长葛市某蛋鸡场高致病性禽流感疫苗免疫效果分析

禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病,疫苗免疫接种是预防禽流感最经济、有效的手段,为探讨高致病性禽流感疫苗的免疫效果,长葛市某蛋鸡场采用H5亚型禽流感三价灭活疫苗对17日龄鸡群进行首免,对55日龄鸡群进行二免,对124日龄鸡群进行三免,对鸡群免疫后的抗体水平进行了监测与分析。结果显示首免后39天,H5亚型Re-6抗体平均值(log2)达到3.9,二免后16天、32天、48天、63天鸡群H5亚型Re-6抗体平均值(log2)分别达到6.1、7.8、7.0、6.9,三免后9天、24天、39天鸡群H5亚型Re-6抗体平均值(log2)分别达到7.6、8.5、8.0。经过三次免疫之后,鸡群抗体值均达到较高水平,该养殖场的免疫程序对鸡群起到良好的免疫保护效果。     

H5N1Re-5株和H9亚型SS株对土三黄鸡的免疫效果对比

[目的]探究H5N1Re-5株和H9亚型SS株对土三黄鸡不同的免疫效果。[方法]选用广西桂林市某种鸡场土三黄鸡180只,试验组注射禽流感H5和H9疫苗,对照组不注射疫苗,检测145日龄注射H5和H9疫苗后的抗体水平。[结果]禽流感H5疫苗145日龄注射后第170日龄抗体检测：试验1、2组分别比各自对照组的平均抗体值比较差异达0.01极显著水平;禽流感H9疫苗145日龄注射后第170日龄抗体检测：试验1、2组分别比各自对照组的平均抗体值比较差异不显著。[结论]禽流感H5疫苗145日龄注射后能显著地提高抗体水平;禽流感H9疫苗145日龄注射后不能显著地提高抗体水平。     

不同禽流感疫苗免疫蛋鸡后抗体效价变化和消长规律研究

应用H5、H9禽流感灭活油乳剂苗,按不同方案免疫蛋鸡,应用进口ELISA诊断试剂盒监测免疫后蛋鸡的禽流感抗体水平.结果发现,蛋鸡对H5亚型禽流感疫苗免疫应答较强,免疫后30 d抗体水平即达峰值,高滴度抗体持续3个月,首免后7 d加强免疫组抗体水平更高,持续时间更长.相应禽流感疫苗再次免疫后,H5亚型疫苗组抗体水平升高更快,免疫有效期达150 d左右;蛋鸡对H9亚型禽流感疫苗应答能力较弱,抗体峰值和持续时间也较低,再次免疫后抗体水平未见明显升高.     

禽流感疫苗免疫商品代蛋鸡免疫抗体水平和消长规律检测

将6批次的商品代蛋鸡13 700羽分成6个试验组,用6种不同的禽流感疫苗分别接种商品代蛋鸡,疫苗免疫之后每间隔2周采血分离血清,检测禽流感H5和H9的抗体滴度和抗体持续期.结果表明HVK-2、SDYB、ZZZM三个试验组的H5抗体在免疫后的第2周达到4log2以上,CDJH和HVK-1两个试验组的H5抗体接近4log2,到第4周时,抗体滴度达到峰值,以后逐渐下降,而HVK-3试验组则几乎测不到H5抗体.H9抗体在疫苗免疫后2周全部达到5log2以上,HI抗体滴度普遍高于H5.对5组试验鸡分别进行了2次禽流感疫苗免疫,经过加强免疫的H5抗体水平普遍高于一免,并且抗体持续期明显延长.     

