坛紫菜藻红蛋白粗提技术的研究

[目的]快速、有效、大批量地提取藻红蛋白。[方法]以坛紫菜为原料,采用溶胀法、化学试剂法和搅切法3种粗提技术,以藻红蛋白的提取得率、纯度和提取时间为参数对3种方法进行比较。[结果]溶胀法采用0.01mol/LTris-HCl（pH8.0）浸提9h,藻红蛋白得率为9.71mg/g,纯度（A565/A280）为0.45;化学试剂法在0.100mol/LSDS溶液作用4h时,藻红蛋白得率为24.35mg/g,纯度（A565/A280）为0.22左右;搅切法采用搅切速度18000r/min作用6min,藻红蛋白得率达到23.11mg/g,纯度（A565/A280）为0.30。[结论]综合比较,搅切法提取藻红蛋白效率高,藻红蛋白得率和纯度较好,处理量较大,是一种十分有效的粗提方法。     

条斑紫菜R-藻红蛋白酶解物的制备及其抗氧化和肿瘤细胞增殖抑制活性

【目的】研究木瓜蛋白酶对条斑紫菜R-藻红蛋白的抗氧化性和肿瘤增殖抑制活性的影响。【方法】采用超声波破壁法提取条斑紫菜R-藻红蛋白,用DEAE柱层析法纯化后进行木瓜蛋白酶酶解,通过正交试验设计,以还原力A700为考察指标确定酶解反应的最佳工艺参数,进一步测定获得的R-藻红蛋白及其酶解物的还原力、清除羟自由基能力和对人肉瘤细胞U2O及人肝癌细胞HepG-2的肿瘤增殖抑制活性。【结果】R-藻红蛋白的最佳酶解工艺条件为：木瓜蛋白酶添加量25 000 U•g-1,pH 7.0,温度50℃,酶解时间4 h。在此条件下,R-藻红蛋白酶解物还原力为0.573,较未酶解的R-藻红蛋白提高了2.35倍;清除羟自由基能力为51.03%,较未酶解的R-藻红蛋白活性提高了3.22倍。随着浓度的增加,R-藻红蛋白及其酶解物对人肉瘤细胞U2O和人肝癌细胞HepG-2抑制生长作用增强。R-藻红蛋白对人肉瘤细胞U2O抑制作用的IC50值为2 431.32 μg•mL-1,其酶解物IC50值降低为1 271.46 μg•mL-1。R-藻红蛋白对肝癌细胞HepG-2抑制作用的IC50值为1 593.61 μg•mL-1,其酶解物IC50值降低为512.05 μg•mL-1。【结论】经木瓜蛋白酶酶解后,R-藻红蛋白酶解物具有较强的抗氧化和抑瘤活性。酶解技术可作为进一步提高R-藻红蛋白生物活性的有效手段。     

响应面法优化提纯牛肉肌红蛋白

以牛背肌肉为原料,筛选Tris-HCl复合提取液pH、提取液浓度、提取时间、料液比、硫酸铵溶液饱和度等对肌红蛋白提取有影响的因素,并从中选出具有显著影响的因素(提取液pH、提取液浓度、硫酸铵溶液饱和度)进行响应面优化试验,确定牛肉肌红蛋白提取最优工艺参数提取液pH为8.15、硫酸铵溶液饱和度90.93%、提取时间1.63 h。对粗提蛋白进行纯化及层析交换分离,得到纯度较高的肌红蛋白含量2.14 mg/mL,总蛋白浓度2.39 mg/mL,样品纯度达到91.95%。     

坛紫菜藻红蛋白分离纯化研究

[目的]建立一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法,并对其分离机理进行探讨。[方法]以坛紫菜的藻红蛋白搅切法提取物为原料,首先通过100和500 kDa的超滤离心管对其进行超滤分离,再在Superose 12色谱柱上以不同种类和不同浓度的流动相对藻红蛋白粗提物进行等度洗脱,分析其分离机理,并优化分离条件。[结果]在0.05 mol/L NaCl等度洗脱的条件下,藻红蛋白在Superose12色谱柱上表现为典型的氢键吸附模式;在优化的条件下,通过超滤-Superose 12氢键吸附分离的方法,可以使坛紫菜藻红蛋白提取物纯度(A565/A280)达到7.98,总回收率52.9%。[结论]该研究结果表明藻红蛋白在Superose 12色谱柱上存在氢键吸附作用,同时,该研究所建立的超滤-Superose 12氢键吸附分离方法是一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法。     

Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺研究

[目的]建立Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺方法并验证其放大可行性。[方法]通过对洗脱条件、上样体积以及洗脱流速的优化,确定最佳分离工艺条件;在确定的工艺条件下,将上样体积与柱体积等比例放大。[结果]Q Sepharose FF分离藻红蛋白的最佳工艺条件为:将30 ml坛紫菜提取液加载到8 ml Q Sepharose FF柱上,以1 ml/min的流速使用添加0-0.10-0.35-1.00 mol/L NaCl的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH 6.0)分步洗脱,收集0.35 mol/L NaCl溶液洗脱时的色谱峰。在此条件下R-藻红蛋白的回收率和纯度系数(A565/A280)分别为44.3和1.15。按照该工艺,将75 ml藻红蛋白提取液加载到20 ml Q Sepharose FF柱上进行分离,发现分离效果没有发生明显变化。[结论]使用Q Sepharose FF介质能够分离坛紫菜提取液中的藻红蛋白且该工艺易于放大。     

Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺研究(英文)

[目的]建立Q Sepharose FF分离藻红蛋白的工艺方法并验证其放大可行性。[方法]通过对洗脱条件、上样体积以及洗脱流速的优化,确定最佳分离工艺条件;在确定的工艺条件下,将上样体积与柱体积等比例放大。[结果]Q Sepharose FF分离藻红蛋白的最佳工艺条件为:将30ml坛紫菜提取液加载到8ml Q Sepharose FF柱上,以1ml/min的流速使用添加0-0.10-0.35-1.00mol/LNaCl的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH6.0)分步洗脱,收集0.35mol/LNaCl溶液洗脱时的色谱峰。在些条件下,R-藻红蛋白的回收率和纯度系数(A565/A280)分别为44.3和1.15。按照该工艺,将75ml藻红蛋白提取液加载到20ml Q Sepharose FF柱上进行分离,发现分离效果没有发生明显变化。[结论]使用Q Sepharose FF介质能够分离坛紫菜提取液中的藻红蛋白且该工艺易于放大。     

粉末活性炭联合柱层析法纯化藻蓝蛋白的研究

以巢湖新鲜蓝藻藻泥为原料，通过冻融破壁的方法获得藻蓝蛋白粗提液，采用粉末活性炭法-羟基磷灰石柱层析法纯化藻蓝蛋白。在粉状活性炭法的研究中，通过单因素试验研究了粒径、添加量、藻蓝蛋白浓度和时间对藻蓝蛋白的提纯效果，并与羟基磷灰石柱层析法联用以优化高纯度藻蓝蛋白的提取纯化工艺组合。结果表明，粉末活性炭法纯化藻蓝蛋白的最优条件是粒径400~500目，藻蓝蛋白浓度1.0 mg·mL^-1，添加量100 g·L^-1和吸附时间15 min，经羟基磷灰石柱层析法纯化后，藻蓝蛋白纯度可达4.51，回收率为36%。     

条斑紫菜叶状体DNA提取方法的研究

以常用的植物基因组DNA提取方法—LiCl法、SDS法、CTAB法、高盐脲法和试剂盒法提取条斑紫菜叶状体DNA,对不同提取方法的效果进行了比较分析,同时探讨了SDS法的细胞破碎方法和不同样本量提取条斑紫菜DNA的效果。对DNA纯度、DNA浓度、DNA得率等分析表明,SDS法效果较好,其次是LiCl法;在使用SDS法时,液氮研磨破碎细胞效果好于其他方法;在小样本量提取DNA时,SDS法比LiCl法效果好。     

影响碱提酸沉法提取燕麦蛋白因素的分析

在单因素试验基础上,用Box-Behnken试验设计优化碱提酸沉法提取燕麦蛋白工艺参数,并用Design-Expert.V8.0.6进行响应面分析,建立二次多项式回归模型.结果表明,碱提酸沉法提取燕麦蛋白的最佳工艺为:pH10.11、液料比15.96、温度50.87℃、浸提时间93.56min,此时提取率64.23％,纯度86.4％,得到的燕麦蛋白的等电点为4.2,分离率94.65％.碱提酸沉法制备燕麦蛋白的pH不能超过11,否则会导致蛋白提取液颜色加深,产生异味.     

普通念珠藻(Nostoc commune Vauch.)藻蓝蛋白的提取

[目的]为普通念珠藻藻蓝蛋白的提取及开发提供试验及理论基础。[方法]以普通念珠藻为材料,比较藻体及细胞的破碎方法、提取液类型及饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响。[结果]结果表明:利用发酵法破碎藻体和细胞,0.05 mol/L的KP缓冲液(pH值7.2)作为提取液,经过30%~50%饱和硫酸铵盐析和DEAE-Toyopeal 650 S离子交换柱层析后,藻蓝蛋白纯度达2.51,最大紫外-可见吸收峰位于616 nm。[结论]普通念珠藻藻蓝蛋白分离提取较为理想的程序为:藻粉→0.05 mol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→发酵法破碎细胞→35%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S柱层析→较纯的藻蓝蛋白。     

