孕酮诱发马鹿精子顶体反应的研究

以马鹿为试验对象,采用上浮法诱导马鹿精子体外获能,以孕酮(P4)诱导顶体反应,旨在摸索出P4诱发马鹿精子顶体反应的最适宜体系.研究结果表明:0.5～1000μmol/L的P4可提高获能马鹿精子的顶体反应率;其中,1μmol/L与10μmol/L的P4可显著(P<0.05)促进马鹿精子发生顶体反应,并以10μmol/L的P4处理组的顶体反应率最高(74.44±0.71)%.10μmol/L的P4诱导获能马鹿精子顶体反应在10～20min的处理时间内均获得了较高的顶体反应率(均72.41%以上),并以处理10min的顶体反应率最高(78.40%).P4能促进获能马鹿精子的顶体反应,但不能显著(P>0.05)促进未获能马鹿精子的顶体反应.     

副性腺蛋白消化法和匀浆法获得中华绒螯蟹游离精子比较研究

为了获得中华绒螯蟹形态良好及最佳生理状态的游离精子,采用副性腺蛋白消化法和机械匀浆法获取中华绒螯蟹精子,比较两种方法所得精子的密度和成活率,并用80μg/mL的钙载体A23187对所得精子进行诱导,比较两种方法所得精子诱导后的顶体反应率,以及精子顶体反应各时期的比例。结果显示:副性腺蛋白消化法获得的精子密度为(1.83±0.87)×108/mL,成活率为(99.37±0.11)%,均显著高于机械匀浆法(P0.05)。室温诱导30min后,副性腺蛋白消化法所得精子的顶体反应率为(51.77±31.18)%,是自发顶体率的2.97倍。匀浆法所得精子的顶体反应率为(74.54±13.84)%,与自发顶体率相比无显著差异(P0.05)。此外,由于匀浆法对精子膜的损伤,其所得精子中发生顶体反应的精子多处于第III时期,比例为(70.41±25.81)%,能够进入第IV时期的比例仅为(21.16±22.45)%,而副性腺蛋白消化法所得精子中发生顶体反应的精子多处于第IV时期,比例为(69.09±9.29)%。表明,通过副性腺蛋白消化法获得中华绒螯蟹精子的方法显著优于机械匀浆法。     

不同获能方法对冻融塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同获能方法对塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,冻融塔里木马鹿精子随机分为4组,用钙离子载体、肝素、咖啡因和 Percool 离心4种方法进行精子获能的诱导,利用金霉素（CTC）染色法评价精子获能状态,采用 SDS-PAGE 分离精子膜蛋白,进行 Western blotting 免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平.结果显示,冻融精子经4种精子获能方法处理后,肝素诱发的精子获能率显著高于钙离子载体组和 Percool 组（P ＜0．05）.钙离子载体组、肝素组和咖啡因组精子蛋白酪氨酸磷酸化水平高于 Percool 组和对照组.另外,冻融精子随着上游处理及肝素诱导获能的进行,检测到分子量分别为14,25~30,40,47,55 ku 的酪氨酸磷酸化蛋白,这些蛋白的酪氨酸磷酸化水平在获能60~120 min 期间相对较高,而且此时精子获能率及超激活运动精子比例也显著提高（P ＜0．05）.结果提示,肝素可以较好的诱导马鹿精子获能,马鹿精子获能与蛋白酪氨酸磷酸化相关.     

不同培养体系及肝素剂量对Boer山羊精子体外获能的研究

用S ,D ,B 3种培养体系对Boer山羊精子进行体外获能 ,肝素添加剂量设 5个水平 .获能处理前先进行活精子分离 ,然后按试验之需 ,用含有肝素的培养液获能处理 ,获能后用溶血磷脂酰胆碱 (LC)诱导顶体反应 (AR) ,TG染色法测得有顶体反应的活精子作为评价精子获能的指标 .试验结果表明 ,(1)S培养液效果最好 ,4h的顶体反应率达 6 0 .88% ,与D ,B培养液的获能效果相比 ,差异极显著 (P <0 0 1) .(2 )肝素的添加剂量以 15mg·L-1和 2 0mg·L-1的效果最好 ,与其它处理组的效果相比差异显著 (P <0 0 5 ) ,但这 2个水平间的效果差异不显著 (P >0 0 5 ) .     

