猪细小病毒NJ株ST细胞适应性研究

为评价ST细胞代次的增高对猪细小病毒NJ株免疫原性的影响,将第10、30、60代ST细胞分别接种猪细小病毒NJ株F8、F18代毒种进行病毒培养,通过检测其病毒含量、血凝价以及制备疫苗免疫机体的抗体水平等指标来进行评价。结果表明,各代次病毒含量为10~(7.2)～10~(7.5)TCID_(50)/mL,血凝价为2~9～2~(10);制苗后免疫阴性豚鼠与后备母猪,免疫28 d后均出现抗体反应,HI效价分别为2~7～2~9和2~8～2~9。不同代次毒种接种不同代次ST细胞培养的病毒含量、血凝价及疫苗免疫效力均符合要求。各代次细胞增殖性能稳定,培养的PPV NJ株均能满足兽用生物制品的生产要求。     

猪细小病毒PPT1株免疫原性研究

用PPT1株制备猪细小病毒油乳剂灭活疫苗,并将其与市售灭活疫苗免疫豚鼠,定期采集,血清用血凝抑制试验测定抗体效价。试验结果表明,PPT1株在PK-15细胞上病毒增殖效价可达到1.96×106TCID50/mL,两种疫苗二免后14d,抗体效价均可以达到8log2。     

高效佐剂对猪细小病毒和圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果

为评价高效佐剂VA5对猪细小病毒和猪圆环病毒二联灭活疫苗的免疫增强效果,将VA5与猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗混合免疫BALB/c小鼠和豚鼠。结果显示,VA5佐剂能明显提高猪细小病毒血凝抑制抗体效价和血清病毒中和抗体效价,亦能提高猪圆环病毒ELISA抗体和中和抗体效价,并可降低二种抗原的使用量。VA5佐剂显著提高小鼠和豚鼠免疫后的淋巴细胞刺激指数。攻毒后,VA5佐剂处理组动物脾脏PCV2/PPV病毒载量明显低于不含高效佐剂的免疫组。VA5佐剂能提高猪细小病毒、猪圆环病毒疫苗在小鼠/豚鼠中的抗体效价,提高细胞免疫力,降低攻毒后的排毒。     

用豚鼠效检猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗判断标准的初步研究

8批猪细小病毒病油乳剂灭活疫苗共免疫PPV HI抗体阴性猪23头，每批2～3头；免疫阴性豚鼠24只，每批3只。均设不免疫为对照。定期采血，测定PPV HI抗体，进行猪和豚鼠免疫后抗体比较试验。全部出现抗体反应的时间，猪是免疫后1周，豚鼠是免疫后4周。23头免疫猪攻毒后，从血浆和内脏中均未分离到病毒，而从对照猪血浆和内脏中均分离到病毒，证明当免疫豚鼠HI≥64时，免疫猪能抵抗PPV强毒的攻击。     

猪细小病毒病灭活疫苗佐剂筛选及配苗乳化工艺研究

为了筛选制备猪细小病毒病灭活疫苗(L株,悬浮培养)的佐剂,用注射用白油和法国赛比克公司生产的MontanideTMISA 206 VG佐剂(简称206佐剂)分别配制灭活疫苗,通过对两种疫苗的配苗乳化工艺、疫苗性状、无菌检验、安全检验、效力检验和免疫期等方面进行比较。结果显示:与注射用白油配制的疫苗相比,使用206佐剂配苗乳化工艺相对简单;制备疫苗剂型为水包油包水型,易注射,吸收良好;局部和全身均无不良反应,安全性良好;免疫后第7天猪细小病毒206佐剂疫苗免疫猪产生HI抗体效价显著高于白油佐剂疫苗,免疫后第60天猪细小病毒206佐剂疫苗免疫猪HI抗体效价达到峰值;免疫期为6个月。综上,确定206佐剂作为制备猪细小病毒病灭活疫苗的佐剂。     

