4-烯-3-酮甾体衍生物对HepG2细胞的抑制作用研究

采用MTT法,研究了8个4-烯-3-酮甾体化合物对肝癌细胞HepG2生长抑制作用。7α,20β-二羟基-16,17α-环氧黄体酮（8）抑制作用最好,IC50值为92.5μg.mL-1。结果表明羟基化甾体的抗肿瘤活性与其化学结构密切相关。随受试物浓度的增加,对HepG2细胞的抑制作用均增强,但对HepG2细胞的效果存在差...     

总状毛霉对17α-羟基孕甾-4-烯-3,20-二肟的生物转化

为了获得具有较强生物学活性或结构新颖的羟基甾体肟衍生物,利用总状毛霉对合成的17α-羟基孕甾-4-烯-3,20-二肟进行转化研究。转化产物经柱层析分离纯化后鉴定为7α,17α-二羟基-20-肟-孕甾-4-烯-3-酮(3)和11α,17α-二羟基-20-肟-孕甾-4-烯-3-酮(4)。目前微生物转化甾体研究领域对于甾体肟的转化研究少见报道,研究结果为甾体肟衍生物的发展奠定了基础。     

齐墩果酸衍生物合成及抗肿瘤活性的研究

通过齐墩果酸氧化成3-氧代齐墩果酸,再与2,4-二硝基-苯肼反应合成了3-(2’,4’-二硝基)-苯腙齐墩果酸,采用MTT法测定了三个化合物体外抗肿瘤活性。方差分析的多重比较结果表明齐墩果酸及其衍生物对肺癌LTEP-α-2细胞均有抑制作用,3-氧代齐墩果酸的活性最高,其抑制率为90.0%,IC50为24.2μg·mL-1。     

3β,7α,11α-三羟基-孕甾-5-烯-20-酮-20-肟的合成

利用毛霉516对孕甾烯醇酮进行生物转化,得到了两个转化产物。通过IR、MS、1HNMR、13CNMR和2DNMR等波谱方法检测化合物结构,确证其结构分别为3β,7α,11α-三羟基-孕甾-5-烯-20-酮(2)和3β,7α,-二羟基-孕甾-5-烯-20-酮(3)。对生物转化产物(2)进行化学修饰,得到一个新化合物,通过波谱学方法,确证其结构为3β,7α,11α-三羟基-孕甾-5-烯-20-酮-20-肟(4)。     

沙门柏干酪青霉菌对妊娠烯醇酮肟的生物转化

从土壤中筛选得到一株能转化甾体肟的菌株,经形态鉴定及18S r DNA序列分析,鉴定为沙门柏干酪青霉菌。利用该菌株对妊娠烯醇酮肟进行生物转化,以期得到具有潜在活性的3-羟基-5-烯类甾体肟衍生物。通过红外、质谱和核磁共振分析确定了甾体肟转化产物的化学结构。研究结果表明沙门柏干酪青霉菌具有转化甾体肟的能力,对妊娠烯醇酮肟进行生物转化的主要产物为7ɑ-羟基甾体肟衍生物。     

17α-OH-孕甾-4-烯-3,20-二肟的合成与结构归属

利用甾体原料17α-OH黄体酮与盐酸羟胺反应,合成了17α-OH-孕甾-4-烯-3,20-二肟,并对其进行1H NMR和13C NMR检测,通过DEPT、HMBC、HSQC和1H-1H COSY等2D NMR技术将其1H NMR和13C NMR数据进行比较详细的解析和归属,指出其NMR特征。     

2株红树内生真菌共培养产生的甾醇类化合物的分离鉴定

将来自南海红树林的内生真菌E33和K38混合发酵共培养,从菌丝体中分离到9种代谢产物,利用波谱技术确定它们为:24-甲基胆甾-5,24(28)-二烯-3β,15β,19-三醇(化合物1)、24-甲基胆甾-5,24(28)-二烯-3β,19-二醇(化合物2)、3β,11α-二羟基麦角甾-8,24(28)-二烯-7-酮(化合物3)、(22E,24R)-麦角甾-5,22-二烯-3β-羟基-7-酮(化合物4)、(22E,24R)-6β-甲氧基麦角甾-7,22-二烯-3β,5α-二醇(化合物5)、22E,24R-25α,6α-环氧麦角甾-8(9)22-二烯-3β,7α-二醇(化合物6)及麦角甾醇、过氧化麦角甾醇和(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇,其中化合物1、2为首次从海洋红树林真菌里分离得到.化合物1～6以往未从单独发酵的两菌中分离得到.     