藏红花素对冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡的影响

本研究的主要目的是评估藏红花素(crocin)对冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡的影响。试验分对照组和藏红花素处理组(浓度分别为0.5、1、1.5和2 mmol/L),样本冻融处理后分别检测了获能参数、抗氧化相关基因及抗凋亡相关基因mRNA的表达。结果显示:1)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子质量较佳,与对照组无显著差异而与其他处理组相比差异显著;(2)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子获能处理后蛋白磷酸化水平显著高于其他处组(P0.05);3)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子抗氧化相关基因CAT与GPX基因mRNA的表达量显著高于其它组(P0.05);4)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子凋亡相关基因Caspase-3,TNF-α基因mRNA表达量显著低于其他组(P0.05)。结论:牛精子冻融前藏红花素处理显著改善冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡能力,添加量0.5 mmol/L藏红花素效果最佳。     

维生素E和谷氨酰胺对兔精液获能的影响及获能相关基因的表达

为了探讨不同质量浓度维生素E和谷氨酰胺(glutamine,Gln)对精子获能的影响,以及与获能有关的关键基因在获能后相对表达量的差异,在获能液中加入不同质量浓度的维生素E(0、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/m L)或Gln(0、5、10、15、20 mg/m L),并分别将其与精子悬液一同培养,以孕酮诱导顶体反应,通过涂片染色镜检得到顶体发生率;采用实时荧光定量PCR得到获能相关基因蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和ACP6(acid phosphatase 6,lysophosphatidic)在获能后的表达。结果表明,添加质量浓度为1.0 mg/m L的维生素E对精子顶体发生率的影响显著高于其他组别(P0.05);添加质量浓度为15 mg/m L的Gln,精子顶体发生率显著高于其他组别(P0.05);与空白对照组相比,维生素E最佳质量浓度处理组(1.0 mg/m L)的PRKACB和ACP6基因的相对表达量显著性降低(P0.05);Gln最佳质量浓度处理组(15 mg/m L)处理后,基因PRKACB、ACP6在获能后的相对表达量高于空白对照组,但差异不显著(P0.05)。可见,获能液中添加维生素E和Gln对兔精子获能具有一定影响。     

牛精子原位杂交DTT去凝集条件优化

[目的]确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时同.[方法]牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用0、5、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、30、45和60 min4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积.[结果]40 mmol/L DTT处理45min精子头部面积为(52.32±4.68 )μm2,浓度＜ 40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间＜45 min的6个处理组,精子头部面积小于(52.32±4.68) μm2(p＜ 0.01);浓度＞40 mmol/L、时间≥45 min的5个处理组,精子头部面积与40 mmol/L DTT 45 min组差异不显著(P＞0.05),但精子形态不完整.[结论]40mmol/L DTT 45 min为较优处理组合.     

原花青素和茶多酚对兔精子获能的影响

为探究原花青素和茶多酚对新西兰大白兔精子获能效果及其获能相关基因在获能前后表达差异的影响,在获能液中加入不同浓度(分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0 mg·mL~(-1))的原花青素或茶多酚,与精液悬浮培养,以孕酮诱导顶体反应,并采用实时荧光定量PCR技术检测获能相关基因——蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和酸性磷酸酶6 (ACP6)在获能前后的表达差异。结果表明:兔精子获能液中原花青素的最适添加量为1.0 mg·mL~(-1),在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则原花青素最佳处理组ACP6和PRKACB的相对表达量分别为1.41和3.12,显著高于对照组;茶多酚的最适添加量为1.0 mg·mL~(-1),在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理组,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则茶多酚最佳处理组ACP6和PRKACB的相对表达量分别为1.81和1.88,显著高于对照组。综合而言,兔精子获能液中原花青素或茶多酚的适宜添加量均为1.0 mg·mL~(-1)时,在此浓度下,精子顶体反应率较高, ACP和PKA活性增强。     