H5亚型禽流感灭活疫苗的研制

以H5N1亚型禽流感病毒接种鸡胚，收取鸡胚液为抗原研制了禽流感灭活疫苗，并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验。结果表明，获得了较高效价的制苗抗原．灭活前后HA分别为2^10.0-11.0和2^9.0-10.0。试制疫苗物理性状符合要求，安全性良好。试验鸡在免疫14d后血清抗体达到2^7.5，210d血清HI抗体仍维持在2^5.0左右；免疫后18d使用高致病性H5亚型禽流感病毒攻毒，获得100％的保护。分别使用0．1，0．3和0．5mL免疫鸡，发现0．3～0．5mL剂量组免疫后血清抗体达到2^7.4-8.0。疫苗在2～8℃保存540d，疫苗物理性状没有改变，免疫后血清HI抗体可以达到2^7.5。这提示研制的疫苗可以有效控制禽流感H5亚型的流行。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型蛋鸡禽流感抗体效价的影响

【目的】研究肌注中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型蛋鸡血清中禽流感抗体效价的影响。【方法】试验采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同基因型分组,再将各基因型组分成高、中、低剂量中药复方多糖组和空白对照组。各组试验鸡分别于8日龄肌注50、25和12.5 mg/mL中药复方多糖和生理盐水,0.2 mL/只,连续7 d,于27、35、42、49日龄从各组随机抽取5只试验鸡,翅下静脉采血并分离血清,用微量血凝抑制试验(HI)检测血清中H5与H9亚型禽流感抗体效价。【结果】免疫前,各剂量中药复方多糖组H5N1 Re-6和H9N2母源抗体平均效价高于对照组,且高剂量AA和BC基因型鸡血清中H5N1母源抗体效价显著高于对照组(P0.05);免疫后7 d,AA基因型鸡高、中、低剂量组的H5亚型禽流感抗体效价均显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡高剂量组H5亚型禽流感抗体效价显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡高、中、低剂量组H9亚型禽流感抗体效价显著高于对照组(P0.05);免疫后14 d,AA基因型鸡高、中剂量组H5亚型禽流感抗体效价显著高于对照组(P0.05),BB基因型鸡中剂量组显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡中剂量组H9亚型禽流感显著高于对照组(P0.05);免疫后21 d,BC基因型鸡高、中剂量组H5亚型禽流感显著高于对照组(P0.05),BC基因型鸡高剂量组显著高于对照组(P0.05)。【结论】不同剂量中药复方多糖均能不同程度的提高各基因型蛋鸡血清中H5和H9亚型禽流感抗体效价,且以中剂量和高剂量效果好。     

禽流感DNA疫苗(H5亚型Re-8株)对黄羽肉鸡免疫程序的优化

[目的]本试验旨在探索禽流感DNA疫苗(H5亚型Re-8株)对黄羽肉鸡的免疫效果及合理的免疫程序。[方法]选取1日龄健康未免疫禽流感疫苗的黄羽肉鸡210羽,随机分为7组,每组30羽,其中A、B、C 3组为单次免疫试验组,分别于1、10和14日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg; D、E、F组为加强免疫试验组,D、E 2组分别于14和10日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg, 3周后D组加强免疫同种疫苗,每羽30μg, E组加强免疫H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗,每羽0.3 mL;F组为灭活苗对照组,于10和31日龄分别免疫0.3 mL H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗;G组为空白对照组。各组受试鸡于免疫前和免疫后每周(后期每2周)采集血液并测定血清HI效价,研究受试鸡母源抗体和免疫期抗体的消长规律。[结果]黄羽肉鸡母源抗体HI效价至14日龄降至3.5,抗体合格率低于40%。单次免疫禽流感DNA疫苗时,14和10日龄免后1～2周HI抗体开始升高,1日龄免疫后3周抗体持续下降。禽流感DNA疫苗或二价灭活疫苗加强免疫后1周HI抗体效价均可达到5.0。[结论]黄羽肉鸡于10和14日龄免疫禽流感DNA疫苗,每羽30μg,免疫后3周,每羽0.3 mL H5禽流感D7+rD8二价灭活疫苗或每羽30μg禽流感DNA疫苗加强免疫后,可为鸡群提供长期的免疫保护。     

蛋鸡H5灭活疫苗抗体消长规律的试验

为了在临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序,用重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)分别在14日龄、49日龄、105日龄免疫蛋鸡,免疫剂量分别为0.3ml/只、0.5ml/只、0.5ml/只。分别在第1、6、10、14、20、28、35、42、49、56、63、70、77、86、94、105、120、150、180日龄采血测定HI抗体效价。结果表明首免后HI抗体上升较慢较低,只有第二次免疫后,抗体才迅速升高。在70日龄(二免后3周)时H5N1,Re-4HI抗体达到9.601og2,H5N1,Re-5HI抗体达7.861og2。在120日龄(三免后2周)时H5N1,Re-4HI抗体达到9.301og2,H5N1,Re-5HI抗体达到9.251og2。     