亚稀褶黑菇的化学成分研究

利用硅胶、RP-18和Sephadex LH-20等现代色谱分离手段,从亚稀褶黑菇(Russula sub-nigricans Hongo)子实体的甲醇提取物中分离纯化得到4个甾醇类化合物,1个神经酰胺类化合物,通过理化性质、波谱分析及与文献值分析对照,鉴定出它们分别是麦角甾-5,22-二烯-3β-醇、麦角甾-7-烯-3β-醇、5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、麦角甾-3β,5α,9α-三羟基-7,22-二烯-6-醇、(2S,3S,4R,2′R)-2-(2′-hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1,3,4-triol。     

鹿茸中甾体化合物的研究

鹿茸(Cornu Cervi pantotrichum)中甾体化合物的分析对于开发甾体激素类药物有重要意义。本文从鹿茸乙醚萃取物中分离出6种甾体化合物。经色谱—质谱分析,鉴定为:5(α)胆甾—7烯—3酮、胆甾—3.5—二烯、5(α)雄甾烷—1.3—二酮、胆甾烯酮以及分子量为366、430的甾族化合物。     

林生毛霉对孕甾烯醇酮的生物转化研究

利用林生毛霉对孕甾烯醇酮进行生物转化,得到了三个转化产物。经波谱学方法(IR、MS和2D NMR)分别鉴定为3β,7α-二羟基孕甾-5-烯-20-酮(2)、3β,7α,11α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮(3)和3β,7α,9α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮(4)。通过2D NMR技术对产物13C NMR数据进行了全归属,详细地解析了化合物4的结构。     

毛蚶中天然牛磺酸的提取和活性研究

[目的]提取和纯化毛蚶(Scapharca subcrenata)中的天然牛磺酸,并对其活性进行研究。[方法]采用薄层色谱法(TLC)对提取的牛磺酸纯度进行分析,并对其结构用红外光谱(IR)和核磁共振波谱(NMR)进行鉴定,然后对其细胞毒活性进行检测。[结果]毛蚶富含牛磺酸,对人白血病细胞HL-60、肝癌细胞SMMC-7721、肺癌细胞A-549、乳腺癌细胞MCF-7和结肠癌细胞SW480没有明显的细胞毒活性。[结论]该研究为天然牛磺酸的开发和利用提供了依据。     

食药用真菌翅鳞伞菌丝体蛋白活性的研究

对翅鳞伞菌丝体的胞内粗蛋白进行分离、纯化、筛选,获得了抗水稻纹枯病菌的翅鳞伞纯化菌丝体蛋白PSPB-2。通过荧光显微镜观察PSPB-2对人肺癌细胞株（A549）的影响,发现PSPB-2会引起A549出现典型的细胞凋亡现象。进一步研究发现PSPB-2有限制性核酸内切酶的活性。说明菌丝体蛋白PSPB-2具有抗真菌作用的同时又具有抗肿瘤作用。     

Synthesis and anticancer activity of (+)-nopinone-based 2-amino-3-cyanopyridines

Twelve (+)-nopinone-based 2-amino-3-cyanopyridines 4a–l were synthesized from (–)-β-pinene. The structures of these compounds were characterized by FT-IR, ¹H NMR, and ESI-MS. All the compounds were tested for their anticancer activity against lung cancer cell line A549, gastric cancer cell line MKN45 and breast cancer cell line MCF7 by MTT method, respectively. The results showed that compounds 4f, 4j and 4k had promising anticancer activity against these cancer cell lines, in particular, compound 4f exhibited broad-spectrum and highly efficient anticancer activity against cell lines A549, MKN45 and MCF7 with IC₅₀ of 23.78, 67.61 and 53.87 µmol·L⁻¹, respectively. The preliminary analysis of the structure activity relationship implied that the Br or Cl substituted group of the benzene ring in these derivatives significantly contributed to the anticancer activity.     