不同冻精处理方法和添加咖啡因对牛体外受精的影响

【目的】为了探讨不同冻精处理方法以及添加精子活力激活剂并孵育不同时间获能对体外受精及受精卵发育的影响。【方法】研究对体外受精前的牛冷冻精液分别采用直接离心法、上游法和Percoll法3种方法处理,并对处理后的精液分别用含2.5mM或5.0mM咖啡因的获能液(BO液 10μg/ml肝素钠)在培养箱内预先孵育10min或30min进行获能,不同处理的精子经体外受精后。【结果】结果表明:(1)3种冻精处理方法(直接离心洗涤法、上游法、Percoll法)对精子处理获能,IVF后受精卵的卵裂率(依次为51.58%、52.83%、53.20%)均无显著差异(P>0.05);桑椹胚、囊胚发育率Percoll法处理组(16.66%、10.18%)与上游法处理组(17.85%、16.07%)以及Percoll法处理组与直接离心洗涤法组(8.77%、7.01%)均无统计学差异(P>0.05),同时实验结果还表现出上游法处理组比Percoll处理组的桑囊胚率有所提高,且上游法处理组与洗涤法处理组在桑、囊率上出现了显著差异(P<0.05)。(2)获能液中添加咖啡因组比非添加组(对照组)卵裂率和桑囊胚率有所增加,其中添加5.0mM咖啡因组精子孵育30min的获能效果最佳,卵裂率、桑囊率达到68.59%、28.50%。【结论】以上结果表明上游法处理牛冷冻精液稍优,更有利于以后的受精卵发育;添加咖啡因能提高精子活力,且高浓度的咖啡因维持精子高活力持续时间较长。     

Na+、 K+、 Ca2+、葡萄糖、 pH、温度对北方须鳅精子活力的影响

为了解北方须鳅 Barbatula barbatula nuda精子的生理特性, 研究了不同离子浓度、葡萄糖浓度、pH、温度等因子的变化对性成熟北方须鳅 (体质量为10～38 g) 精子活力的影响.结果表明: Na+浓度为68 mmol/L时, 北方须鳅精子活力最强, 快速运动时间 ( FT)、寿命 ( LT)、激活率分别为 ( 77± 23) s、(495±154) s、 95%; K+浓度为80 mmol/L时, 精子活力最强, FT、 LT和激活率分别为 (68±10) s、 (412± 162) s和95%; Ca2+浓度为50 mmol/L时, 精子活力最强, FT、 LT和激活率分别为 (77± 13) s、 ( 281± 26) s和95%; 葡萄糖浓度为180 mmol/L时, 北方须鳅精子活力最强, FT、 LT 和激活率分别为 ( 88 ± 11) s、 (272±34) s和90%; 在Tris或甘油溶液中, FT、 LT和激活率均小于对照组; pH 为3. 0～5. 0时精子不运动, pH为7. 0时精子活力最强, FT、 LT和激活率分别为 (87±11) s、 (128±17) s、 90%; 温度为5～20 ℃时, 精子活力变化不显著; 混合激活液A ( Na+ 68 mmol/L、 K+ 80 mmol/L 2种离子溶液的体积比为1 ∶ 1) 及激活液B (Na+ 68 mmol/L、 K+ 80 mmol/L、 Ca2+ 50 mmol/L、葡萄糖180 mmol/L 4种离子溶液的体积比为1 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1) 皆能提高精子活力, 其FT、 LT、精子激活率分别为 (91±16) s、 (552±90) s、95%, 以及 (112±17) s、 (707±60) s、 95%.研究表明, 北方须鳅精子适宜的温度为5～20 ℃, 适宜pH为7. 0～8. 0, Na+、 K+、 Ca2+、葡萄糖对北方须鳅精子活力有增强效果, 混合激活液B ( Na+ 68 mmol/L、K+80 mmol/L、 Ca2+50 mmol/L、葡萄糖180 mmol/L 4种离子溶液的体积比为1 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1) 效果最佳.     

3种抗凋亡试剂在猪精液常温保存中的应用效果

将抗凋亡试剂葛根素(0、0.02、0.10、0.50、2.50 mmol/L)、酒石酸美托洛尔(0、0.02、0.10、0.50、2.50 mmol/L)、二氯乙酸钠(0、0.04、0.20、1.00、5.00 mmol/L)加入稀释液中,探讨它们在猪精液常温保存中的效果。结果表明:0.50 mmol/L葛根素可以延长精子保存时间及存活指数(P0.05);0.50 mmol/L酒石酸美托洛尔能降低精子畸形率(P0.05);5.00 mmol/L二氯乙酸钠可以缩短精子存活时间和存活指数(P0.05)。总之,合适浓度的葛根素或酒石酸美托洛尔可以显著提高猪精液常温保存后的品质,而二氯乙酸钠对猪精液常温保存效果没有明显的改善作用。     