两种弓形虫疫苗对猪的免疫效果观察

[目的]研究2种弓形虫疫苗对猪的免疫效果。[方法]利用韩国国立兽医科学检疫院提供的2种弓形虫疫苗对试验猪群进行2次免疫。采用间接免疫荧光技术（IFAT）对一免、二免后猪群的抗体效价进行检测,评定疫苗对动物的免疫效果。[结果]首免后第2周,第1组疫苗的抗体效价达到1∶（119±24.18）,第2组疫苗的抗体效价达到1∶（96±39.19）;二免后第2周,第1组抗体效价平均值达到1∶（635±153.94）,第2组抗体效价达到1∶（547±165.84）,2组疫苗免疫效果差异不显著。[结论]试验用的2种弓形虫疫苗均对猪群起到一定的免疫效果。     

樱桃谷肉鸭超早期接种禽流感（H5N1）疫苗的免疫效果试验

樱桃谷肉鸭的超早期接种禽流感（H5N1）疫苗的免疫效果试验结果表明,在第7天和第12天进行禽流感疫苗注射,检测肉鸭的母源抗体和免疫后的抗体变化,母源抗体对鸭体有9-10d的保护期,通过早期免疫,在32d都能产生出合格的抗体。因此,开展超快速型肉鸭禽流感疫苗超早期免疫有一定的意义。     

番鸭体内H5亚型禽流感HI抗体与抗感染关系研究

对经过H5N1油苗免疫的50日龄番鸭,按HI抗体水平分组后,进行人工接种HPAIV,通过试验鸭的临床症状、病理变化和排毒情况综合判断HI抗体水平与保护力之间的关系。结果表明,HI抗体水平在5.0log2以下时,番鸭群可感染HPAIV,出现临床症状,表现不同程度的病理变化,并有排毒现象。抗体水平达到3.0log2~5.0log2的免疫番鸭群已具有一定的抵抗力,可以延缓发病时间,降低发病程度。随抗体水平的升高,发病与排毒的程度有所下降。当抗体水平达6.0log2及以上时,番鸭对人工接种HPAIV具有完全抵抗能力,不排毒。因此,番鸭对H5N1亚型HPAIV具完全抵抗力的HI抗体水平的临界保护滴度为6.0log2。     

广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及遗传进化分析

[目的]明确广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子遗传变异规律及其对公共卫生安全的影响,为H9亚型禽流感(AI)的防控提供参考依据.[方法]从广西某肉鸡养殖场采集病料,经SPF鸡胚接种进行病毒分离,对初步鉴定为H9亚型AIV分离株的HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M和NS等8个基因片段进行克隆测定及遗传进化分析,同时对分离毒株的生物学特性进行测定.[结果]从广西发病鸡群中分离获得一株H9N2亚型AIV,命名为A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2).分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)HA基因的裂解位点为PSRSSR↓GLF,具有典型的低致病性AIV(LPAIV)分子特征,在遗传进化关系上属于4.2.5分支,与国内常用H9N2亚型AIV疫苗株所属的4.2.3分支存在一定差异;其他7个基因也分别来源于不同的AIV亚型.分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016 (H9N2)同时具备与α-2,3唾液酸和α-2,6唾液酸受体结合的特性,且具有感染人类的潜在风险;其感染鸡群后病毒分布主要集中在气管、肺脏和脾脏,可通过呼吸道和消化道同时排毒,且在攻毒后第1d即开始排毒,第5d为排毒高峰.[结论]从广西发病鸡群中分离获得的A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)属于LPAIV,是由不同亚型AIV重组产生的H9N2亚型新毒株,可导致鸡群疫苗免疫失败,且具有感染人类的潜在风险.     

