A型魏氏梭菌毒素毒力测定替代试验

通过Kaerber方法测定α毒素对小鼠的半数致死量后 ,定量出 10LD50 毒力标准的毒素所能引起卵磷脂水解反应的稀释度为 6 ,每一水解稀释度相当于LD50 /6 4的毒力标准 ,从而建立起A型魏氏梭菌毒素毒力测定动物试验的替代试验。α毒素毒力与卵磷脂水解反应的浑浊度在该试验条件下具有稳定的相关性 ,不同批次的卵磷脂及毒素中所含菌体的数量对试验结果的判定无影响。该替代试验比原方法操作更简单 ,取材也经济 ,并能对毒素毒力进行定量计算     

抗α毒素1D5单抗ScFv基因表达菌株生物学活性的研究

为研究抗A型魏氏梭菌α毒素ScFv蛋白的生物学功能,利用PCR技术克隆抗α毒素1D5单抗的ScFv基因,构建含ScFv基因表达质粒pHOG-1D5的重组表达菌株XL1-BLUE (pHOG-1D5)。酶切鉴定和序列分析证实构建的pHOG-1D5重组表达质粒含有ScFv基因,且基因序列和阅读框架正确。ELISA检测结果表明在重组菌株XL1-BLUE (pHOG-1D5)培养上清和细胞周质中均检测到目的蛋白。SDS-PAGE分析表明目的蛋白表达量占菌体总蛋白相对含量的29.2%。同时对ScFv蛋白生物学活性进行检测,结果表明其能中和α毒素的卵磷脂酶活性且能够对致死性腹腔攻击α毒素的小鼠产生良好的被动保护作用,从而为临床治疗α毒素中毒奠定了坚实基础。     

大肠杆菌热稳定肠毒素Ⅰ和卵清蛋白融合蛋白的表达及免疫原性分析

为探究大肠杆菌热稳定肠毒素Ⅰ(Heat-stable toxin typeⅠ,STa)和鸡卵清蛋白(Chicken ovalbumin)串联表达的3×STa-ovalbumin重组融合蛋白的免疫原性,原核表达融合蛋白后,经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠,利用ELISA方法测定免疫小鼠血清中抗STa抗体的滴度,应用体外中和试验检测抗体对STa毒素的中和作用。SDSPAGE检测结果显示,融合蛋白分子质量约42 ku;Western blot分析结果显示,融合蛋白可被STa阳性血清特异性识别。小鼠免疫试验结果表明,融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导机体产生的抗STa抗体滴度达到2.33,并且产生的抗体能在体外中和STa的毒性作用。以上结果表明,3×STaovalbumin融合蛋白具有良好的免疫原性。     

大黄鱼鱼卵磷脂酶水解法提取工艺的优化

为了充分提取和利用大黄鱼鱼卵中的磷脂,研究酶水解法提取大黄鱼鱼卵磷脂的工艺。通过单因素试验和响应面设计优化试验,确定酶水解法的最佳工艺条件,并比较酶水解法与溶剂法、超声波法的提取效果。结果表明,选用内切型木瓜蛋白酶、料液比1∶2、pH 6.0、酶解温度45 ℃、酶解时间1.5 h和加酶量125 U/g为较佳工艺条件。在此条件下,产品的平均提取率可达70.92%,表明响应面法用于对大黄鱼鱼卵磷脂提取条件的优化是可行的。工艺放大试验结果表明,酶水解法的提取率比溶剂法和超声波法分别提高了22.02%和9.6%,说明酶水解法是提高大黄鱼鱼卵磷脂提取率的较好方法。     

玉米中霉菌毒素对仔猪疫苗免疫应答的影响

[目的]研究霉变玉米中的毒素对仔猪免疫应答的影响。[方法]使用ELISA方法测定了霉变玉米中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的含量;将霉变玉米饲喂仔猪,并测定仔猪血清中相应的抗体效价。[结果]试验组抗体水平明显低于对照组,免疫器官的组织切片也表明霉菌毒素可以明显抑制仔猪的免疫应答反应。[结论]玉米霉菌毒素对仔猪内脏器官和免疫应答具有重要影响。     

玉米中霉菌毒素对仔猪疫苗免疫应答的影响（摘要）

[目的]研究霉变的玉米中的毒素对仔猪免疫应答的影响。[方法]使用ELISA方法测定了霉变玉米中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的含量;将霉变玉米饲喂仔猪,并测定仔猪血清中相应的抗体效价。[结果]试验组抗体水平明显低于对照组,免疫器官的组织切片也表明霉菌毒素可以明显抑制仔猪的免疫应答反应。[结论]玉米霉菌毒素对仔猪内脏器官和免疫应答具有重要影响。     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]为黄曲霉毒素类生物毒素研究提供试验参考。[方法]黄曲霉毒素B1与人血清白蛋白耦联后免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过阳性株的筛选和克隆等步骤,制备了3株稳定分泌抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体,用酶联免疫吸附试验测定抗体的效价和特异性。[结果]成功地筛选出能够分泌抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备出对黄曲霉毒素B1具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体。[结论]为鲜奶及奶粉的快速筛检提供了技术支持。     