江鳕精子在不同激活液中的活力测定

为提高江鳕的受精率,进行了Na+、Ca2+、pH和葡萄糖溶液对额尔齐斯河江鳕精子活力的影响试验。结果表明:在Na+溶液中,浓度为45mmol/L时精子激活率达90%,且精子快速运动时间(FT)、精子寿命时间(LT)均最高,分别为(44.25±1.72)s和(77.42±1.55)s。在Ca2+溶液中精子活力最高值出现在30mmol/L,其激活率为90%,FT、LT分别为(35.43±3.1)s、(59.98±2.2)s。在葡萄糖135mmol/L溶液中精子FT、LT最高,分别为(80.05±3.7)s和(120.09±5.33)s,精子激活率为90%。pH 8~8.5时,精子激活率高于80%;pH 8.5时FT最高,为(31.53±1.7)s;LT最高值出现在pH 7.5时,为(41.26±2.99)s。江鳕精子适宜存活于pH 8~8.5弱碱性环境中,葡萄糖溶液作为激活介质的精子活力好于Na+和Ca2+。     

海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护效果的影响

比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖组获能处理前后的精子获能率分别为(3.68±0.07)%和(41.82±0.56)%,显著优于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05)。说明海藻糖对猪精液冷冻保护的效果最好,最佳添加水平为0.035 g/mL。     

pH、盐度及K+、Ca2+和葡萄糖对萨罗罗非鱼精子活力的影响

[目的]确定萨罗罗非鱼精子活力最高时各因子的最佳参数,进一步提高尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂的受精率.[方法]利用显微镜观察对比不同梯度pH、盐度、离子及葡萄糖溶液中萨罗罗非鱼精子的活力状况,考察指标包括精子快速运动时间、寿命及激活率.[结果]pH 7.5～8.0时,萨罗罗非鱼精子激活率最高,达90％;在pH 7.5的条件下,精子快速运动时间和寿命最长,为66.33±2.25和933.17±25.79 s.在25‰～32‰的盐度范围内,萨罗罗非鱼精子活力较强,其中以30‰的精子活力最高,快速运动时间和寿命分别为63.50±2.35和402.50±7.31 s,激活率达90％.随K+浓度的增加,萨罗罗非鱼精子的快速运动时间、寿命及激活率均呈先升高后降低的变化趋势,其中以75mmol/L的精子活力最高,精子寿命为500.33±8.69 s,激活率为90％.Ca2+对萨罗罗非鱼精子活力有明显抑制作用,其浓度为37.8 mmol/L时精子快速运动时间和寿命最长,分别为38.50±2.43和117.50±3.21 s,精子激活率为80％;而后随Ca2+浓度的增加,精子开始出现聚集现象,活力明显下降,Ca2+浓度增至151.2mmol/L时,精子已完全失活.相对于K+和Ca2+,葡萄糖可适当延长萨罗罗非鱼精子寿命,其浓度为150mmol/L时,精子寿命最长,为281.00±5.90 s,激活率达90％.[结论]针对尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂人工繁殖中受精率低的问题,生产上除了选择优质尼罗罗非鱼卵细胞、优化孵化环境及人工繁殖技术外,还可通过适宜游动介质参数(pH 7.5～8.0、盐度30‰～32‰、75～100mmol/LK+、37.8 mmol/L Ca2+、100～125mmol/L葡萄糖)激活萨罗罗非鱼精子活力,进而提高其杂交受精率.     