北沙参水提法不同提取物体外抗肿瘤的研究

［目的］研究北沙参水提法不同提取物的体外抗肿瘤活性。［方法］采用MTT法观察北沙参水提法乙醇处理后3种不同提取物对肺癌细胞株（A549）、胃癌细胞株（SGC）、肝癌细胞株（HEP）的体外药理作用。［结果］北沙参水提后醇溶物、水提后醇沉物和水提后滤渣醇溶物的不同浓度在体外对肝癌细胞株（HEP）均具有一定的抑制作用,北沙参水提后醇溶物和水提后醇沉物各浓度间无显著差异,水提后滤渣醇溶物在300.000 μg/ml时抑制率显著高于其他浓度;对肺癌细胞株（A549）,绝大部分浓度具有一定的抑制作用,水提后醇溶物浓度为37.500μg/ml时,抑制率显著高于其他浓度,水提后醇沉物各浓度间无显著差异,水提后滤渣醇溶物浓度为75.000μg/ml和18.750μg/ml时,抑制率显著高于其他浓度 而对胃癌细胞株（SGC）,只有水提后滤渣醇溶物在300.000μg/ml时具有抑制作用,且抑制率仅为6.340%,其他均没有抑制作用。［结论］北沙参水提乙醇处理后的3种提取物对肺癌细胞株（A549）和肝癌细胞株（HEP）在体外均有一定的抑制作用,但对胃癌细胞株（SGC）几乎没有抑制作用。     

鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究

【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2亚型病毒(AIV H9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。【结果】成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kD,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性;rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。IFN-α活性单位为200IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡和胚体出血,并能显著延长鸡胚存活时间,但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。合适剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内具有显著的抗病毒活性和免疫增强活性。【结论】rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性,这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础。     

番木瓜种子中异硫氰酸苄酯（BITC）的抑癌试验

利用MTT法检测番木瓜种子中的异硫氰酸苄酯(BITC)在体外对肝癌细胞等6种常见癌细胞的生长抑制率。结果表明,番木瓜种子提取物中BITC的浓度达到5μmol.L-1(相当于0.745mg.L-1)时,对人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人大肠癌HCT-8细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人前列腺癌DU-145细胞的生长抑制率均达到70%以上,其中,人肝癌细胞HepG2最敏感,cBITC=2.5μmol.L-1时抑制率可达87%,在cBITC=10μmol.L-1和5.0μmol.L-1时,人大肠癌HCT-8细胞的生长抑制率几乎相同。因此,BITC具有良好的抑癌效果。     

楮头红皂苷的抑菌效果和抗乙肝病毒活性

将楮头红醇提取物用正丁醇萃取,萃取物经硅胶柱层析和制备型高效液相色谱(PHPLC)纯化得一纯净物,通过IR、ESI-MS和13C NMR谱等分析,鉴定为呋甾烷型甾体皂苷,命名为楮头红皂苷A(SWSA),系首次从楮头红中提取得到.抑菌试验结果表明:SWSA对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、耶尔森氏菌和嗜水气单胞菌均有较好的抑制效果,其最小抑菌浓度分别为2.8、3.3、2.5和2.2 mg·m L-1;对大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌的抑制效果不明显.通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)试验检测SWSA对Hep G2.2.15细胞的毒性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组细胞培养上清液中HBs Ag和HBe Ag的水平,综合评价不同含量SWSA体外抗乙肝病毒(HBV)的活性.结果表明,SWSA处理Hep G2.2.15细胞后,HBs Ag和HBe Ag的表达均呈时间和剂量依赖性抑制,治疗指数分别为6.43和4.23,预示SWSA具有一定的体外抗HBV活性.     

表鱼藤酮对映体杀虫作用机理的研究

 【目的】阐明表鱼藤酮对映体（-）-5′α-表鱼藤酮与（+）-5′β-表鱼藤酮的杀虫作用与机理。【方法】以3龄家蚕幼虫为试虫，比较药剂处理24、72 h后中毒症状，及对线粒体呼吸酶复合体Ⅰ、Na+，K+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶、乙酰胆碱酯酶活性差异。【结果】表鱼藤酮对映体处理后的3龄家蚕幼虫中毒症状明显不同；对线粒体呼吸酶复合体Ⅰ都有抑制活性，5′α-表鱼藤酮、5′β-表鱼藤酮抑制中浓度IC50分别为7.81、54.14 mg•L-1；对家蚕头部Na+，K+-ATP酶都有抑制作用；5′β-表鱼藤酮对中肠Na+，K+-ATP酶表现为抑制作用，5′α-表鱼藤酮表现为激活作用；对琥珀酸脱氢酶5′α-表鱼藤酮有激活作用；对乙酰胆碱酯酶活性没有影响。【结论】表鱼藤酮对映体的毒力及对线粒体呼吸酶复合体Ⅰ抑制活性有差异；对映体间引起的中毒症状差异与线粒体呼吸酶复合体Ⅰ的结合方式和中肠Na+，K+-ATP酶，琥珀酸脱氢酶有关。