猪细小病毒N株免疫期测定

用PPV—N株制备成弱毒疫苗,在配种前1个月接种PPV HI抗体阴性的后备母猪,接种2周后检测PPV HI抗体均达到1：256以上。当怀孕到40d时用PPV强毒攻击,攻毒后40d剖杀的2头怀孕母猪其胎儿正常健活,胎儿心血未检测到PPV HI抗体,胎儿脏器未分离到病毒;自然分娩的2头母猪,其仔猪健活,未吃初乳仔猪PPV HI抗体阴性,仔猪脏器未分离到病毒;而强毒攻击的对照猪均出现不同程度的死胎,并从未吃初乳仔猪检测到PPV HI抗体和从死胎儿肺回收到病毒。按上述方法连续观察到第3胎（免疫后15个月）,证明免疫母猪怀孕到第3胎仍能抵抗PPV强毒攻击,说明PPV—N株对母猪的免疫期达1年以上。     

1株猪源乙型脑炎病毒株的免疫原性研究

将从江苏地区筛选出的1株增殖性能稳定猪源JEV JS01毒株作为疫苗,用毒株制备灭活疫苗进行免疫原性研究。试验采用经过细胞传代获得JEV JS01病毒液(1×10~(7.5)TCID50/m L),以甲醛灭活后加入油佐剂,制备猪源乙型脑炎灭活疫苗。腹腔免疫9~12 g小鼠,攻毒保护结果显示对照组小鼠全部死亡,免疫组90%以上健活。分别肌肉注射免疫仔猪及后备母猪,不同时间采集血清测定JEV ELISA抗体。检测结果显示,免疫后试验猪血清抗体效价较免疫前均有显著提高,后备母猪免疫8个月后抗体仍全部为阳性,抗体水平与免疫剂量呈正相关性。试验表明该猪源乙脑病毒JS01毒株具有良好的免疫原性,可以用作疫苗用毒株。     

PPV_(S-1)A株保存期研究及免疫原性测定

为了确保疫苗质量,保证生产用种毒的稳定性,将猪细小病毒PPVS-1A株的干毒和湿毒分别在-20℃和-70℃保存,每12个月取样一次,分别进行病毒含量测定、红细胞凝集价测定、乳鼠安全试验和豚鼠抗体检测。结果病毒含量均大于107.25;红细胞凝集价为1∶1024;乳鼠接种未见不良反应;豚鼠抗体检测HI均不低于1∶32。确定猪细小病毒PPVS-1A株湿毒在-20℃的保存期为24个月,在-70℃的保存期为48个月;猪细小病毒PPVS-1A株冻干毒在-20℃的保存期为36个月,在-70℃的保存期为60个月。猪细小病毒PPVS-1A株毒保存期长,具有良好的安全性和免疫效力。     

猪细小病毒病、伪狂犬病二联灭活疫苗保存期试验

将试制的3批细小病毒病、猪伪狂犬病二联灭活疫苗(批号201601、201602和201603),置于2～8℃冰箱内保存,间隔3、6、9、12和15个月后,分别取出进行疫苗的性状和效力检验,以确定疫苗的稳定性和保存期。结果,疫苗经保存15个月后,物理性状符合现行《中国兽药典》标准;疫苗接种豚鼠进行猪细小病毒部分的效力检验,HI抗体效价均≥1:64,对照鼠HI效价≤1:8;疫苗接种猪伪狂犬病毒中和抗体阴性健康猪进行猪伪狂犬病毒部分效力检验,血清中和指数均≥316,表明接种猪能产生对猪伪狂犬病毒坚强免疫力。试验结果表明,疫苗于2～8℃保存15个月的过程中,稳定性良好,物理性状无变化,免疫效力未降低,保存期达到15个月。     