pH、盐度及K+、Ca2+和葡萄糖对萨罗罗非鱼精子活力的影响

【目的】确定萨罗罗非鱼精子活力最高时各因子的最佳参数,进一步提高尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂的受精率。【方法】利用显微镜观察对比不同梯度pH、盐度、离子及葡萄糖溶液中萨罗罗非鱼精子的活力状况,考察指标包括精子快速运动时间、寿命及激活率。【结果】pH 7.5~8.0时,萨罗罗非鱼精子激活率最高,达90%;在pH 7.5的条件下,精子快速运动时间和寿命最长,为66.33±2.25和933.17±25.79 s。在25‰~32‰的盐度范围内,萨罗罗非鱼精子活力较强,其中以30‰的精子活力最高,快速运动时间和寿命分别为63.50±2.35和402.50±7.31 s,激活率达90%。随K+浓度的增加,萨罗罗非鱼精子的快速运动时间、寿命及激活率均呈先升高后降低的变化趋势,其中以75 mmol/L的精子活力最高,精子寿命为500.33±8.69 s,激活率为90%。Ca2+对萨罗罗非鱼精子活力有明显抑制作用,其浓度为37.8 mmol/L时精子快速运动时间和寿命最长,分别为38.50±2.43和117.50±3.21 s,精子激活率为80%;而后随Ca2+浓度的增加,精子开始出现聚集现象,活力明显下降,Ca2+浓度增至151.2 mmol/L时,精子已完全失活。相对于K+和Ca2+,葡萄糖可适当延长萨罗罗非鱼精子寿命,其浓度为150 mmol/L时,精子寿命最长,为281.00±5.90 s,激活率达90%。【结论】针对尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂人工繁殖中受精率低的问题,生产上除了选择优质尼罗罗非鱼卵细胞、优化孵化环境及人工繁殖技术外,还可通过适宜游动介质参数(pH 7.5~8.0、盐度30‰~32‰、75~100 mmol/L K+、37.8 mmol/L Ca2+、100~125mmol/L葡萄糖)激活萨罗罗非鱼精子活力,进而提高其杂交受精率。     

褐牙鲆精子生理特性及超低温冷冻保存

对褐牙鲆精子部分生理特性进行了研究,结果表明,褐牙鲆精浆pH值为(7.90±0.26),精子密度为(1.03×1010)/mL,精浆渗透压为(308.50±7.85) m Osm/kg,K+在精浆中的浓度为 (27±3) mmol/L,Na+在精浆中的浓度为(71±5) mmol/L.对不同盐度和pH与褐牙鲆精子活力和寿命的关系进行了研究,结果表明,在盐度为35,pH为8.0时,精子的活力最高,分别达到(93.33±5.67)%和(89±3.33)%,与其生活环境相适应;褐牙鲆精子寿命为(23±2) min,与已报道其它海水鱼精子寿命相近.分别采用室温(25 ℃)和低温(4 ℃)保存精子,发现精子在室温条件下,可存活4 d,在低温条件下可以存活7 d,证明低温可有效延长精子存活时间.另外,分别采用4种不同稀释液(S1、S2、S3、S4)与4种不同抗冻剂(DMSO、EG、Gly、PG)配制成冷冻保存液对褐牙鲆精子进行超低温冷冻保存研究.结果表明,以S3液作为稀释液,16%的DMSO作为抗冻剂,利用快速降温法对精子进行超低温冷冻保存,38 ℃水浴快速解冻,解冻后的精子获得最高的活力为(84±3.67)%,此方法可用于褐牙鲆精子的长期保存.     

外源γ-氨基丁酸(GABA)对盐胁迫下西伯利亚白刺光合特性的影响

本研究以西伯利亚白刺为试验材料,分析了100～400 mmol/L NaCl胁迫下施加不同浓度(0～15 mmol/L)γ-氨基丁酸(GABA)对西伯利亚白刺叶片叶绿素含量(Chl)、净光合速率(P_n)、蒸腾速率(T_r)、气孔导度(G_s),胞间CO_2浓度(C_i)、PSII最大光化学效率(F_v/F_m)、PSII实际光化学效率(φPSII)、光化学淬灭系数(qP)、非光化学淬灭系数(NPQ)及Mg~(2+)-ATPase活性的影响。结果表明,在不施加外源GABA条件下,与对照相比,低浓度NaCl(≤300 mmol/L)处理可提高西伯利亚白刺叶片P_n、T_r、G_s,降低C_i、Chl,同时随着NaCl浓度的增加,西伯利亚白刺叶片F_v/F_m、φPSII、qP均增加,NPQ下降。在不施加外源GABA条件下,400 mmol/L NaCl处理的西伯利亚白刺叶片Chl、P_n、T_r、F_v/F_m、φPSII、qP及Mg~(2+)-ATPase活性与对照相比均下降,而C_i、NPQ增加。与不施加外源GABA处理相比,施加5 mmol/L、10 mmol/L GABA对NaCl胁迫下西伯利亚白刺叶片P_n、F_v/F_m、qP有明显的促进作用,然而施加15 mmol/L GABA的促进效果不明显,甚至出现不同程度的抑制。可见,与对照相比,NaCl浓度≤300 mmol/L时,施加5 mmol/L、10 mmol/L外源GABA对西伯利亚白刺P_n、T_r、F_v/F_m、φPSII、qP有明显的促进效应,当NaCl浓度300 mmol/L时,外源GABA对盐胁迫下西伯利亚白刺光合作用的促进效果不明显,甚至会抑制光合作用。     