良好农业规范在条斑紫菜中的应用研究

介绍了良好农业规范(GAP)的理念、其在国内的发展及在条斑紫菜中的应用现状,分析了在条斑紫菜养殖中推行GAP的重要意义,并提出了建议。     

条斑紫菜凝集素的提取及其性质研究

[目的]研究条斑紫菜（Porphyra yezoensis）凝集素的提取及分离纯化条件,并测定凝集素的性质。[方法]以比活力为指标,研究了缓冲体系、固液比、温度及时间等条件对条斑紫菜凝集素提取效果的影响。采用DEAE-Sepharose FF离子交换层析技术进行分离,确定了分离的最佳条件。以血凝集活性为指标,测定了凝集素的糖专一性、2价阳离子依赖性、温度及酸碱稳定性等性质。[结果]固液比为1∶5的Tris-HCl（25 mmol/L,pH值7.5）缓冲液在40℃条件下提取20 h得到的提取液具有最高比活力。条斑紫菜凝集素在50℃条件下加热30 min后活性保持不变,表现出一定的热稳定性,最适作用pH值为7～9。该凝集素能够与麦芽糖、半乳糖、阿拉伯糖及木糖结合,其中与麦芽糖的结合最强,凝集活性依赖Ca2＋、Mg2＋等2价阳离子。[结论]为阐明条斑紫菜的免疫机制及其高效综合利用提供了理论依据。     

条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因表达对重金属铅胁迫的响应

为了研究条斑紫菜的重金属解毒机制,分别采用Pb2+1、4、7、10 mg/L对条斑紫菜叶状体进行短期铅胁迫,同时,用10 mg/L的pb2+对叶状体进行持续铅胁迫,胁迫处理后提取总RNA并采用实时荧光定量PCR技术检测条斑紫菜半胱氨酸合成酶基因(PyCSase -B)的表达变化.结果显示,铅胁迫能迅速且显著诱导PyCS...     

米糠蛋白提取工艺的优化及其特性研究

 【目的】建立米糠蛋白在较弱碱性和较低温下保持其特性的高效提取工艺并明确其理化特性。【方法】采用二次通用旋转正交组合设计优化米糠蛋白提取的最佳工艺条件;米糠蛋白特性分别考察其在不同pH、温度、离子强度下的溶解性、乳化性和起泡性,其中,溶解度的测定采用凯氏定氮法,乳化性的测定采用离心法,起泡性的测定采用体积法。【结果】建立米糠蛋白的最佳提取条件为：以pH 11的弱碱性水溶液为溶剂,提取温度40℃,提取时间120 min,在此条件下蛋白提取率可达80.93%。米糠蛋白的溶解度在等电点附近达到最低并随温度升高而增大,离子会降低其溶解度;pH、温度、离子强度对乳化性的影响与其对溶解性的影响表现一致性,蛋白浓度越高其乳化性越好;等电点附近米糠蛋白具有最低的起泡性和最强的泡沫稳定性,适当的热处理可以增强其起泡能力,且随着离子和蛋白浓度的升高起泡能力明显增强。【结论】在较弱碱性（pH 11）和低温度（40℃）条件下提取米糠蛋白的得率可达80.93%,且所得米糠蛋白特性良好,显示出较好的应用前景。     

条斑紫菜叶状体色落症的初步研究

通过海区采样，运用光镜和电镜观察等实验方法，研究了条斑紫菜叶状体色落症，并对患病紫菜加工成的干品进行了初步的品质分析。光镜检查结果表明，患病藻体细胞的液泡很大，色素体萎缩或是挤向细胞边缘，藻体基部死亡细胞较多；电镜下患病藻体细胞的红藻淀粉颗粒增多。品质分析显示，患色落症干紫菜的总糖含量明显高于正常干紫菜，粗蛋白、脂肪、色素和游离氨基酸等指标均比正常干紫菜低，尤其是三种呈味氨基酸（Asp，Glu和Ala）所占比例非常低，由此造成紫菜品质低劣，对紫菜质量的影响较大。对健康藻体和患病藻体进行红外线活体吸收光谱的测定结果也表明，患色落症的藻体色素含量极低。用添加营养盐的海水对患色落症的藻体进行培养，发现6d后藻体色泽均有不同程度的恢复，藻体细胞也逐渐恢复到正常。     

条斑紫菜叶状体色落症的初步研究

通过海区采样，运用光镜和电镜观察等实验方法，研究了条斑紫菜叶状体色落症，并对患病紫菜加工成的干品进行了初步的品质分析。光镜检查结果表明，患病藻体细胞的液泡很大，色素体萎缩或是挤向细胞边缘，藻体基部死亡细胞较多；电镜下患病藻体细胞的红藻淀粉颗粒增多。品质分析显示，患色落症干紫菜的总糖含量明显高于正常干紫菜，粗蛋白、脂肪、色素和游离氨基酸等指标均比正常干紫菜低，尤其是三种呈味氨基酸（Asp，Glu和Ala）所占比例非常低，由此造成紫菜品质低劣，对紫菜质量的影响较大。对健康藻体和患病藻体进行红外线活体吸收光谱的测定结果也表明，患色落症的藻体色素含量极低。用添加营养盐的海水对患色落症的藻体进行培养，发现6d后藻体色泽均有不同程度的恢复，藻体细胞也逐渐恢复到正常。