜瓜的茎段、种子。1．2培养条件。种子发芽培养基：(1)l／2MS；茎段生长培养基：(2)MS 6-BA0．5mg／L IAA1mg／L；(3)MS 6-BA 2mg／L PP3333．0mg／L NAA0．05mg／L。所有培养基均附加0．75％琼脂和2％的蔗糖，pH5．8～6．0，培养温度为23～27C，光照12h／d，光照度2000Lx左右。     

青稞淀粉酶法提取工艺研究

本文对用碱性蛋白酶酶法提取青稞淀粉的工艺进行优化,从而达到降低青稞淀粉中蛋白残留的问题,为青稞的精深加工提供理论依据。以青稞面粉为原料,以碱性蛋白酶水解蛋白提取青裸淀粉,在单因素试验的基础上,采用4因素4水平正交试验设计优化提取工艺。结果表明4个因素对提取淀粉中的蛋白残留量都有极显著的影响,其影响的主次顺序是pH值〉加酶量〉水解温度〉水解时间。对提取的青稞淀粉蛋白残留量最低的组合为：料液比1：4,pH值9．0,加酶量80U／g,水解温度50℃,水解时间60min。在此试验条件下提取的青稞淀粉的蛋白残留为0．37％。     

抗呋喃它酮代谢物衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白表达条件的优化

[目的]优化基因工程菌的诱导表达条件,以提高抗呋喃它酮代谢物衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量.[方法]采用液体发酵法培养抗AMOZ衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的基因工程菌,分别研究不同宿主菌、培养基、初始pH、诱导时期、诱导时间和蛋白诱导表达剂异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)对融合蛋白表达量的影响,并通过蛋白质印迹法和直接竞争酶联免疫分析法对其活性进行鉴定.[结果]以E.coli BL21(DE3)作为宿主菌,在以初始pH为7.0的SB液体培养基作为发酵培养基,将含有目的蛋白的基因工程菌培养至OD600为0.6时,用浓度为0.6 mmol/L的诱导表达剂IPTG诱导表达9 h的条件下,抗AMOZ衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达量由最初的7.94％增加到了11.45％,总体增加了约3.51％,且融合蛋白具有良好的生物活性.[结论]成功提高了抗AMOZ衍生物单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达量,为后期大规模生产抗AMOZ衍生物单链抗体奠定了一定的基础.     

生姜蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究

以部分纯化的生姜蛋白酶为酶源，对该酶在水解大豆分离蛋白的最佳条件等方面进行了较为详细的探讨。研究结果表明，生姜蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳条件为：温度60℃、酶加量2．0％、pH值6．O、水解5h，此时其水解度可达7．5％。经酶解处理后的大豆分离蛋白饮料，其离心沉淀率降低，稳定性增大。     

流加培养方式对大肠杆菌XD-12发酵的影响研究

[目的]研究大肠杆菌流加培养方式,提高转氨酶供体——大肠杆菌XD-12的发酵浓度。[方法]通过研究碳源流加、氮源流加、pH控制流加对发酵的影响,获得了优化的培养条件。[结果]产转氨酶大肠杆菌的最佳培养条件为：温度37℃,搅拌转速500 r/m in,通气量1.5 L/m in,培养基初始pH为7.0,控制发酵过程pH为7.5,初始葡萄糖浓度5 g/L,初始氮源为5 g/L蛋白胨＋1.5 g/L牛肉膏,从葡萄糖浓度下降为2 g/L开始每隔2 h间歇流加120 g/L的糖,从8 h起每隔2 h间歇流加15 g/L蛋白胨＋4.5 g/L牛肉膏。在此条件下培养24 h,大肠杆菌的菌体干重浓度达9.66 g/L,较分批培养提高了104.7%。[结论]这对降低酶法制备L-苯丙氨酸的生产成本、提高生产效率、满足日益增长的市场需求具有重要的现实意义。     

2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究

研究了分离自仔猪肠道的乳酸菌L5和L7对低pH值、胆盐的耐受性。结果表明,pH值在2．5、3．5和4．5时,L5菌株处理150min对其无显著影响,在pH1．5时经30min处理,L5仍可维持较高的存活率;L7菌株在pH3．5和4．5条件下经150min处理后可保持较高的存活率,而在pH1．5和2．5条件下经处理30min后菌株数量显著下降。胆盐对L5和L7菌株的生长有一定影响,但低浓度短时间内影响较小。在同一胆盐浓度下,随培养时间的增长,活菌数下降。当胆盐浓度高于0．2％时,L5和L7菌株的生长极差。热稳定性试验结果表明,L5菌株在50℃下可成活,且呈正常生长趋势,但其对80℃及以上的耐热能力显著降低。     