重金属铬对体外培养猪精子活力及蛋白磷酸化水平的影响

为探究铬元素在猪精子体外获能培养过程中,对猪精子活力、蛋白磷酸化信号通路的影响,研究采取八头杜洛克猪新鲜精液,分别在体外获能培养液中添加不同浓度的6价铬离子(0、0.1、0.5、1、2、10、100μmol/mL)以及双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)、异丁基黄嘌呤(IBMX)、PKA抑制剂(H-89)等cAMP-PKAs信号通路调节因子进行调控培养2h。利用精子活力计算机检测(CASA)、蛋白质免疫印迹(WB)技术,分析测定猪精子体外铬暴露获能培养过程中精子活力、蛋白磷酸化水平,并用相应试剂盒检测细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性、腺苷-3′,5′-环化一磷酸(cAMP)及ATP水平。结果表明:铬离子对猪精子活力、蛋白磷酸化水平有抑制作用,且随铬离子浓度增加抑制作用增强。当铬浓度达到2μmol/mL时精子活力MOT(58.4%)显著低于获能培养组(73.6%)(P0.05);10μmol/mL铬处理明显抑制蛋白磷酸化水平,且细胞内GAPDH活性、cAMP及ATP水平显著降低(P0.05)。而10μmol/mL铬处理中分别添加葡萄糖(5.0μmol/mL)及dbcAMP(1.0 mmol/L)和IBMX(0.1 mmol/L),能缓解铬对蛋白酪氨酸磷酸化(PTP)、蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸化(P-PKAs)及GAPDH活性的抑制作用。结果提示铬可能是通过干扰糖代谢及cAMP/PKA信号通路影响猪精子活力及蛋白磷酸化水平。本研究首次探究了体外培养过程中铬离子对家畜精子活力的影响,并初步探究了其作用机理,为进一步研究铬离子引起繁殖毒性的分子机制及家畜繁育提供一定的理论基础。     

PAF对长白猪精子活率及顶体反应率的影响

将人工采集的长白猪精液分为六组,其中一组为空白对照组,其余五组为实验组,分别加入5、10、25、50和100ns/ml的血小板活化因子(plarelet—activating factlr,PAF),于37℃恒温水浴锅中温育5,15,25,35,45,60min。显微镜下检测精子活率,同时作精子涂片,经固定染色后测算顶体反应率(Acrosomcreactloll,AR)。结果表明,(1)、PAF浓度为10ng/ml的实验组与对照组相比,在温育15—60rain期间,精子活率都极显著提高(P<0．01)；(2)、PAF浓度为5ng/ml的实验组与对照组相比,在温育25～45min期间,精子活率都极显著提高(P＜0．01)；(3)PAF浓度为5、10、25和50ng/ml组的精子在温育60min内顶体反应率均极显著高于对照组(P＜0．01)；(4)浓度为100ng/ml的PAF组与对照组相比,顶体反应率差异不显著(P＞0．05),表明一定浓度的PAF可提高长白猪精子的活率及顶体反应率。     

不同获能液对猪精子获能效果的初步观察

为了探讨不同获能液对猪精子获能效果的影响,以新鲜猪精液为材料,进行mTBM＋咖啡因、mTBM＋咖啡因＋BSA,mTBM＋肝素三种获能液获能效果的比较。利用金霉素荧光染色法对其获能效果进行检验。结果表明,mTBM＋肝素组诱发B型（获能）精子率极显著高于mTBM＋咖啡因组（P〈0.01）,显著高于mTBM＋咖啡因＋BSA组（P〈0.05）;三种获能液诱发的AR型（顶体反应）精子率差异不显著（P〉0.05）。说明,添加肝素更有助于提高猪精子获能效果。