生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析

为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。     

间接ELISA检测团头鲂血清抗病毒半乳糖凝集素样蛋白

纯化团头鲂抗病毒半乳糖凝集素样蛋白并自制其兔抗血清 ,在此基础上建立间接ELISA ,测定团头鲂血清中的半乳糖凝集素样蛋白的含量。结果表明 ,血清中的平均含量为 0 79mg·mL-1;团头鲂血清及纯化的团头鲂半乳糖凝集素样蛋白抗草鱼出血病病毒效价分别为 5 12和 12 8,二者中和指数分别为 4 5 7和 177。所建立的方法与经典的中和试验有较好的平行关系     

皱果苋提取物的抗炎及抗癌作用研究

为评价皱果苋提取物的抗炎活性及抗癌作用,采用脂多糖(LPS)构建RAW264.7巨噬细胞炎症模型,用Griess法测定细胞NO水平,并通过RT-PCR法测定细胞因子TNF-α、IL-6mRNA表达量;用MTT方法测定对HepG2细胞的增殖作用,并用RT-PCR法测定caspase-3mRNA表达量。结果表明:皱果苋乙酸乙酯提取物(EAA)可降低炎症细胞因子TNF-α和IL-6分泌量及NO释放量。乙醚提取物(EEA)对HepG2细胞具有浓度依赖性抑制细胞增殖作用。这一研究提示,皱果苋EAA具有很高的抗炎活性,EEA具有抑制HepG2肝癌细胞增殖的作用。     

无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析

为获得分泌表达的无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白并分析其免疫原性,根据A型产气荚膜梭菌α毒素基因序列,对α毒素的第176位组氨酸突变为天冬酰胺,同时对信号肽序列进行密码子优化,将化学合成的该序列插入到载体pET32a,获得重组质粒pET32a-αH176N,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),通过自诱导的方法分泌表达重组αH176N蛋白。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,αH176N蛋白在乳糖1～2 g/L、28℃诱导条件下高效分泌表达。卵磷脂酶试验及小鼠毒力试验显示,αH176N蛋白失去磷脂酶C活性及毒性。免疫保护试验结果显示,αH176N蛋白与氢氧化铝胶配制成的疫苗,以0.25 mL/只免疫试验兔就能达到100%(6/6)的免疫保护效果,优于传统灭活疫苗免疫2 mL/只的保护效果。     

含腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素基因的重组大肠杆菌的高密度发酵和免疫效果

为确定含腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白的生产效率并评价其作为抗原的免疫效果,用生物反应器对重组大肠杆菌DE3-pET-AE进行高密度发酵,并将其制苗后以不同抗原剂量分别接种家兔和绵羊,间隔21 d进行二免,分别测定一免、二免动物混合血清的中和效价。发酵结果显示,培养物菌体密度D_(600 nm)达20.3,相对表达量为27.6%,D_(600 nm)与相对表达量的乘积为摇瓶培养的6.5倍,菌体湿质量为37.2 g/L;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,目的蛋白以可溶形式表达。动物免疫效果评价结果显示,在家兔和绵羊上,抗原含量与免疫效果在一定的范围内均呈正相关,当接种量为300μg/只时,免疫效果均最好;对腐败梭菌毒素与D型产气荚膜梭菌毒素的血清中和效价,在家兔上一免、二免分别达4与30、15与200,在绵羊上一免、二免分别达2与30、12与250。结果表明,DE3-pET-AE菌高密度发酵可获得高产量蛋白抗原,且抗原的免疫效果明显优于《中华人民共和国兽药典》合格标准。     

鸡传染性囊病的微量血清中和试验

本文报道利用鸡传染性囊病(IBD)国外引入的一株细胞适应病毒而进行的微量血清中和试验。采用了国产的聚苯乙烯微量培养板、鸡胚成纤维细胞和Earle氏水解乳蛋白营养液。对方法的摸索过程作了较详细的描述。本试验敏感性高,对调查传染性囊病在鸡群里的流行情况是一个有力的武器。利用这个方法检测一批人工感染鸡的血清中和抗体水平的结果表明,对于传染性囊病来说,预防24日龄以下的幼鸡发病是最主要的。     