高浓度乳化废水的破乳-氧化-吸附深度处理研究

[目的]寻求有效的高浓度乳化废液的深度处理方法。[方法]采用酸化盐析破乳-Fenton氧化-粉煤灰吸附3级工艺对实验室模拟高浓度乳化含油废水进行处理研究。[结果]模拟的高浓度乳化含油废水在初始pH值为3、末期pH值为10、H2O2与Fe^2＋的物质量投加浓度比为52：1、H2O2投加量50ml／L和Fenton试剂投加量500mg／L的条件下氧化2h后,COD去除率达85．0％;对氧化后的废水进行吸附实验表明,进水COD336mg／L,在粉煤灰投加量40g/L、pH值为10的条件下振荡吸附30min后,出水COD109mg／L,COD去除率达67．5％。[结论]使用这种工艺对实际的机械洗削废液进行处理,出水水质良好达国家排放标准（COD≤120mg／L,含油量≤10mg／L）。     

亚麻多倍体试管苗的生根诱导研究

采用秋水仙碱溶液诱导后的萌动亚麻种子,在不同的pH值和培养基类型下生长,在生根培养阶段添加不同生长调节剂,研究pH值、培养基类型及生长调节剂对多倍体试管苗诱导生根作用的影响。结果表明：在1／2B5培养基、pH值6．2、添加0．1～0．2mg／L NAA或0．3mg／L IBA或0．3mg／L NAA和0．1mg／L IBA配合使用均对多倍体试管苗诱导生根有显著的作用,诱导生根率可达到80％以上。     

人基质蛋白酶2(MMP-2)类血红素结构域原核表达优化

用构建的人基质蛋白酶-2（MMP-2）类血红素结构域原核表达载体PET25b—PEX转化大肠杆菌BL21（DE3），筛选阳性菌落LB液体培养基培养，异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达产生的表达蛋白，大小约29kD，与预期大小相符。设置不同的IPTG诱导终浓度，诱导时间，诱导时菌液OD值和LB液体培养基的pH值，SDS-PAGE电泳和软件分析发现，当IPTG浓度为0．7mmol／L，诱导4h，诱导时菌液OD值为0．7时，实验能获得最高的PEX蛋白表达；5L大规模培养时，LB培养基pH值为7．5时，可获得较高的重组PEX蛋白表达。     

内切酶与端肽酶水解牛乳酪蛋白的研究

蛋白质经酶水解得到的多肽往往带有较明显的苦味,限制了其在食品中的应用.为优化牛乳酪蛋白的酶水解条件,采用枯草杆菌碱性蛋白酶Alcalase和风味蛋白酶Flavourzyme协同对牛乳酪蛋白进行水解,得到了Alcalase AF 2.4 L酶水解的最佳工艺条件是:底物浓度2％、pH值8.5、温度为55℃、加酶量为20μL...     

花生蛋白风味酶酶解工艺优化

【目的】优化风味酶酶解花生蛋白工艺。【方法】探讨酶浓度、pH、底物浓度、温度和酶解时间对花生蛋白水解度的影响。在此基础上,用正交试验对各参数进行了优化。【结果】风味蛋白酶酶解花生蛋白的最佳工艺条件为：温度50℃、pH为7．0、酶浓度0．2g酶倌花生蛋白、底物浓度5％、酶解时间6h,最佳条件下水解度为26．12％：【结论】温度对酶解反应的影响最大,其次是酶浓度,酶解时间和pH值。     

Alcalase碱性蛋白酶制备蚯蚓肽的酶解参数研究

为解决畜禽养殖污染问题及开发蛋白质饲料资源提供理论依据,以Alcalase碱性蛋白酶为工具,采用单因素(温度、酶解时间、pH值、酶用量及底物浓度比)试验考察了蚯蚓蛋白酶的酶解效果,再通过正交试验优化酶解参数.结果表明:1)单因素试验:蚯蚓蛋白水解度随酶解时间的延长而呈上升趋势,5 h后上升趋于平缓;随着温度的升高和pH值的增大均呈先上升后下降的趋势,60℃和pH值达8.0时达最大值;随酶用量的增加和底物浓度的增大均呈先上升后下降的趋势,酶用量超过4%和底物浓度达6%后开始下降.正交试验:酶解温度、时间、pH和加酶量对蚯蚓蛋白的酶解度有显著或极显著的影响,4个因素作用的主次顺序为:酶用量＞温度＞pH＞时间;最优组合为温度65℃、时间4 h、pH值8.0、加酶量5%.Alcalase碱性蛋白酶制备蚯蚓小肽的最佳工艺参数为底物浓度6%、温度65℃、时间4 h、pH值8.0、加酶量5%.