不同鸭坦布苏病毒病疫苗免疫效果的比较

本研究选取鸭坦布苏病毒病弱毒疫苗(ZJ407-168株、WF100株)、灭活疫苗(ZJ407株、HB株)共4种疫苗,在实验室和鸭场对不同日龄的鸭进行免疫试验,并用间接ELISA法检测免疫后不同时期的抗体。抗体检测结果发现:弱毒疫苗免疫组在免疫后2周抗体阳性率就可达到100%,而灭活疫苗免疫组在免疫后4周抗体阳性率才达90%以上。但灭活疫苗免疫组抗体持续时间长,免疫后6个月抗体阳性率还能维持在90%以上,弱毒疫苗免疫组免疫后3个月抗体阳性率已下降至60%~70%。此外,灭活疫苗免疫组检测到的抗体D值离散差异小,而弱毒疫苗免疫组检测到的抗体D值参差不齐。本研究的结果表明,弱毒疫苗免疫组产生抗体比灭活疫苗免疫组要早14 d,但灭活疫苗免疫组检测到的抗体D值整齐,持续时间较长。上述结果可为临床防疫根据不同疫苗产生抗体的特点,合理使用疫苗,制定有效的免疫程序提供依据。     

猪对禽用禽流感H5N1基因重组灭活疫苗免疫应答

为评估猪对禽流感疫苗的敏感性、安全性和免疫效果,将63日龄育肥肉猪分为4组,按不同剂量进行禽流感H5N1亚型疫苗的免疫试验,其中第1、3组于首免后第21天按同样剂量进行二免。结果表明:试验猪首免后第10天能检出特异性禽流感抗体,随后抗体转阳率和抗体效价持续上升。二免试验组免疫反应优于一免试验组,而以第1组免疫效果最好。同时,采用荧光RT-PCR技术对试验猪的鼻拭样品进行H5亚型禽流感病毒的检测,结果均为阴性,表明目前使用的禽流感H5N1疫苗不会造成猪体带毒,使用安全。     

单稀释法间接ELISA和终点法中和试验检测犊牛轮状病毒疫苗抗体效价比较

用NCDV标准毒株接种恒河猴肾细胞(MA-104),制备病毒抗原液,制成油乳佐剂灭活疫苗进行3月龄以内的犊牛田间免疫试验.结果表明,免疫组的OD492 nm平均值为0.6,免疫40 d后达到峰值1.5,免疫后60、90 d仍维持较高的抗体效价,OD492 nm平均值分别是1.4和0.9.中和抗体效价在二次免疫时、二次免疫40、60、90 d平均值分别为56.668、413.025、314.9、104.64.实验评价OD492 nm值和血清中和抗体效价关系,相关性很大,并证明这种疫苗对预防轮状病毒引起犊牛腹泻是安全有效的.     

猪流感病毒H1N2亚型油乳剂灭活苗的免疫效果

【目的】评估以H1N2亚型猪流感病毒（SIV）制成油乳剂灭活苗的免疫效果,为预防SIV的发生和蔓延提供参考依据。【方法】采用不同剂量的SIV H1H2亚型油乳剂灭活苗对猪只进行免疫,免疫后采血,用HI试验测定抗体效价,连续测定至第10周,然后对猪只进行攻毒,并观察其临床症状及进行病毒检测等。【结果】中免疫剂量组（4 mL/头）和高免疫剂量组（6 mL/头）的抗体滴度高于低免疫剂量组（2 mL/头）;免疫组与对照组在攻毒后猪只的体温无显著差异（P >0.05）,免疫组攻毒后无明显的临床症状,除中免疫剂量组在攻毒后第1 d检测出鼻粘液病毒外,其他时间及其他剂量组均未检测到SIV,对猪只起到良好的保护作用。【结论】SIV H1N2亚型油乳剂灭活苗具有良好的免疫效果,对同亚型病毒的攻击具有一定保护作用,其最佳免疫剂量为4 mL/头。     