猪精液抑制素主动免疫黄牛诱导超数排卵的研究

为研究中和内源抑制素对排卵的影响，用猪精液抑制素粗品，对产后２￣５个月的２５头母黄牛进行主动免疫。粗制品用福氏完全佐剂乳化后间隔２０ｄ免疫两次。在配种后第１０ｄ对１１头发情母牛经直肠触摸卵巢，同时颈静脉采血。根据血清孕酮水平与排卵数之间的线性回归关系测定血清孕酮，采用直肠触摸黄体数推算排卵率。排２个以上卵的母牛占３６％（４／１１）。结果表明，用猪精液抑制素主动免疫黄牛可以提高其排卵率。     

鹿魏氏梭菌制苗菌株生物学特性的研究

对鹿魏氏梭菌ＤＮＡ０６和ＤＷ１３生物学特性进行了研究。结果证实,两株菌１０ｈ厌气肉肝汤培养的毒力最强,其毒素滴度分别为１：２＾８和１：２＾７,对小白鼠ＭＬＤ分别为０．００５ｍｌ和０．０１ｍｌ,对家兔ＭＬＤ为０．３ｍｌ;魏氏梭菌的Ａ、Ｂ、Ｃ型定型血清可抑制两株菌的卵磷脂酶活性,５５℃３０ｍｉｎ可使魏氏梭菌毒素失活,０．８％甲醛５ｄ可使毒素完全脱毒;两株菌对氧氟沙星、乳酸诺氟沙星敏感;血清分型证实两株     

T-2毒素完全抗原制备及免疫学检测方法的建立

为建立小分子霉菌毒素中T-2毒素残留的检测方法,合成并鉴定T-2毒素完全抗原,通过制备敏感性强的抗T-2毒素多抗血清,建立T-2毒素免疫学检测方法。采用N,N'-羰基二咪唑(CDI)法合成完全抗原T-2-BSA和包被原T-2-OVA,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和动物免疫试验对合成的完全抗原进行鉴定,优化ELISA反应条件,建立T-2毒素间接竞争ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,完全抗原T-2-BSA合成成功;动物试验结果显示,制备的完全抗原能够刺激小鼠产生针对T-2毒素的特异性抗体;基于该抗体所建立的T-2毒素间接竞争ELISA检测方法的灵敏度(IC50)为8.34 ng/m L,检测限(LOD)为0.048 ng/m L。综上,成功合成了完全抗原T-2-BSA,获得了效价高、敏感性强的抗T-2毒素的鼠源多克隆抗体,并初步建立了T-2毒素免疫学检测方法。     

应用α-淀粉酶水解城市生活垃圾的研究

摘要用α-淀粉酶水解城市生活垃圾,研究了水解过程中α-淀粉酶添加量、水解温度、水解时间和底物浓度对水解度的影响。结果表明,α-淀粉酶水解城市生活垃圾的适宜条件为：α-淀粉酶添加量80IU／g,水解时间60min,水解温度80℃,底物浓度10％．     

雏鸵鸟新城疫的快速诊治报告

根据临床症状、病理变化,采用新城疫单抗酶联免疫试剂盒对病死鸵鸟的泄殖腔及喉气管黏膜刮取样品进行快速检验,初步确诊为新城疫（ND）病毒感染。因此,对患病鸵鸟及未发病的鸵鸟分别按治疗量和预防量注射提纯的山羊抗鸡新城疫血清,配合抗生素治疗,使病鸵鸟康复,控制了疫情。通过进一步的病毒分离培养,新城疫标准阳性血清、鸡法氏袭及禽流感标准阳性血清的中和试验确诊为鸵鸟新城疫。     

应用赤霉菌粗毒素测定小麦品种的抗赤霉病性

小麦赤霉菌 Gibberella zeae(Schw.)Petch 在麦粒培养基上进行固体产毒培养,从中提取粗毒素。用粗毒素溶液处理小麦抗感赤霉病不同品种萌动—致的种子以及—叶期幼根和叶鞘。用 DDS-11A 型电导仪测定细胞渗透性变化。结果表明,在粗毒素作用下,小麦根、芽生长受抑制。但抗病品种受抑轻,感病品种受抑重。抗感品种幼根和叶鞘细胞渗透性的变化差异明显。用赤霉菌粗毒素测定细胞渗透性的变化,有可能作为鉴定小麦品种抗赤霉病的一个生理指标。     

产气荚膜梭菌α毒素基因的定点突变与表达

选择可能影响α毒素生物活性的氨基酸相关碱基位点进行定点突变,构建α毒素基因的突变体并在大肠杆菌中表达。利用PCR定点突变技术,进行第68位组氨酸→亮氨酸的定点突变,构建含α毒素突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)。结果表明,α毒素突变基因第287位核苷酸由A→T,经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pXMCPA02含有α毒素突变基因,且基因序列和阅读框架正确;重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)表达产物经SDS-PAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的33.82%。因此,已成功构建了α毒素基因突变体,并实现了在重组大肠杆菌中的表达。