免疫程序对肉鸡新城疫·禽流感(H5亚型)HI抗体消长规律的影响

[目的]为制定商品肉鸡新城疫(ND)、禽流感(AI)的免疫程序提供理论依据。[方法]在调查不同规模化养殖场免疫程序的基础上,制定商品肉鸡的免疫程序,分析不同免疫程序下ND和AI(H5亚型)HI抗体消长规律。[结果]1~7日龄商品肉鸡ND和AI的母源抗体均维持在免疫保护临界值之上。用ND疫苗免疫后,鸡群抗体水平不断下降,各免疫组均在24日龄最低。使用ND活疫苗和灭活苗的免疫组中ND抗体滴度比其他免疫组高。非免疫组AI(H5亚型)抗体滴度均随日龄的增加而逐渐下降,而免疫组24日龄后缓慢上升,38日龄达到免疫保护临界值。[结论]禽流感(H5亚型)灭活苗对商品肉鸡的免疫效果较差,应从免疫佐剂、抗原浓缩等方面进行新型商品肉鸡禽流感疫苗研究。     

禽流感灭活疫苗对商品肉鸭免疫效果的评价

为了了解和掌握商品肉鸭高致病性禽流感疫苗的免疫效果,对不同日龄的商品肉鸭进行了免疫试验.结果表明,3～10日龄时(H组)免疫,可以有效地刺激肉鸭产生禽流感HI抗体,并一直持续到40日龄;但由于母源抗体的干扰,在20日龄前后5～7 d,是一段易感染的免疫空白期.建议每年禽流感的免疫预防须提前到10月中上旬进行,以使侯鸟南飞迁徙时,所有家养水禽有充足的时间产生免疫力.     

一株H3N2亚型猪流感病毒的分离鉴定

为了给猪流感疫苗的研制做准备,试验将从某猪场现地采集疑似猪流感发病猪的鼻拭子样品,经过处理后接种至10~11日龄SPF鸡胚进行盲传,分离到1株具有血凝性的病毒。通过血清学、分子生物学鉴定、电镜观察、动物回归试验等方法对该病毒进行鉴定。结果发现:该病毒可与猪流感病毒H3亚型阳性血清特异性结合;通过分子生物学检测,该分离株出现猪流感病毒H3亚型和N2亚型目的片段;将该分离株液置于电镜下观察可见直径为80~120 nm且具有囊膜和纤突的病毒粒子,符合猪流感病毒粒子形态特征;用纯化后的病毒攻击4~6周龄阴性仔猪,攻毒组仔猪发病率可达80%。由此可见分离获得的病毒为H3N2亚型猪流感病毒。     

VA5免疫增强剂对鸡新支流三联疫苗免疫效力及肉鸡生产性能的影响

将VA5复方免疫增强剂与市售鸡新城疫–传染性支气管炎–禽流感(H9亚型)三联油乳剂灭活疫苗(以下简称“新支流三联疫苗”)合用免疫黄羽肉鸡，检测免疫后肉鸡的抗体效价、细胞因子及生产性能变化，评价VA5对鸡新支流三联疫苗的免疫增强作用及对肉鸡生产性能的影响。结果表明：黄羽肉鸡免疫含VA5的新支流三联疫苗后，在相同免疫剂量和免疫时间，血清和支气管肺泡冲洗液中针对新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV(H9))的血凝抑制(HI)抗体效价均显著高于无VA5疫苗组的；泪液及小肠黏液中针对NDV、IBV和AIV(H9)的IgA抗体效价均高于无VA5疫苗组的；血清中IFN–γ和IL–4质量浓度均极显著高于无VA5疫苗组的；肉鸡出栏前，免疫含VA5的新支流三联疫苗组针对NDV和AIV(H9)的HI抗体合格率高于无VA5疫苗组的；添加VA5，提高了肉鸡平均成活率和上市率，同时降低了平均料肉比、呼吸道致病发病率和死淘率，增加了鸡只均质量，只均综合经济效益增幅达11.67%。综上所述，VA5免疫增强剂能提高新支流三联疫苗对黄羽肉鸡的免疫效力，同时提高了生产性能。     

禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法的建立

【目的】建立用于检测禽流感病毒（Avianinfluenzavirus,AIV）且能同时区分H1和H3亚型AIV的方法,为有效防控禽流感（Avianinfluenza,AI）奠定基础。【方法】根据H1亚型、H3亚型AIV-HA基因和M基因的保守核苷酸序列,分别设计3对特异性引物,以含有H1亚型AIV和H3亚型AIV的cDNA为模板,对三重PCR扩增条件进行优化,验证其特异性和敏感性,并对临床样品进行AIV检测。【结果】H1和H3亚型AIV混合模板经三重PCR扩增可获得3条特异性条带,其中302bp为H1亚型HA基因、453bp为M基因、626bp为H3亚型HA基因;含有H1或H3亚型AIV的模板均出现两条特异性条带,大小分别为302和453bp、453和626bp;含有其他亚型AIV的模板仅出现一条特异性条带（453bp）;而其他禽呼吸道疾病病毒均未扩增出任何条带。优化后的三重PCR最低能同时检测出7.00pg的H1亚型AIV、3.62pg的M基因和20.60pg的H3亚型AIV;对100个临床样品进行AIV检测,AIV总阳性率为36%,其中H1亚型阳性率4%、H3亚型阳性率9%、其他亚型阳性率23%。【结论】禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法具有快速、敏感、特异等特点,适用于AIV的检测及H1和H3亚型AIV的分型检测。     

繁殖障碍型H3亚型猪流感病毒的分离与鉴定

于广东惠州市某猪场采集流产死胎的肺组织、胎衣及鼻棉拭子,病料处理后经SPF鸡胚绒毛尿囊腔接种获得1株有血凝(HA)活性的病毒,通过AGP试验初步确定为猪流感流感病毒;但此病毒的血凝现象不能被抗H1亚型猪流感单因子血清、抗H5亚型猪流感单因子血清、抗H7亚型猪流感单因子血清、抗H9亚型猪流感单因子血清抑制,而能被抗H3亚型猪流感单因子血清抑制;通过H3亚型猪流感病毒RT-PCR分子生物学诊断,最终确定该病毒为H3亚型猪流感病毒.动物回归试验结果显示,攻毒小鼠出现精神萎靡、厌食、嗜睡、被毛松乱、呼吸较急促,攻毒后7 d采集小鼠血清进行检测,HI效价为3log2～4log2;剖检发现病毒性肺炎,且能从病料中再次分离到H3亚型猪流感病毒.     

禽流感单价与二价油乳剂灭活苗免疫鸡群HI抗体水平比较

用禽流感单价与二价油乳剂灭活苗免疫试验鸡群 ,于 42 ,68,91日龄采用HI血凝抑制试验测定其抗体水平 ,结果表明 :首免后 ( 4 2日龄 )和二免后 ( 68日龄与 91日龄 ) ,注射二价油乳剂灭活苗的B群鸡的H5N1 亚型抗体水平均明显高于注射单价苗的A群鸡 ,其中在 42和91日龄时差异极显著 ( p <0 .0 1 ) ,在 68日龄时差异显著 ( p <0 .0 5 ) ;B群鸡的H9N2 亚型抗体也明显高于A群鸡 ,其中在 42日龄和 68日龄时差异极显著 ( p <0 .0 1 )。     

猪流感病毒H1N2亚型油乳剂灭活苗的免疫效果

【目的】评估以H1N2亚型猪流感病毒（SIV）制成油乳剂灭活苗的免疫效果,为预防SIV的发生和蔓延提供参考依据。【方法】采用不同剂量的SIV H1H2亚型油乳剂灭活苗对猪只进行免疫,免疫后采血,用HI试验测定抗体效价,连续测定至第10周,然后对猪只进行攻毒,并观察其临床症状及进行病毒检测等。【结果】中免疫剂量组（4 mL/头）和高免疫剂量组（6 mL/头）的抗体滴度高于低免疫剂量组（2 mL/头）;免疫组与对照组在攻毒后猪只的体温无显著差异（P >0.05）,免疫组攻毒后无明显的临床症状,除中免疫剂量组在攻毒后第1 d检测出鼻粘液病毒外,其他时间及其他剂量组均未检测到SIV,对猪只起到良好的保护作用。【结论】SIV H1N2亚型油乳剂灭活苗具有良好的免疫效果,对同亚型病毒的攻击具有一定保护作用,其最佳免疫剂量为4 mL/头。