免疫增强剂提高禽用二联苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对禽用联苗的免疫增强作用,将VA5分别与市售鸡新城疫-传染性法氏囊(新法)二联苗合用免疫SPF鸡和蛋鸡、与新城疫-H9亚型禽流感(新流)二联苗合用仅免疫SPF鸡,评价免疫后的抗体效价和SPF鸡攻毒后的保护效力。结果显示,SPF鸡或蛋鸡免疫含VA5的新法二联苗、新流二联苗后,新城疫血凝抑制(HI)抗体效价比常规苗组提前1周达到6 log2,禽流感HI抗体效价比常规苗组提前1周达到7 log2,法氏囊血清琼扩抗体和中和抗体比常规苗组均提前1周合格,且3种抗体持续高于常规疫苗组。免疫含VA5疫苗组的SPF鸡对新城疫强毒攻毒,以临床症状判断,可达全保护;以囊病变和临床症状判断,对法氏囊的攻毒提供全保护;H9变异株攻毒后不排毒。对上述3种病毒的保护力均高于常规苗。上述结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新法二联苗、新流二联苗对鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。     

不同新城疫疫苗和免疫途径对鸡新城疫HI抗体的影响

不同新城疫疫苗和免疫途径对鸡新城疫HI抗体的影响试验结果表明,30d内接种进口疫苗组和国产疫苗组HI抗体效价无明显差别,60d后接种进口疫苗组较接种国产疫苗组HI抗体效价高2～3个滴度。在接种途径上,无论进口组和国产组,早期滴鼻点眼途径免疫产生抗体效果相对较好,平均较其他组高0．5～20个滴度;肌注组在早期抗体滴度不及点眼组,但在稳定性上要比其他组强,抗体维持时间较长。     

应用酶联免疫吸附测定检测鸡血液中抗新城疫病毒抗体的动力学研究

应用新城疫ＬａＳｏｔａ系疫苗接种１日龄雏鸡并在２１日龄用ＬａＳｏｔａ系疫苗及油佐剂灭活苗联合接种。应用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）检测鸡血液中抗体水平，并在３０，６０日龄进行攻毒试验。结果表明：ＨＩ效价与攻毒保护率之间没有相关性，不能真正反映出机体的免疫水平，而ＥＬＩＳＡ用于检测其抗体水平具有很高的敏感性，ＥＬＩＳＡ滴度与攻毒保护率具有相关性，可作为评定机体免疫力的可靠指标。     

应用非脂佐剂提高鸡新城疫(ND)Ⅱ系弱毒疫苗效力的研究

2,4日龄雏鸡接种非脂佐剂苗进行首免后,HI抗体滴度的升高不受母源抗体的干扰,注射该苗雏鸡的HI抗体滴度极显著地高于Ⅱ系苗接种组(p>0.01);HI抗体滴度下降至有效滴度以下的时间也优于Ⅱ系苗组。人工感染IBD造成免疫缺陷的雏鸡接种非脂佐剂苗,能够使其HI抗体滴度达到健康雏鸡单独应用Ⅱ系苗的水平(p>0.05)。非脂佐剂苗的保护力明显高于Ⅱ系苗(p>0.05),并且非脂佐剂苗具有Ⅱ系苗同样的安全性。当母源抗体降为零或给雏鸡二免时,非脂佐剂苗无明显提高HI滴度的作用,与Ⅱ系苗组相比较,差异不显著(P>0.05)。非脂佐剂苗免疫雏鸡和Ⅱ系苗免疫雏鸡具有相同的细胞免疫水平(p>0.05)。     

多巴胺对鸡新城疫疫苗抗体效价的影响

将180只10日龄公鸡随机均分成9组,用新城疫LaSota弱毒疫苗(ND)点眼滴鼻免疫的同时,3个实验组分别肌肉注射高、中、低剂量的多巴胺激动剂和拮抗剂溶液,注射1次/d,连续注射3次,对照组注射生理盐水。各组分别于免疫后7、14、21、28 d翼下静脉采血,分离血清,用微量血凝抑制(HI)测定新城疫抗体效价。结果表明,多巴胺(DA)受体激动剂中剂量组的HI抗体效价明显高于对照组,且呈现一直上升趋势;多巴胺(DA)受体拮抗剂的高剂量组抗体效价明显低于对照组,且呈现一直下降趋势;表明DA对新城疫疫苗的抗体效价有明显的调节作用。