无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析 |
| |
引用本文: | 魏后军,范志宇,胡波,仇汝龙,陈萌萌,宋艳华,徐为中,王芳.无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白的自诱导分泌表达及免疫原性分析[J].江苏农业科学,2022(14):166-169. |
| |
作者姓名: | 魏后军 范志宇 胡波 仇汝龙 陈萌萌 宋艳华 徐为中 王芳 |
| |
作者单位: | 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室 |
| |
基金项目: | 现代农业产业技术体系建设专项(编号:CARS-43-C-1); |
| |
摘 要: | 为获得分泌表达的无毒性产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白并分析其免疫原性,根据A型产气荚膜梭菌α毒素基因序列,对α毒素的第176位组氨酸突变为天冬酰胺,同时对信号肽序列进行密码子优化,将化学合成的该序列插入到载体pET32a,获得重组质粒pET32a-αH176N,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),通过自诱导的方法分泌表达重组αH176N蛋白。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,αH176N蛋白在乳糖1~2 g/L、28℃诱导条件下高效分泌表达。卵磷脂酶试验及小鼠毒力试验显示,αH176N蛋白失去磷脂酶C活性及毒性。免疫保护试验结果显示,αH176N蛋白与氢氧化铝胶配制成的疫苗,以0.25 mL/只免疫试验兔就能达到100%(6/6)的免疫保护效果,优于传统灭活疫苗免疫2 mL/只的保护效果。
|
关 键 词: | 产气荚膜梭菌 α毒素 自诱导 分泌表达 免疫原性 |
|
|